(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810972208.8
(22)申请日 2018.08.24
(71)申请人 北京中医药大学
地址 100029 北京市朝阳区北三环东路11
号
(72)发明人 孙志蓉 陈龙 曾宇馨 祝天添
(74)专利代理机构 北京慧智兴达知识产权代理
有限公司 11615
代理人 韩龙 李华
(51)Int.Cl.
A61K 38/01(2006.01)
A61P 39/06(2006.01)
A61P 37/04(2006.01)
A61P 17/00(2006.01)
A61K 8/64(2006.01)
A61Q 19/08(2006.01)A61Q 19/00(2006.01)A61Q 19/02(2006.01)A23L 33/18(2016.01)
(54)发明名称
一种石斛多肽的新用途
(57)摘要
本发明提供一种石斛多肽在抗氧化和提高
免疫力方面的用途。本发明方法充分利用了石斛
斛多肽，
提高了鼓槌石斛的附加利用率。权利要求书1页 说明书9页CN 110856744 A 2020.03.03 C N 110856744
A
1.一种石斛多肽在制备具有抗氧化活性的药品、保健品或化妆品中的应用。
2.一种石斛多肽在制备提高机体免疫力的药品或保健品中的应用。
3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述石斛多肽是从石斛药渣中提取获得的多肽。 4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述石斛多肽的制备包括依次进行的从石斛药渣中提取蛋白质的过程和对蛋白质进行酶解的过程。 5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述蛋白质提取过程以稀碱溶液作为提取溶剂，所述蛋白质与稀碱溶液的比例(m/V)为1：(20～45)，提取时间为90～180min，提取次数为2～3次。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述酶解过程采用中性蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的比例为(0.25～4)：1。
8.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述酶解过程中，加酶量为3800U/g～8000U/g，酶解温度为40℃～60℃，pH为5.5～7.0。
9.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述方法在提取蛋白质的过程之后包括采用活性炭进行脱。
10.一种药物组合物，其特征在于，所述组合物包括活性成分鼓槌石斛多肽以及药学上可接受的辅料。
权 利 要 求 书1/1页CN 110856744 A
一种石斛多肽的新用途
技术领域
[0001]本发明涉及一种石斛多肽的新用途，属于中医药领域。
背景技术
[0002]对中药的研究，过去很长时间主要集中在次生代谢产物上，而对于蛋白质可能的药效作用几乎不被知晓。随着生物科学技术的发展与成熟，中药蛋白质及其多肽的研究也逐渐受到重视，并将可能成为中药和新药研究的新方向。传统理论认为，人体对蛋白质的吸收主要是以氨基酸形式被吸收。最新研究发现，蛋白质经消化道酶促水解后，主要以小分子多肽的形式被吸收，且比游离氨基酸更易于被机体吸收和利用。因此，生物活性肽(Biological active peptides，BAP)的研究逐渐引起了各方面研究人员的重视。研究者们发现蛋白质经过水解后得到的多肽具有更好的营养特性；特别是Mattews等人的研究结果
告诉人们，蛋白质经消化道酶作用后并不一定以完全游离氨基酸的形式吸收，且主要被吸收是以低肽(尤其是二肽、三肽)的形式。通过生物代谢实验也证实了低肽的吸收率比游离氨基酸要多，且比氨基酸更容易通过小肠黏膜而被肌体吸收利用。此外，因低肽结构的多样性和复杂性决定了他在细胞生理和调节代谢具有活性作用的功能，大量的研究也证明了有些低肽具有增强免疫、抗菌、抗病毒、抗氧化、降血脂、降低胆固醇和降血压、促进矿物质吸收、激素调节、酶调节等作用。一些研究人员成功的利用动植物蛋白制备了降血压肽、免疫调节功能肽、抗氧化活性肽等。
[0003]早期石斛的应用品种主要集中在铁皮石斛、金钗石斛上，其药用和保健价值应用广泛。而鼓槌石斛作为2010版药典新晋品种，药用价值开发较少，只出现在少数几种中成药的原料中，被利用的成分主要集中在多糖和酚类成分。在实际生产过程中，鼓槌石斛一般经过乙醇提取后剩余的药渣都不再利用。研究发现，鼓槌石斛中含有5.5％的蛋白质成分。近年来栽培量再逐渐增加，云南地区已经一定规模的栽培产量。如何合理有效的开发鼓槌石斛中的蛋白质成分，提高鼓槌石斛的附加利用率，值得进一步研究。
发明内容
[0004]针对现有技术存在的问题，本发明提供一种石斛多肽在抗氧化和提高免疫力方面的用途。本发明方法充分利用了石斛在实际生产中剩余的药渣，制备出活性良好的石斛多肽，提高了石斛的附加利用率。
[0005]作为本发明的第一个方面，本发明提供一种石斛多肽在制备具有抗氧化活性的药品、保健品或化妆品中的应用。
[0006]作为本发明的第二个方面，本发明提供一种石斛多肽在制备提高机体免疫力的药品或保健品中的应用。
[0007]所述鼓槌石斛多肽是从石斛药渣中提取获得的多肽；进一步，所述石斛多肽的制备包括依次进行的从鼓槌石斛药渣中提取蛋白质的过程和对蛋白质进行酶解的过程。[0008]本发明所述“石斛药渣”是石斛经乙醇提取后剩余的药材部分，在实际生产过程
中，鼓槌石斛一般经过乙醇提取获得有效成分后剩余的药渣都不再利用，而本发明以乙醇提取后的药渣作为原料，进一步制备具有活性的多肽成分。
[0009]在具体的实施方式中，所述蛋白质提取过程以稀碱溶液作为提取溶剂，所述蛋白质与稀碱溶液的比例(m/V)为1：(20～45)，提取时间为90～180min，提取次数为2～3次。[0010]在具体的实施方式中，所述酶解过程采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶中的任意一种或几种进行酶解。优选的，以中性蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解；进一步优选的，所述中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的比例为(0.25～4)：1；更进一步优选的，所述中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的比例为(0.6～1.5)：1；最优选的，所述中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的比例为1:1。
[0011]在具体的实施方式中，所述酶解过程中，加酶量为3800U/g～8000U/g，酶解温度为40℃～60℃，pH为5.5～7.0；优选的，加酶量为5000U/g～7000U/g，酶解温度为50℃～55℃，pH为6～7.0。
[0012]本发明碱法提取得到的蛋白液会伴随着植物体内的多种粘液质、素等成分，成分复杂且溶液颜深。因此，本发明制备方法在提取蛋白质的步骤之后，还包括对蛋白质进行脱的步骤，所述脱可选用本领域任何常规的脱方法。作为优选的，本发明选择活性炭进行脱；进一步优选的，所述活性炭用量为0.6～1.2g/100ml蛋白液，脱温度为35～45℃。
[0013]作为本发明的第三个方面，本发明提供一种药物组合物，其包含活性成分鼓槌石斛多肽以及药学上可接受的辅料。
[0014]所述鼓槌石斛多肽是从鼓槌石斛药渣中提取获得的多肽；进一步，所述鼓槌石斛多肽的制备包括依次进行的从鼓槌石斛药渣中提取蛋白质的过程和对蛋白质进行酶解的过程。
[0015]所述药学可接受的辅料包括：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯
吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等。
[0016]作为本发明的第四个方面，本发明提供一种具有保湿、美白作用的化妆品，其包含活性成分鼓槌石斛多肽以及常规辅料。
[0017]所述石斛优选鼓槌石斛。
[0018]本发明的有益效果：本发明以鼓槌石斛药渣作为原料提取多肽成分，提高了鼓槌石斛的附加利用率；本发明制备的鼓槌石斛多肽，对羟基自由基和超氧阴离子自由基具有很好的清除作用，可用于制备具有保湿、美白功效的药品、保健品或化妆品。此外，鼓槌石斛多肽能够显著提高小鼠的非特异性免疫功能(P<0.05)，能够增强小鼠巨噬细胞的吞噬能力，提高小鼠的非特异性免疫功能。
具体实施方式
[0019]实施例1蛋白质的提取
[0020]将25g石斛粉末与蒸馏水混匀，室温下在磁力搅拌器上浸提3h，纱布初滤后于3000r/min条件下离心5min，取上清液，透析，冷冻干燥，得到水溶性蛋白；
[0021]将蒸馏水提取后的石斛药渣加入0.1mol/L氯化钠溶液，混匀，室温下搅拌提取3h，纱布初滤后于3000r/min条件下离心5min，取上清液，透析至一定体积，冷冻干燥，得到盐溶性蛋白；
[0022]将25g石斛粉末与75％的乙醇液混匀，室温下在磁力搅拌器上浸提3h，纱布初滤后于3000r/min条件下离心5min，取上清液，冷冻干燥，得到醇溶性蛋白；
[0023]将乙醇溶液提取后的石斛药渣加入0.3％氢氧化钠溶液，混匀，室温下搅拌提取3h，纱布初滤后于3000r/min条件下离心5min，取上清液，透析至一定体积，冷冻干燥，得到碱溶性蛋白。
[0024]通过测定，四种蛋白质类型在总蛋白质中所占的比例分别为：15.47％，5.03％，17.47％，33.62％。即水溶性蛋白和盐溶性蛋白含量很低，而经过乙醇提取后的药渣中的碱溶性蛋白含量达到33.62％。在实际生产过程中，鼓槌石斛一般经过乙醇提取获得有效成分后剩余的药渣都不再利用，而本发明发现乙醇提取后的药渣中蛋白质含量很高，因此，以乙醇提取后的药渣作为原料，进一步制备石斛多肽。
[0025]实施例2-5蛋白质的提取
[0026]取过40目鼓槌石斛药渣粉末(经75％乙醇提取后)，按照一定的料液比、以不同的氢氧化钠溶液浓度浸提不同的时间和次数，然后3000r/min离心15min，取上清液，透析，得蛋白质沉淀，透析，真空干燥，得蛋白质干粉。提取参数和提取得率见表1。
[0027]表1不同参数的提取得率
[0028]
[0029]实施例6-10活性炭脱
[0030]取实施例5制备的蛋白质溶液100ml，加入不同量的活性炭进行脱，并控制温度、pH和时间，测定脱率和蛋白质损失率。见表2。
[0031]由表2可见，实施例8设定活性炭的用量和温度为1.2g和45℃，pH和脱时间设定为7.0和30min，脱率高且蛋白质损失少。
[0032]表2活性炭脱
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