CHO细胞基因拷贝数的微滴数字PCR定量检测方法

（19）中华人民共和国国家知识产权局

	（12）发明专利申请
		（10）申请公布号 CN105368957A（43）申请公布日 2016.03.02

（21）申请号 CN201510927246.8

（22）申请日 2015.12.14

（71）申请人无锡药明康德生物技术股份有限公司;上海药明生物技术有限公司;天津药明康德新药开发有限公司

地址 214092 江苏省无锡市马山梅梁西路88号

（72）发明人张朗;董烨平;李娟;乔君华;蔡洁行;周伟昌;陈智胜

（74）专利代理机构上海浦一知识产权代理有限公司

代理人丁纪铁

（51）Int.CI

C12Q1/68;

C12N15/11;

权利要求说明书说明书幅图

（54）发明名称

CHO细胞基因拷贝数的微滴数字PCR定量检测方法

（57）摘要

本发明公开了一种CHO细胞基因拷贝数的微滴数字PCR定量检测方法，步骤包括：1)提取CHO细胞基因组DNA；2)用限制性内切酶对基因组DNA进行酶切处理；3)进行微滴数字PCR反应；4)PCR反应结束后，测定PCR反应板每孔样品的阳性微滴、阴性微滴数目，获得CHO细胞的基因拷贝数。本发明还公开了用于上述方法的引物和探针。本发明通过选择合适的参照基因、设计合适的引物和荧光标记探针、优化CHO细胞基因组模板上样量、选择合适的限制性内切酶对基因组模板进行酶切处理、评估不同的基因组提取试剂盒对ddPCR检测结果的影响，提高了CHO细胞基因拷贝数的微滴数字PCR绝对定量检测的灵敏度和精确度。

法律状态

法律状态公告日	法律状态信息	法律状态
2016-03-02	公开	公开
2016-03-02	公开	公开
2016-03-30	实质审查的生效	实质审查的生效
2016-03-30	实质审查的生效	实质审查的生效
2019-02-01	著录事项变更	著录事项变更