(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710965053.0
(22)申请日 2017.10.17
(71)申请人 湖北泓肽生物科技有限公司
地址 430056 湖北省武汉市武汉经济技术
开发区新滩新区荆汉大道
(72)发明人 张锐 雷玉平 鲍汝杨 汪黎明
李健雄
(51)Int.Cl.
C07K 5/068(2006.01)
C07K 1/06(2006.01)
C07K 1/02(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了一种赖氨酸二肽的合成方法，
属于化妆品及医药技术领域。该合成方法为：赖
氨酸（Lys）用邻苯二甲酸酐保护制得双邻苯二甲
应的酰氯产物，谷氨酸（Glu）或天门冬氨酸（Asp） 与六甲基二硅氮烷反应得到谷氨酸或天门冬氨
酸的硅烷保护物，然后与酰氯产物反应得到双邻
苯二甲酰基保护的二肽，最后在特定条件下脱保
护得到赖氨酰谷氨酸或赖氨酰天门冬氨酸二肽。
本发明提供的合成方法没有使用缩合剂，原料廉
价易得，副产物少，容易得到高纯度的二肽，具有
很高的收率，减少了成本，
适合批量化生产。权利要求书2页 说明书6页CN 107739400 A 2018.02.27
C N 107739400
A
1.一种赖氨酸二肽的合成方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)赖氨酸与邻苯二甲酸酐在非极性溶剂1中，在缚酸剂作用下于回流条件下分水反应，待分出全部水后降温析晶得中间体A，中间体A的结构式为：
(2)中间体A在非极性溶剂2中，于20-80℃下与酰氯化试剂反应得到中间体B，中间体B 的结构式为：
(3)谷氨酸或天门冬氨酸在非极性溶剂2中，于40-130℃在催化剂的作用下与六甲基二硅氮烷反应得到中间体C，中间体C的结构式为：
其中n=1时，为天门冬氨酸的硅烷保护物，n=2时，为谷氨酸的硅烷保护物；
(4)中间体B与中间体C在非极性溶剂2中，于0-40℃反应，后处理后得中间体D，中间体D 的结构式为：
(5)中间体D在极性溶剂中与水合肼于60-100℃反应，反应完成后降温至20-40℃并用盐酸调pH至4.1-4.8，过滤，滤液浓缩至油状物，分离纯化得到产物E，产物E的结构式为：
其中n=1时，为赖氨酰天门冬氨酸，n=2时，为赖氨酰谷氨酸。
2.根据权利要求1所述的赖氨酸二肽的合成方法，其特征在于，所述步骤(1)包括：
赖氨酸与邻苯二甲酸酐在非极性溶剂1中，在缚酸剂的作用下回流分水反应，反应至没有水产生后，降温至0-30℃析晶，过滤、干燥得到中间体A；所述邻苯二甲酸酐与赖氨酸的摩尔比为2.0-3.0:1，所述缚酸剂选自三甲胺、三乙胺或N、N-二异丙基乙胺，所述缚酸剂用量为赖氨酸质量的1%-5%。
3.根据权利要求2所述的赖氨酸二肽的合成方法，其特征在于，所述步骤(3)包括：
将谷氨酸或天门冬氨酸加入非极性溶剂2中，加入催化剂，升温至60-120℃后滴加六甲基二硅氮烷，滴加完毕后保温反应1小时以上，反应完成后降温至0-40℃得到中间体C备用，所述六甲基二硅氮烷与谷氨酸或天门冬氨酸的摩尔比为1.5-2.5:1，所述催化剂选自浓硫酸、对甲苯磺酸或硫酸氢铵，所述催化剂的
用量为谷氨酸或天门冬氨酸质量的0.1%-1.0%。
4.根据权利要求3所述的赖氨酸二肽的合成方法，其特征在于，所述步骤(4)包括：
于0-40℃在步骤(3)得到的中间体C中滴加步骤(2)得到的中间体B，保温反应2小时以上，反应结束后加水淬灭，过滤得到中间体D，所述中间体B与谷氨酸或天门冬氨酸的摩尔比为1.0-1.5:1，所述水与谷氨酸或天门冬氨酸的摩尔比为3.0-5.0:1。
5.根据权利要求4所述的赖氨酸二肽的合成方法，其特征在于，所述步骤(5)包括：
将中间体D和水合肼加入极性溶剂中，于60-100℃反应2小时以上，反应完成后降温至20-40℃用盐酸调pH至4.1-4.8，过滤，滤液浓缩至油状物，滴加醇进行析晶，所述醇选自甲醇、乙醇、异丙醇中的一种或者多种，过滤得到产物E的粗品，所述水合肼与中间体D的摩尔比为2.0-4.0:1。
6.根据权利要求5所述的赖氨酸二肽的合成方法，其特征在于，所述极性溶剂选自水、甲醇、乙醇中的一种或者多种。
7.根据权利要求1所述的赖氨酸二肽的合成方法，其特征在于，所述非极性溶剂1选自甲苯。
8.根据权利要求1所述的赖氨酸二肽的合成方法，其特征在于，所述非极性溶剂2选自二氯甲烷、或甲苯。
一种赖氨酸二肽的合成方法
技术领域
[0001]本发明涉及化妆品及医药技术领域，具体涉及一种赖氨酸二肽的合成方法，尤其涉及一种赖氨酰谷氨酸二肽或赖氨酰天门冬氨酸二肽的合成方法。
背景技术
[0002]2000年Khavinson等发现Lys-Glu二肽(Vilon)能抑制小鼠自发性肿瘤的生长并且延长小鼠的寿命。随后又报道，它对CBA小鼠的体重、食物消耗及动情周期无明显影响，但能减少自发性肺腺瘤发生率。它的长期使用是安全的，并不会在动物生长过程中引起不良影响，可作为老年病症的预防。Vilon在衰老过程中还能对消化酶的活性产生积极作用。对膀胱粘膜中肿瘤的早期发作也具有抑制作用，且在一定程度上能保护小鼠胸腺和脾。目前发现其能活化衰老细胞染体的染质, 能调节核糖体的形成、装配。Vilon还能在下丘脑细胞中调节白介素 2(IL-2)基因的表达。近年来对Lys-Glu二肽的研究均表明它有助于衰老问题的研究。
[0003]文献报道赖氨酰谷氨酸二肽合成的方法（赖氨酰谷氨酸二肽的抗肿瘤活性研究，Chinese Pharmacological Bulletin 2007 Feb；23(2):233～6），是将Lys的α-氨基以及ε-氨基均用叔丁氧羰基（B
oc）保护，羧基用N-羟基琥珀酰亚胺（HOSu）活化与Glu接肽，脱保护HPLC纯化得到Lys-Glu，此方法用到了多种保护基，并且后处理通过非常规方法得到产品，制备成本高，限制了其批量化生产。
[0004]赖氨酰谷氨酸二肽合成的方法（N-Trifluoroacyl Lysine Derivatives in the Synthesisof L-Lysyl-L-glutamic Acid，Russian Journal of Organic Chemistry 2007, Vol. 43, No. 10, pp. 1427 – 1431），是将Lys的α-氨基以及ε-氨基用三氟乙酰基（TFA）保护，制备酰氯与谷氨酸二甲酯反应，脱保护得到Lys-Glu，此方法Lys用三氟乙酰基保护，容易出现单保护以及双保护的混合物，而且所用三氟乙酸酐或三氟乙酸乙酯价格较高，这种方法制备出来的赖氨酰谷氨酸副产物多，总收率为：26.4%，制备成本高，提纯困难。因此本发明具有降低Lys-Glu或Lys-Asp的成本以及适合批量化生产的优异性，具有重要推广意义。
[0005]其中，赖氨酸具有两个氨基，谷氨酸具有两个羧基。因此，对应赖氨酰谷氨酸二肽及其类似物合成存在以下两个难题；第一两个氨基与两个羧基的活性不一致，容易出现保护不完全的产物，如单保护与双保护的混合物；第二由于氨基与羧基较多，容易出现分子内羧基与氨基成环，如通常羧基采用酯化进行保护，而成二肽后谷氨酸上的羧基在脱保护时易与α氨基分子内成环，尤其是在碱性条件下；或者非目标产物的氨基与羧基成肽。总之，对于赖氨酰谷氨酸二肽及其类似物的合成，由于氨基酸特殊的结构导致副反应较多，反应产物难于分离与纯化，一般需要结合多种方式进行纯化，如先采用溶剂法分离出产品，再使用活性炭进行多次脱纯化，导致最后的收率非常低。
发明内容
[0006]本发明的目的在于提供一种方法简单、副产物少和产物易分离的赖氨酸二肽的合成方法。所述技术方案如下：
本发明公开了一种赖氨酸二肽的合成方法，该方法包括：赖氨酸用邻苯二甲酸酐保护得到双邻苯二甲酰基保护的赖氨酸（中间体A），再与酰氯化试剂反应制成相应的酰氯产物（中间体B），谷氨酸或天门冬氨酸与六甲基二硅氮烷反应得到硅烷保护的谷氨酸或天门冬氨酸（中间体C），然后与中间体B反应得到双邻苯二甲酰基保护的二肽（中间体D），最后脱保护得到赖氨酰谷氨酸或赖氨酰天门冬氨酸二肽（产物E）。其反应方程式如下式：
上式中，其中n=1时，反应原料为天门冬氨酸，合成的二肽为赖氨酰天门冬氨酸（Lys-Asp）；n=2时，反应原料为谷氨酸，合成的二肽为赖氨酰谷氨酸（Lys-Glu）。
[0007]本发明实施例提供的赖氨酸二肽的合成方法包括以下步骤：
(1)赖氨酸与邻苯二甲酸酐在非极性溶剂1中，在缚酸剂作用下于回流条件下分水反应，待分出全部水后降温析晶得中间体A，邻苯二甲酸酐与赖氨酸的摩尔比为2.0-3.0:1，缚酸剂用量为赖氨酸质量的1-5%，中间体A的结构式为：
。
[0008](2)中间体A在非极性溶剂2中，于20-80℃下与酰氯化试剂反应得到中间体B，中间体B的结构式为：
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