(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710363834.2
(22)申请日 2017.05.22
(71)申请人 中国农业大学
地址 100193 北京市海淀区圆明园西路2号
(72)发明人 袁芳 邰克东 何晓叶 高彦祥
毛立科
(74)专利代理机构 北京众合诚成知识产权代理
有限公司 11246
代理人 张文宝
(51)Int.Cl.
A61K 9/127(2006.01)
A61K 31/352(2006.01)
A61K 47/28(2006.01)
A61K 47/24(2006.01)
A61P 35/00(2006.01)
(54)发明名称
法
(57)摘要
本发明公开了一种阿可拉定脂质体口服制
剂及其制备方法。采用薄膜分散结合冰浴超声或
者高压均质乳化处理，制备阿可拉定脂质体口服
制剂。制剂成分如下：每100mL制剂中，阿可拉定
0.2～2.4％、卵磷脂0.4～12％、膜结构调节剂
0.1～1.2％、非离子型表面活性剂0.2％。本发明
通过常规脂质体制备技术解决了阿可拉定在水
相体系里溶解性差和受外界环境影响易发生降
解等问题，提高了阿可拉定在胃肠道消化过程中
的稳定性。所制备的阿可拉定脂质体为规则球形
囊泡，包埋率高达70％以上，粒径在100～300nm
之间，粒度分布良好，制备工艺简单，脂质体质量
得到提高，
适合大规模工业化生产。权利要求书1页 说明书5页 附图3页CN 106983724 A 2017.07.28
C N 106983724
A
1.一种阿可拉定脂质体口服制剂，其特征在于，包括以下质量比例的原料：
每100mL液体制剂中，阿可拉定0.2～2.4％，卵磷脂0.4～12％，膜结构调节剂0.1～
1.2％，非离子型表面活性剂0.2％。
2.根据权利要求1所述阿可拉定脂质体口服制剂，其特征在于，所述的卵磷脂为食品级大豆或蛋黄卵磷脂，磷脂纯度达到80％以上。
3.根据权利要求1所述阿可拉定脂质体口服制剂，其特征在于，所述的膜结构调节剂为胆固醇或β-谷甾醇。
4.根据权利要求1所述阿可拉定脂质体口服制剂，其特征在于，所述的非离子型表面活性剂为吐温-80、司盘-20、司盘-40或蔗糖酯，HLB值为6～16。
5.根据权利要求1-4任一项所述阿可拉定脂质体口服制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将粉状结晶型阿可拉定、卵磷脂、膜结构调节剂按比例加入到有机溶剂中，得到有机相溶液；
2)按比例将非离子型表面活性剂加入100mL磷酸盐缓冲溶液中使其充分溶解，并水浴加热至40～50℃，形成水相溶液；
3)将步骤1)所得有机相溶液通过真空浓缩法除去有机溶剂，在圆底玻璃烧瓶底部形成均匀的脂质膜后，加入预热的步骤2)所得水相溶液，通过手摇法或者水浴超声处理将脂质膜洗脱下来并充分水化，得到粗阿可拉定脂质体混悬液；
4)将粗阿可拉定脂质体混悬液静置冷却至室温后，利用超声均质机的冰浴超声处理或者通过高压均质机的乳化得到粒径较小且分布均匀的阿可拉定脂质体口服制剂。
6.根据权利要求5所述阿可拉定脂质体口服制剂的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述有机溶剂是乙醚。
7.根据权利要求5所述阿可拉定脂质体口服制剂的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述磷酸盐缓冲溶液浓度为0.01mol/L，pH 7.4。
8.根据权利要求5所述阿可拉定脂质体口服制剂的制备方法，其特征在于，步骤3)中所述除去有机溶剂的温度45～55℃，转速100～500rpm。
9.根据权利要求5所述阿可拉定脂质体口服制剂的制备方法，其特征在于，步骤4)中所述超声处理的超声功率400W，超声时间10min。
10.根据权利要求5所述阿可拉定脂质体口服制剂的制备方法，其特征在于，步骤4)中所述高压均质机的乳化，压力50MPa，循环均质2次。
权 利 要 求 书1/1页CN 106983724 A
一种阿可拉定脂质体口服制剂及其制备方法
技术领域
[0001]本发明属于食品、营养制剂和医药制剂技术领域，具体提供了一种脂质体口服制剂及其制备方法，尤其是涉及一种阿可拉定脂质体口服制剂及其制备方法。
背景技术
[0002]阿可拉定，又名淫羊藿素或者淫羊藿苷元，是从中药淫羊藿的干燥叶中提取的淫羊藿苷经酶转化得到的衍生物单体物质，具体结构式如式(1)所示：
[0003]
[0004]在申请号为201510127652.6和201510126477.9的中国专利申请中提到了阿可拉定在制备用于GP130和GP80相关肝癌药物中的用途。在申请号为201410472236.5的中国专利申请中提到了阿可拉定在制备用于抑制肝癌干细胞药物中的用途。在申请号201480039760.1的中国专利中提到阿可拉定在制备用于急性髓性白血病、急性淋巴白血病或者自身免疫系统疾病的药物中的用途。阿可拉定在水中溶解性极差，易受光照降解，且口服时生物利用度非常低，在申请号为201310526018.0的中国专利中提到利用植物油和助悬剂来制备阿可拉定混悬剂或者软胶囊，但大量油脂摄入对于病人的营养健康极
为不利，因此需要制备一种既能提高阿可拉定的生物利用度，同时可通过风味调香等手段提高产品口感的水相口服制剂。
[0005]脂质体传递系统具有良好的水分散性和生物相容性、毒性小、安全性高、无免疫抑制作用、缓释性和靶向释放性等诸多优势，经由口服摄入进入人体胃肠道后可与分泌的胆汁盐组成胆汁盐微粒，可同时将包埋的水溶性和脂溶性生物活性物质扩散到小肠上皮黏膜细胞，提高人体对功能因子的吸收能力。因此，开发阿可拉定脂质体口服制剂，可成为解决口服阿可拉定生物利用度不高等问题的良好途径。
[0006]在申请号为200910025047.2的中国专利中公开了一种淫羊藿苷元脂质体及其制备方法，其质量组成为大豆卵磷脂50％～85％，胆固醇10％～35％，淫羊藿苷元2％～25％，淫羊藿苷元脂质体物理稳定性较好，放置较长时间后未见分层絮凝现象。但淫羊藿苷元与阿可拉定在分子结构上有较大差异，在甲醇和乙醇中的溶解性不同，且其主要针对的是骨质疏松症的。在申请号201110061635.9的中国专利中公开了淫羊藿素脂质体及其制备方法，主要含有0.01～5％淫羊藿素、0.05～8％磷脂、0～8％增塑材料、0～20％支撑剂，余量为注射用水，通过pH值调节得到淫羊藿素脂质体注射液制剂，而目前阿可拉定脂质体口服制剂专利尚属空白。
发明内容
[0007]本发明公开的是一种阿可拉定脂质体口服制剂及其制备方法，该剂型一方面克服了现有的阿可拉
定油悬制剂在摄食中产生的高油脂摄入问题，另一方面也解决了阿可拉定直接口服进入消化系统后被胃液环境直接破坏，同时提供优质大豆卵磷脂和蛋黄卵磷脂的摄入，使阿可拉定能够有效传递到小肠吸收部位，拓展其在口服制剂中的应用。
[0008]本发明的目的是提供一种阿可拉定脂质体口服制剂及其制备方法，该制剂主要包括阿可拉定、卵磷脂、膜结构调节剂和非离子型表面活性剂，所述口服制剂为含阿可拉定脂质体的磷酸盐缓冲水相溶液。
[0009]本发明公开的阿可拉定脂质体口服制剂，包括以下质量比例的原料：
[0010]每100mL液体制剂中，阿可拉定0.2～2.4％，卵磷脂0.4～12％，膜结构调节剂0.1～1.2％，非离子型表面活性剂0.2％，以上均为质量比；
[0011]所述的卵磷脂为食品级大豆或蛋黄卵磷脂，磷脂纯度达到80％以上；
[0012]所述的膜结构调节剂为胆固醇或β-谷甾醇；
[0013]所述的非离子型表面活性剂为吐温-80、司盘-20、司盘-40或蔗糖酯，HLB值为6～16。
[0014]本发明阿可拉定脂质体口服制剂的制备方法，包括如下步骤：
[0015]1)将粉状结晶型阿可拉定、卵磷脂、膜结构调节剂按比例加入到适量有机溶剂中，短时热水浴超声处理促进溶解，得到有机相溶液；
[0016]2)将适量表面活性剂加入100mL磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L，pH 7.4)中使其充分溶解，并水浴加热至40～50℃(高于磷脂的相变温度)，形成水相溶液；
[0017]3)将有机相溶液通过真空浓缩法除去有机溶剂(温度45～55℃，转速100～500rpm)，在圆底玻璃烧瓶底部形成均匀的脂质膜后，加入预热的水相溶液，通过手摇法或者水浴超声处理将脂质膜洗脱下来并充分水化，得到粗阿可拉定脂质体混悬液；
[0018]4)将粗阿可拉定脂质体混悬液静置冷却至室温后，利用超声均质机的冰浴超声处理或者通过高压均质机的乳化得到粒径较小且分布均匀的阿可拉定脂质体口服制剂。[0019]本发明的效果在于，通过对阿可拉定进行脂质体包埋后，使其在被人体摄食进入消化系统后免受胃液低酸环境的破坏，能够有效传递到小肠吸收部位，提高阿可拉定脂质体口服制剂的生物利用度。
[0020]本发明制备的阿可拉定脂质体口服制剂在大鼠灌胃体内吸收研究中，较阿可拉定植物油混悬剂，血浆药物浓度达峰时间(T max)略低，说明脂质体口服制剂吸收较快，起效更迅速，最高血浆药物浓度(C max)、血浆生物半衰期(T1/2)、药时曲线下面积(AUC0～24)和生物利用度(F％)均偏高，说明阿可拉定脂质体口服制剂在大鼠灌胃吸收中表现良好。
[0021]本发明制备的阿可拉定脂质体口服制剂在比格犬(与人体有类似的低吸收率)灌胃体内吸收研究中，较阿可拉定植物油混悬剂，最高血浆药物浓度(C max)、血浆生物半衰期(T1/2)和药时曲线下面积(AUC0～24)均偏高，说明脂质体口服制剂显著提高了阿可拉定在体内的吸收。
[0022]本发明制备的阿可拉定脂质体口服制剂表现出良好的物理稳定性。
附图说明
[0023]图1阿可拉定脂质体口服制剂样品照片。
[0024]图2阿可拉定脂质体Turbiscan物理稳定性扫描图谱。
[0025]图3阿可拉定脂质体口服制剂体外模拟消化前后的扫描电镜照片。
[0026]图4阿可拉定脂质体口服制剂与玉米油混悬制剂的SD大鼠灌胃后血浆中药物浓度随时间的变化曲线比较。
[0027]图5阿可拉定脂质体口服制剂与玉米油混悬制剂的比格犬灌胃后血浆中药物浓度随时间的变化曲线比较。
具体实施方式
[0028]以下结合实施例对本发明做进一步阐述说明，但本发明的保护范围并不局限于下述的实施例。
[0029]除非另外说明，本文中的“非离子型表面活性剂”指的是溶于水中时不发生解离，其分子中的亲油基团与离子型表面活性剂的亲油基团大致相同，其亲水基团主要是由一定数量的含氧基团组成，如羟基或聚氧乙烯链。
[0030]本文中考察脂质体粒度分布采用的是动态光散射法(D y n a m i c l i g h t scattering，DLS)进行测定，其原理是基于粒子在介质中因不规则的布朗运动所产生的散射光强的波动推算出粒子的大小，测定前对样品进行稀释处理，减少多重光散射所造成的测量误差。
[0031]本文中考察阿可拉定脂质体口服制剂的物理稳定性采用的是静态光散射法(Static light scattering，SLS)进行测定，仪器工作原理是基于样品投射光和被散射光随时间动态变化关系，测试温度为30℃，测试时长为12h。
[0032]本文中考察脂质体体在外模拟胃肠液中的稳定性，方法如下：取等量阿可拉定脂质体与模拟胃液混合，调节pH值为1.2，37℃恒温水浴震荡1h，再取适量经模拟胃液消化后的混合物与等量模拟肠液混合，调节pH值为7.0，37℃恒温水浴震荡2h；以1L模拟胃液为例，其中包括3.2g胃蛋白酶和2g NaCl；以1L模拟肠液为例，其中包括6.8g K2HPO4、8.775g NaCl、0.4g胰脂肪酶和5g胆盐。
[0033]本文中SD大鼠和比格犬灌胃代谢实验的考察方法如下：12只SD大鼠或比格犬，分成2组，每组6只，雌雄各半，第一组为阿可拉定玉米油混悬制剂组(对照组)，第二组为阿可拉定脂质体口服制剂组，灌胃前让老鼠或比格犬适应环境至少3天，灌胃阿可拉定脂质体口服制剂，SD大鼠灌胃量为40mg(阿可拉定)/kg(体重)，比格犬灌胃量为20mg(阿可拉定)/kg (体重)；SD大鼠于灌胃前及灌胃后15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时和24小时进行静脉穿刺采血，比格犬于灌胃前及灌胃后10分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时和24小时进行静脉穿刺采血；血液样品在2～8℃条件下离心10分钟，转速2000×g，获得血浆并通过高效液相谱测定血浆中阿可拉定含量。
[0034]实施例1
[0035]称取阿可拉定100mg，大豆卵磷脂1g，胆固醇100mg，用20mL乙醚涡旋震荡并充分溶解，形成有机相；将200mg吐温-80溶解于100mL的磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L，pH 7.4)中并充分溶解，形成水相；将有机相通过减压旋蒸除去乙醚，再利用预热至50℃的水相水化蒸干的脂质膜，并用水浴超声清洗机将其从圆底烧瓶中洗脱下来形成粗阿可拉定脂质体混悬液，并经超声均质机冰浴乳化，超声功率400W，超声时间10min，得到阿可拉定脂质体口服制
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