(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910024579.8
(22)申请日 2019.01.10
(71)申请人 北京医院
地址 100730 北京市东城区东单大华路1号
(72)发明人 任思楣 袁婷婷 冯茹
(74)专利代理机构 北京东岩跃扬知识产权代理
事务所(普通合伙) 11559
代理人 谷岳
(51)Int.Cl.
C12Q 1/6886(2018.01)
C12N 15/11(2006.01)
(54)发明名称
中的用途
(57)摘要
本发明公开了一种白血病标志物，所述白血
病标志物为SEQ ID No.1所示的基因或与其具有 85％-99％同源性的基因，该标志物用于制备预
选难治髓系白血病患者，以及预测、诊断患者是
否为经达到骨髓完全缓解后出现复发风险
的髓系白血病患者，或分选经达到骨髓完全
缓解后出现复发风险的髓系白血病患者，以及预
测或评估髓系白血病患者总生存期的产品。在化
疗前检测该标志物可判断患者对化疗的反应性
和复发情况以及预后生存情况，能够将化疗敏感
和难治、复发的患者很好地区分，拟补了现有危
险度分层的不足，达到对患者进一步精细分层的
目的，
有效指导后续化疗和移植等方案。
权利要求书1页 说明书9页序列表2页 附图3页CN 111424083 A 2020.07.17
C N 111424083
A
1.一种白血病标志物，其特征在于，所述白血病标志物为SEQ ID No.1所示的基因或与SEQ ID No.1所示基因具有85％-99％同源性的基因，该标志物用于制备预测、诊断患者是否为难治的髓系白血病患者，或分选难治的髓系白血病患者的产品。
2.一种白血病标志物，其特征在于，所述白血病标志物为SEQ ID No.1所示的基因或与SEQ ID No.1所示基因具有85％-99％同源性的基因，该标志物用于制备预测、诊断患者是否为经达到骨髓完全缓解后出现复发风险的髓系白血病患者，或分选经达到骨髓完全缓解后出现复发风险的髓系白血病患者的产品。
3.一种白血病标志物，其特征在于，所述白血病标志物为SEQ ID No.1所示的基因或与SEQ ID No.1所示基因具有85％-99％同源性的基因，该标志物用于制备预测或评估髓系白血病患者总生存期的产品。
4.一种标志物组合物，其特征在于，所述标志物组合物包括如权利要求1或2所述的标志物，所述标志物组合物用于制备预测、诊断患者是否为难治的和/或经达到骨髓完全缓解后出现复发风险的髓系白血病患者，或分选难治的和/或经达到骨髓完全缓解后出现复发风险的髓系白血病患者，或预测、评估髓系白血病患者总生存期的产品。
5.根据权利要求3所述的标志物组合物，其特征在于，所述标志物组合物还包括选自涉及白血病发病和/或预后评估的突变基因、融合基因或异常染体中的一种或几种，优选为选自WHO和ELN危险度分层中所涉及白血病发病和/或预后评估的的融合基因、突变基因或异常染体中的一种或几种，更优选为选自PML -RAR α或AML1-ETO融合基因、RUNX1或ASXL1突变基因、-5或-7异常染体中的一种或几种。
6.根据权利要求1-3任意一项所述的白血病标志物、或权利要求4或5所述的标志物组合物，其特征在于，所述髓系白血病为急性髓系白血病。
7.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测如权利要求1-3任意一项所述的白血病标志物，或如权利要求4或5所述的标志物组合物的产品。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述产品为检测如权利要求1-3任意一项所述的白血病标志物，或如权利要求4或5所述的标志物组合物的引物或探针。
9.根据权利要求1-3任意一项所述的白血病标志物、权利要求4或5所述的标志物组合物或权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述预测髓系白血病患者风险，包括以下步骤：
步骤1)测定来自所述患者的样品中的根据权利要求1-3任意一项所述的白血病标志物、权利要求4或5所述的标志物组合物中每种生物标志物的水平Ct；
步骤2)检测所述样品的GAPDH水平，根据△Ct＝Ct 标志物-Ct GAPDH 计算△Ct值，△Ct≥4.913为敏感型患者，△Ct＜4.913为难治复发型患者。
10.根据权利要求9所述的白血病标志物、标志物组合物或试剂盒，其特征在于，所述样品为患者骨髓中的有核细胞。
权 利 要 求 书1/1页CN 111424083 A
一种白血病标志物及其在白血病预后评估中的用途
技术领域
[0001]本发明涉及体外诊断领域，特别涉及一种白血病标志物及其在白血病预后评估中的用途。
背景技术
[0002]急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia,AML)是一种高度异质性的疾病，是成年人最常见的类型，以老年患者居多。AML预后极差，五年生存率不足27％，即使在化疗完全缓解后仍有70-80％的患者复发成为难治型。临床上对AML的是依据患者的危险度分层决定患者的诱导方案、巩固化疗的方案和疗程长短，以及达到完全缓解后是否应积极进行造血干细胞移植。目前髓系白血病临床上明确
有效的手段仅有化疗和移植，诊疗和预后评估中对患者精细准确的分层意义重大，关系着化疗方案的调整、确定适龄患者的移植时机、老年患者能否采取支持和去甲基化；这些决策均与患者生存期、生存质量息息相关。
[0003]现在全球主要采用NCCN(美国国立综合癌症网，National Comprehensive Cancer Network)危险度分层，也有部分欧洲国家采用ELN(欧洲白血病网，European Leukmia Net)危险度分层。这两种分层类似，都是基于各型患者骨髓中有核细胞中的异常染体和几种临床意义十分明确的融合基因、突变基因将患者归入低位、中危(中低危、中高危)、高危各组。
[0004]然而，临床上有40-50％的患者染体是正常的，融合基因为阴性；另有一部分患者因未进行测序无法获知突变基因信息，这些患者根据现行方案无法准确分层，只能模糊的归入中危组。另外，现行分层虽在体上具有指示患者疾病自然史和预后的作用，但指示个体时常有偏差，尤其是指示患者难治复发的情况和临床结局常有出入。而在化疗前明确指示患者难治、复发的结局是对和预后最有价值的指导之一。
[0005]现行分层诊断和决策的局限性如下：
[0006]全球现行NCCN和ELN危险度分层。这两个分层基本相同，由各型患者的异常染体、临床意义十分明确的几种融合基因、突变基因共同组成。评估化疗敏感性的突变基因是从散在的患者测序中得到
的，每种突变频率仅见于10％左右的患者，而融合基因和染体评估患者生存期更见长。这导致现有分层存在如下问题：1)临床上约40-50％患者染体正常、融合基因阴性、突变基因没有检测，现行方案无法分层，只能模糊的归入中危/中高危组。2)提前预知患者化疗反应性的能力不足，对患者原发性耐药和难治、复发临床结局指示不明确，常和临床结局有出入；由于老年人常对化疗耐受差，这一点对老年患者影响尤为明显。3)在体上具有指示疾病严重程度和预后的作用，但指示个体时常有偏差。4)不能定量。
[0007]因此，急需寻一种在化疗前就能准确预测髓系白血病患者是否存在难治、复发风险的标志物以解决上述现有技术中的不足。
发明内容
[0008]本发明的一个方面，是针对现有技术中对髓系白血病患者危险度分层不明确，且无法明确指示患者是否存在难治、复发的风险的缺陷，提供了一种白血病标志物。[0009]本发明提供的技术方案为：
[0010]一种白血病标志物，所述白血病标志物为SEQ ID No.1所示的基因或与SEQ ID No.1所示基因具有85％-99％同源性的基因，该标志物用于制备预测、诊断患者是否为难治的髓系白血病患者，或分选难治的髓系白血病患者的产品。
[0011]本发明中SEQ ID No.1所示的基因是细胞生存的必需基因，其在前mRNA剪切、RNA 的核滞留、细胞转录、DNA修复等细胞最基本的生物过程中发挥重要作用。本发明中SEQ ID No.1所示的基因在每个人骨髓中都有表达，是一个在胞内连续性表达基因。目前关于该基因在血液病中的报道极少，尚无其与髓系白血病难治、复发的相关报道，也没有其作为新的预后评估和难治复发标志物、可纳入髓系白血病危险度分层的报道。
[0012]本发明中SEQ ID No.1所示的基因包括其所示的mRNA单链序列及互补序列。同时，本发明标志物还包括SEQ ID No.1所示的基因经逆转录得到的cDNA单链序列及其它转录形式获得的序列。
[0013]在本发明中，SEQ ID No.1所示的基因可以来自于外周血和/或患者骨髓中的有核细胞。
[0014]本发明的另一个方面，是提供了一种白血病标志物，所述白血病标志物为SEQ ID No.1所示的基因或与SEQ ID No.1所示基因具有85％-99％同源性的基因，该标志物用于制备预测、诊断患者是否为经达到骨髓完全缓解后出现复发风险的髓系白血病患者，或分选经达到骨髓完全缓解后出现复发风险的髓系白血病患者的产品。
[0015]上述完全缓解(CR)是指按照国际协作组标准，以骨髓形态学完全缓解为标准，具体为：患者满足形态学无白血病状态，脱离输血，骨髓穿刺涂片中原始细胞＜5％(至少计数200个有核细胞)，无伴Auer小体的原始细胞或无髓外白血病持续存在。患者外周血中中性粒细胞计数＞1.0x109/L，血小板＞100x1
09/L。
[0016]在本发明中，SEQ ID No.1所示的基因可以来自于患者外周血和/或骨髓中的有核细胞。
[0017]上述“经”是指髓系白血病患者经危险度分层(NCCN-2016和ELN-2016版危险度分层)后，进行常规的临床，例如，化疗(包括诱导缓解、巩固、维持)或支持。
[0018]本发明的另一个方面，是提供了一种白血病标志物，所述白血病标志物为SEQ ID No.1所示的基因或与SEQ ID No.1所示基因具有85％-99％同源性的基因，该标志物用于制备预测或评估髓系白血病患者预后的产品。
[0019]上述与SEQ ID No.1所示基因具有85％-99％同源性的基因可以为与SEQ ID No.1所示基因具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同源性的基因。
[0020]本发明的另一个方面，是提供了一种标志物组合物，所述标志物组合物包括上述标志物，所述标志物组合物用于制备预测、诊断患者是否为难治的和/或经达到骨髓完全缓解后出现复发风险的髓系白血病患者，或分选难治的和/或经达到骨髓完全缓解
后出现复发风险的髓系白血病患者，或预测、评估髓系白血病患者总生存期的产品。[0021]上述标志物
组合物可以来自于外周血和/或骨髓细胞样品。但作为优选，在本发明的一个实施方式中，上述基因来自于患者骨髓中的有核细胞。
[0022]作为优选，上述标志物组合物还包括选自涉及白血病发病和/或预后评估的突变基因、融合基因或异常染体中的一种或几种。更优选地，为选自WHO和ELN危险度分层中所涉及白血病发病和/或预后评估的的融合基因、突变基因或异常染体中的一种或几种。更优选地，为选自PML-RARα或AML1-ETO融合基因、RUNX1或ASXL1突变基因、-5或-7异常染体中的一种或几种。
[0023]在本发明的一个实施方案中，通过质谱法测定上述任一生物标志物的水平。优选地，通过质谱联用谱法(如气相谱质谱法(GC-MS)或液相谱质谱法(LC-MS))测定。[0024]同时，本发明还可利用任意合适的方法测定上述任一生物标志物的水平。作为优选，在本发明的另一个实施方式中，通过实时荧光定量PCR的方法测定生物标志物的水平。[0025]在本发明中，上述SEQ ID No.1所示的基因标志物，以及上述标志物组合物可以用于预测髓系白血病患者，例如，急性髓系白血病、慢性粒细胞白血病、骨髓异常综合征转化急性髓系白血病。作为优选，在本发明的一个实施方式中，上述SEQ ID No.1所示的基因标志物，以及上述标志物组合物用于预测急性髓系白血病患者。
[0026]本发明的另一个方面，是提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括检测上述SEQ ID No.1所示的基因标志物，以及上述标志物组合物的产品。
[0027]在本发明中，可以使用任意合适的检测上述基因的产品、方法，其都视为包含在本发明的保护范围之内。例如，聚合酶链式反应(PCR)，如qPCR；逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)；原位杂交(FISH)；转录介导的扩增(TMA)；连接酶链式反应(LCR)；链置换扩增(SDA)和基于核酸序列的扩增(NASBA)；微阵列；Southern或Northern印迹；高通量测序方法。[0028]作为优选，在本发明的一个实施方式中，所述产品为检测上述白血病标志物，或上述标志物组合物的引物或探针。
[0029]更优选地，所述产品为检测上述白血病标志物，或上述标志物组合物的引物。在本发明的一个实施方式中，使用qPCR的方法检测目标基因。
[0030]作为优选，所述试剂盒中的引物包括内参GAPDH的扩增引物对和SEQ ID No.1所示的基因标志物的扩增引物对。更优选地，所述内参GAPDH的扩增引物对为正向：5’-CAACTACATGGTTTACATGTTC-3’；反向：5’-GCCAGTGGACTCCACGAC-3’；所述SEQ ID No.1所示的基因标志物的扩增引物对为正向：5’-G G A T C C A C G G G A A A G A G A C A-3’；反向：5’-CACTCATGGTTGCTGGTGG-3’。作为优选，所述试剂盒还包括PCR反应液和试剂盒说明书。所述PCR反应液包括dNTP、Mg2+、Taq酶、荧光染料及buffer缓冲液，所述荧光染料为SYBR Green II，Taq酶为热启动酶。
[0031]在本发明的一个实施方式中，所述预测髓系白血病患者风险，包括以下步骤：[0032]步骤1)测定来自所述患者的样品中的上述白血病标志物、上述标志物组合物中每种生物标志物的水平Ct；
[0033]步骤2)检测所述样品的GAPDH水平，根据△Ct＝Ct-Ct GAPDH计算△Ct值，△Ct≥4.913为敏感型患者，△Ct＜4.913为难治复发型患者。
[0034]作为优选，上述患者的样品为患者的骨髓有核细胞。
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议