[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公开说明书
[11]公开号CN 1587376A [43]公开日2005年3月2日
[21]申请号200410058016.4[22]申请日2004.08.06
[21]申请号200410058016.4
[71]申请人中国农业大学
地址100094北京市海淀区圆明园西路2号
[72]发明人张龙 阎跃英 石旺鹏 班丽萍 [74]专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司代理人关畅
[51]Int.CI 7C12N 1/14A01N 63/02
权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 1 页
[54]发明名称
[57]摘要
本发明公开了蜡蚧轮枝菌及其培养方法与应用，
目的是提供一种防虫效果好的蜡蚧轮枝菌产品。本
发明所提供的菌株为蜡蚧轮枝菌(Verticillium le canii)Verle(Bj085－1)CGMCC №1187，该菌株的
培养方法是将菌株接种固体培养基中，在温度为23－
25℃，相对湿度为85％－90％的条件下培养得到蜡
蚧轮枝菌产品。所述固体培养基优选为煮半熟的大
米。可以将培养所得产品制成以该菌株为活性成分
的杀虫剂。本发明的蜡蚧轮枝菌菌株对我国温室白
粉虱和蚜虫有良好的防治效果。该菌株液体发酵工
艺生产中所用原料便宜、来源广、生产工艺较为简
单，而且生产过程无污染性废料、废渣和废气产生，
200410058016.4权 利 要 求 书第1/1页 1、蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)Verle(Bj085-1)CGMCC №1 187。
2、一种培养权利要求1所述的蜡蚧轮枝菌的方法，将菌株接种固体培养基中，
在温度为23-25℃，相对湿度为85％-90％的条件下培养得到蜡蚧轮枝菌产品。
3、根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述固体培养基为煮半熟的大米。
4、根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述培养温度为2 5℃。
5、根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述培养的相对湿度为90％。
6、以权利要求1所述蜡蚧轮枝菌为活性成分的杀虫剂。
200410058016.4说 明 书第1/3页
蜡蚧轮枝菌及其培养方法与应用
技术领域
本发明涉及蜡蚧轮枝菌及其培养方法与应用，特别是涉及蜡蚧轮枝菌及其培养方法与在杀虫剂中的应用。
背景技术
蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)既可寄生于白粉虱、蚜虫、蚧、鞘翅目、鳞翅目等害虫，还可以寄生于锈病、立枯病病菌、白粉病等植物病菌，并且遗传稳定性较好，对人、植物、畜、禽均未发现有毒害，对天敌昆虫安全，因此在防治保护地菜虫中具有重要潜力。
发明内容
本发明的目的是提供一种新的蜡蚧轮枝菌及其培养方法。
本发明所提供的蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)Verle(Bj085-1)已于2004年07月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称C G M C C)，保藏号为CGMCC № 1187。
在光学显微镜(400倍)可以看到在该菌株的菌丝上长着分生孢子梗，分生孢子梗直立，锥形瓶梗轮生于菌丝体中间或顶部。分生孢子呈椭圆形，大小为2.3-6.4×1.5微米。在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上菌株的菌落为圆形、白，菌落中央隆起呈笠状。本发明的菌株Bj085-1与现有的已知菌株相比，更耐低温，温度范围在10-15摄氏度，分生孢子萌发率可达43-89％(24小时)。该菌株以5百万个孢子接种2龄温室白粉虱，7天后，致死率为87％以上，比未经单孢分离的原菌株致病力提高15-20％。 蜡蚧轮枝菌Verle(Bj085-1)的培养方法，是将菌株接种于固体培养基中，在温度为23-25℃，相对湿度为85％-90％的条件下培养得到蜡蚧轮枝菌产品。所述固体培养基优选的是煮半熟的大米。
其中，优选培养温度为23℃；相对湿度优选为90％。
本发明的另一个目的是提供一种以本发明菌株为活性成分的杀虫剂。 将培养得到的产品经粉碎、包装为孢子粉产品保存于0℃-15℃环境中，保存时间可达6个月左右。作为杀虫剂使用时，将该孢子粉配制为液体后喷雾使用。 本发明固体培养蜡蚧轮枝菌的工艺流程如图1所示。本发明的蜡蚧轮枝菌菌株是分离得到的新菌株，对温室白粉虱和蚜虫有良好的防治效果。该蜡蚧轮枝菌固体发酵工艺简单，所用原
料便宜、来源广，而且生产过程无污染性废料、废渣和废气产生，
环保。用该产品防治温室白粉虱和蚜虫等害虫，可以减少化学农药对蔬菜和环境的污染，而且对人畜十分安全，保证蔬菜的无公害生产。温室白粉虱和蚜虫是我国蔬菜特别是保护地蔬菜生产中的主要害虫，发生面积广大、危害严重，因此本发明的杀虫剂产品具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为固体培养蜡蚧轮枝菌的工艺流程图。
具体实施方式
实施例1、筛选蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)Verle(Bj085-1)CGMCC №1187
将患有蜡蚧轮枝菌病的北京地区温室中的白粉虱尸体经过70％酒精浸泡表面消毒后，放于100％相对湿度、23℃条件下培养，长出菌丝体后，用接种针挑出菌丝并接种在PDA培养基上，在23℃下继续培养15天-20天，按常规方法进行单孢分离、培养，得到纯的、致病力强的菌株蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)Verle(Bj085-1) CGMCC № 1187。
对得到的菌株进行生物测定，在实验室种中挑选3-4龄无病的温室白粉虱若虫作为试虫。把若虫接在番
茄幼苗上，并用扎眼透气的塑料口杯罩住，防止试虫外逃。按生物测定的实验规则，将蜡蚧轮枝菌产品用无菌水稀释为5个浓度，分别为104、105、106、107、108；以无菌水为阴性对照。孢子悬浮液和对照中均加入1％吐温-20。每个剂量进行3次重复，每次重复30头试虫，按下述方法进行接种：用微量注射器吸取0.1ml的蜡蚧轮枝菌孢子悬浮液，滴于虫体表面，待虫体表面干后，放回番茄苗上，盖好塑料口杯，放于相对湿度为90％以上的光照培养箱中，在23℃-25℃下每天光照培养12小时，暗培养12小时。每天记录观察试虫的死亡率。
结果表明，接种9天后，各处理的校正死亡率分别为，74.07％±4.15；60.71％±4.75；55.71％±9.81；48.57％±8.21；38％±5.58。
实施例2、培养蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)Verle(Bj085-1)CGMCC №1187
采用固体酵大量生产蜡蚧轮枝菌：首先将大米煮半熟，风干后装于30×20c m耐高压塑料袋中，每袋装200克，在100℃和15磅压力条件下灭菌0.5h。将活化后的蜡蚧轮枝菌Verle(Bj085-1)用无菌水稀释至浓度为107孢子/毫升孢子悬浮液，无菌条件下将150毫升悬浮液接种在灭菌处理后的大米上，在23℃、相对湿度为90％条件下培养20天。
将培养所得菌株置于阴凉处干燥3天，之后将带有蜡蚧轮枝菌菌丝和分生孢子的
培养基放于粉碎机中，粉碎后过80目筛，装于塑料袋中，之后保存于0℃-15℃环境中，可保存6个月。
实施例3、培养蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)Verle(Bj085-1)CGMCC №1187
培养方式同实施例2，不同之处在于培养温度为25℃、相对湿度为85％，培养15天后得到蜡蚧轮枝菌产品。
实施例4、蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)Verle(Bj085-1)CGMCC № 1187防治温室白粉虱
在温室白粉虱发生时，将实施例2所得蜡蚧轮枝菌产品取出，在室温下用水配置成5×107孢子/毫升孢子悬浮液，以清水为对照，分两次喷雾，间隔7天，每次喷雾1000ml/亩。第二次喷雾后10天，喷本发明杀虫剂的，害虫大量死亡，较对照高出80％。
实施例5、蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)Verle(Bj085-1)CGMCC № 1187防治蚜虫
在蚜虫发生时，将实施例2所得蜡蚧轮枝菌产品取出，在室温下用水配置成5×107孢子/毫升孢子悬浮液，以清水为对照，分两次喷雾，间隔7天，每次喷雾1000/亩m l。第二次喷雾后10天，喷本发明杀虫剂的，害虫大量死亡，较对照高出76％。
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