(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010636864.8
(22)申请日 2020.07.03
(71)申请人 中山大学
地址 510275 广东省广州市海珠区新港西
路135号
(72)发明人 陈俊 钟诚 黄春柳 许小丁
李森林 王立翔 王馨语 毛承舟
李懿逸
(74)专利代理机构 广州润禾知识产权代理事务
所(普通合伙) 44446
代理人 郑永泉
(51)Int.Cl.
A61K 39/395(2006.01)
A61K 38/20(2006.01)
A61K 31/4418(2006.01)
A61K 31/7048(2006.01)A61K 45/06(2006.01)A61K 9/00(2006.01)A61P 35/00(2006.01)G01N 33/68(2006.01)
(54)发明名称一种CD47抗体联合IL-6细胞因子药在肿瘤中的应用及验证其肿瘤的方法(57)摘要一种CD47抗体联合IL ‑6细胞因子药在肿瘤中的应用及验证其肿瘤的方法，利用IL ‑6对免疫系统的正向作用协同CD47抗体肿瘤，充分活化巨噬细胞以杀灭肿瘤细胞，提高免疫效果。也能基于IL ‑6激活的T细胞等进一步实现肿瘤细胞的免疫应答，提高联合应用肿瘤的应答率，充分激活 机体免疫系统的抗肿瘤作用，且相比于其他如化疗等方法能显著减少不良反应。本发明还通过具有靶向肿瘤或肿瘤微环境的纳米材料负载IL ‑6细胞因子药，能提高的靶向性，使IL ‑6富集于肿瘤微环境，减少进入外周血的IL ‑6量，减小副作用，更能充分发挥到达肿瘤的CD47抗体量，减少其单独作用的用量，
实现完全的联合应用。权利要求书1页 说明书7页 附图1页CN 111905101 A 2020.11.10
C N 111905101
A
1.CD47抗体与IL -6细胞因子药联用在制备抗肿瘤药物中的用途，所述IL -6细胞因子药包括IL -6细胞因子和/或促IL -6细胞因子药物。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，促IL -6细胞因子药物包括BayK8644试剂和/或Etoposide(VP -16)。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述IL -6细胞因子药负载于靶向肿瘤或肿瘤微环境的纳米材料上。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗肿瘤药物与至少一种抗癌组合施用，所述至少一种抗癌选自由免疫疗法、化学疗法、放射疗法、血管生成抑制剂疗法、生物制品疗法、骨髓移植、外周血干细胞移植、热疗法、激光疗法、光动力疗法、癌症靶向疗法组成的组。
5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗肿瘤药物的使用过程中先使IL -6细胞因子药富集于肿瘤微环境中，再使CD47抗体作用于肿瘤。
6.根据权利要求1～4任一项所述的用途，其特征在于，所述肿瘤为结肠癌。
7.一种试剂盒，其特征在于，包括CD47抗体和IL -6细胞因子药，所述IL -6细胞因子药包括IL -6细胞因子和/或促IL -6细胞因子药物。
8.根据权利要求6所述的一种试剂盒，其特征在于，还包括用于负载IL -6细胞因子药靶向肿瘤或肿瘤微环境的纳米材料。
9.根据权利要求7所述的一种试剂盒，其特征在于，IL -6细胞因子药被负载于纳米材料上并先于所述CD47抗体施用；或，所述IL -6细胞因子药被负载于纳米材料上与所述CD47抗体被相伴施用。
10.一种验证CD47抗体与IL -6细胞因子药联合应用以有效肿瘤的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、体外吞噬细胞吞噬检测，通过比较单独CD47抗体和CD47抗体联合IL -6细胞因子药作用于吞噬细胞吞噬肿瘤细胞过程的影响检测IL -6细胞因子药对CD47抗体作用于吞噬细胞吞噬作用的影响；
S2、基于动物瘤模型的肿瘤检测，通过比较单独CD47抗体和CD47抗体联合IL -6细胞因子药对肿瘤发展的影响验证IL -6细胞因子药对CD47抗肿瘤作用的影响。
权 利 要 求 书1/1页CN 111905101 A
一种CD47抗体联合IL-6细胞因子药在肿瘤中的应用及验
证其肿瘤的方法
技术领域
[0001]本发明涉及医疗领域，更具体地，涉及一种CD47抗体联合IL-6细胞因子药在肿瘤中的应用及验证其肿瘤的方法。
背景技术
[0002]CD47又称整联蛋白相关蛋白，其配体为巨噬细胞表面的信号调节蛋白α链(SIRP α)，当CD47与SI
RPα结合时能传递抑制信号，抑制巨噬细胞的吞噬活性。肿瘤细胞正是通过表达CD47并与巨噬细胞SIRPα结合以促进肿瘤细胞免疫逃逸的，使得数量庞大的巨噬细胞无法充分发挥其吞噬作用，降低了巨噬细胞对肿瘤发展的影响。在此基础上，为了达到肿瘤的目的，现有技术针对性的研究有阻断CD47-SIRPα通路靶向CD47的药物，包括CD47抗体，但该类药物大部分的适应症集中于恶性血液瘤，极少针对实体瘤，且基本都处于临床I 期。另外，临床实验表明血液毒性对于该靶点药物成药性设计和临床剂量耐受性提出了挑战，动物模型的选择也对于评价药物有效性和安全性存在着不小的挑战；因此靶向CD47抗体药物研发仍待进一步深入。
[0003]IL-6是由巨噬细胞、成纤维细胞和T细胞产生的一种多功能细胞因子，具有激活T 细胞，防止细胞凋亡，诱导巨噬细胞活化，招募免疫细胞等调节免疫应答的功能。现有研究表示，其会促进肿瘤细胞存活，还有助于免疫抑制CD4+T细胞介导的抗肿瘤作用，且高水平的IL-6与肿瘤患者预后不良相关。但最近Elisabeth等人发现在小鼠肿瘤模型给予anti-CTLA-4和anti-PD-1后，阻断TNF通路能明显提高免疫的效果，而阻断IL-6通路却明显抑制免疫的效果。表明IL-6并不是对免疫过程只有抑制作用。
[0004]如能通过提高适当浓度的IL-6以协同CD47抗体肿瘤，则或许能相比于现有技术单独使用CD47抗体显著提高肿瘤的效果。
[0005]目前尚未见IL-6细胞因子与CD47抗体联合用于抗肿瘤的报道。
发明内容
[0006]本发明旨在克服上述现有技术的至少一种不足，提供一种CD47抗体联合IL-6细胞因子药在肿瘤中的应用及其肿瘤的验证方法，将适量浓度的IL-6细胞因子或促使产生细胞产生IL-6细胞因子的药物联用抗CD-47以肿瘤能够有效增强巨噬细胞吞噬肿瘤细胞的能力，提高肿瘤免疫效果，延长肿瘤患者生存期，为临床免疫提供新的选择；通过验证联合肿瘤的方法能够进一步确认CD47抗体联合IL-6细胞因子药能有效提高免疫效果，以便基于此提供新的肿瘤方向。
[0007]本发明采取的技术方案是：
[0008]本发明提供了一种CD47抗体与IL-6细胞因子药联用在制备抗肿瘤药物中的用途，所述IL-6细胞因子药包括IL-6细胞因子和/或促IL-6细胞因子药物，基础均是CD47抗体与IL-6细胞因子的联用。利用IL-6对免疫系统的正向作用协同CD47抗体肿瘤，如，利用所
述IL-6促进巨噬细胞吞噬过程中细胞骨架的极化作用协同CD47抗体肿瘤，有助于充分活化巨噬细胞以杀灭肿瘤细胞，提高CD47抗体为主导的免疫效果。也能基于IL-6激活的T细胞等免疫细胞进一步促进对肿瘤细胞的免疫应答，提高联合应用肿瘤的应答率，充分激活机体免疫系统的抗肿瘤作用，且相比于其他如化疗等方法能显著减少不良反应。CD47抗体与IL-6细胞因子联用在肿瘤效果上的提升能够延长肿瘤患者的生存期，提高肿瘤患者的存活率。且基于机体自身免疫系统进行，也有助于
减小复发、转移的可能性。所述IL-6细胞因子以特定浓度与CD47抗体联用，因为过高浓度可能会导致免疫系统对自身产生不良反应，所以IL-6以较高且适量的浓度与CD47抗体联用。本发明中能直接使用IL-6细胞因子与CD47抗体联用，也能使用促IL-6细胞因子药物与CD47抗体联用，也可以同时施用IL-6细胞因子、促IL-6细胞因子药物与CD47抗体联用。因为促IL-6细胞因子药物能促使包括吞噬细胞的细胞产生IL-6细胞因子，所以其至少能起到与IL-6细胞因子同样的作用，且基于促IL-6细胞因子药物还有助于利用其除促IL-6细胞因子产生外的作用协同IL-6进一步抗肿瘤。
[0009]进一步的，所述促IL-6细胞因子药物包括BayK8644试剂和/或Etoposide(VP-16)等，所述BayK8644能诱导巨噬细胞的IL-6表达，便于IL-6细胞因子的富集。依托泊苷Etoposide(VP-16)是一种常用的抗肿瘤化疗剂，能促进IL-6细胞因子产生，同时也能利用其自身特性协同CD47抗体、产生的IL-6共同抗肿瘤，从而显著提高抗肿瘤效果。
[0010]进一步的，所述IL-6细胞因子药负载于靶向肿瘤或肿瘤微环境的纳米材料上。相对于单个肿瘤细胞，单个巨噬细胞对于纳米材料的吸收量是其吸收量的几千倍，即巨噬细胞可以作为纳米材料的“蓄水池”，将纳米材料富集在肿瘤微环境中。通过将适量的IL-6细胞因子药修饰在纳米材料上，有助于IL-6细胞因子药富集于肿瘤微环境中，尤其是肿瘤微环境中的巨噬细胞中，从而以较高的浓度与CD47抗体共同作用于肿瘤组织，有助于增强巨噬细胞吞噬肿瘤细胞的能力，也有助于促进免疫系统对肿瘤细胞的免疫应答。从而有效肿瘤，延长病人生存期，为目前临床肿瘤(如结肠癌)提供新选择。此外，纳
米材料能够自由穿过组织的间隙和人体中的毛细血管、甚至可以通过血脑屏障，有助于携带IL-6细胞因子药靶向运输至肿瘤或肿瘤微环境中，从而实现靶向，进一步提高效果；且靶向运输IL-6细胞因子药也有助于减小外周血中IL-6浓度，从而减少高浓度IL-6引起的副作用。
[0011]进一步的，所述抗肿瘤药物与至少一种抗癌组合施用，所述至少一种抗癌选自由免疫疗法、化学疗法、放射疗法、血管生成抑制剂疗法、生物制品疗法、骨髓移植、外周血干细胞移植、热疗法、激光疗法、光动力疗法、癌症靶向疗法组成的组。IL-6细胞因子药和CD47抗体除了联合应用以实现并提高免疫效果外，还能结合其他疗法或药物以进一步提高肿瘤的效果。
[0012]进一步的，所述抗肿瘤药物的使用过程中先使IL-6细胞因子药富集于肿瘤微环境中，再使CD47抗体作用于肿瘤。能在CD47抗体到达肿瘤组织前实现IL-6在肿瘤微环境中的富集，通过在肿瘤微环境中富集的方式来提高与CD47抗体共同作用时的浓度，有助于以CD47抗体为主导快速联合作用于肿瘤，避免部分用量CD47抗体在IL-6浓度未达到适应浓度时就作用于肿瘤，从而进一步提升联合IL-6细胞因子、CD47抗体的效果。且相比于与CD47抗体同时施用，采用该方式放宽了对IL-6细胞因子药施用时浓度的要求，有助于简化
用量、操作并达到同样的技术效果。
[0013]进一步的，所述肿瘤为血液瘤或实体瘤。因为IL-6细胞因子的特殊性，尤其是作为一种炎症细胞
因子，其能招募免疫细胞，所以至少能通过靶向肿瘤的IL-6招募靶向肿瘤的免疫细胞实现抗肿瘤，包括靶向实体瘤。且CD47抗体和IL-6细胞因子均能活化巨噬细胞，所以CD47抗体和IL-6细胞因子两者结合应用于实体瘤时能够显著提高巨噬细胞的免疫功能，从而实现对实体瘤的有效。同时，CD47抗体本身作为一种有效的血液瘤物质，其结合IL-6细胞因子也能实现对血液瘤效果的提升。
[0014]进一步的，所述肿瘤为结肠癌。结肠癌是最为常见的一种消化道恶性肿瘤，在全球肿瘤发病率中位列第三，死亡率位列第二。目前在我国，其发病率也一直呈增长趋势。现有技术中对结肠癌的手段主要以手术、放疗、化疗三大传统方法为主，但后复发和转移仍然显著，其毒副作用也不可忽视。免疫疗法利用机体自身免疫系统结肠癌，其可能会引起副反应的物质也只有免疫药物，本发明通过被适当提高浓度的IL-6细胞因子与CD47抗体联合给药，IL-6细胞因子属于免疫系统自有物质，且IL-6细胞因子+抗CD-47抗体联合给药相比于单独的CD47抗体给药免疫效果有所提高，所以在达到同样效果时，联合用药能减少CD47抗体用量，从而减少因CD47抗体作用于正常细胞引起的不良反应。基于IL-6细胞因子+CD47抗体对结肠癌的，有助于为后续研究应用于临床上的药物提供基础，并提供结肠癌的方向。
[0015]一种试剂盒，包括CD47抗体和IL-6细胞因子药，所述IL-6细胞因子药包括IL-6细胞因子和/或促IL-6细胞因子药物。所述试剂盒应用于肿瘤中，进一步的，应用于结肠癌。试剂盒中CD47抗体、IL-6细胞因子药辅用可接受的药用载体制成药学上可接受的试剂。通过试剂盒能够实现CD47抗体和IL-6
细胞因子药的联用，即CD47抗体与IL-6细胞因子的联用，从而基于IL-6和CD47抗体提高激活巨噬细胞的效果，促进巨噬细胞活化并杀灭肿瘤细胞，也促进T细胞等免疫细胞的应答，充分发挥机体免疫系统的抗肿瘤作用。[0016]进一步的，还包括用于负载IL-6细胞因子药靶向肿瘤或肿瘤微环境的纳米材料。通过纳米材料负载IL-6细胞因子药有助于靶向运输，使IL-6细胞因子直接或通过促IL-6细胞因子药物间接使IL-6细胞因子集中于肿瘤微环境中，一方面能够避免IL-6集中于正常组织中引起不良反应，另一方面能使得IL-6富集于肿瘤微环境的巨噬细胞中，从而使其具有一定高的浓度，使得其在CD47抗体到来时联合作用于肿瘤以实现有效的抗肿瘤效果。[0017]进一步的，IL-6细胞因子药被负载于纳米材料上并先于所述CD47抗体施用；或，所述IL-6细胞因子药被负载于纳米材料上与所述CD47抗体被相伴施用。当所述IL-6细胞因子药被负载于纳米材料并先于CD47抗体施用时，则能在CD47抗体到达肿瘤组织前实现IL-6的靶向富集，通过在肿瘤微环境中的富集提高与CD47抗体共同作用时的浓度，有助于以CD47抗体为主导快速联合作用于肿瘤，避免部分用量CD47抗体在IL-6浓度未达到适应浓度时就作用于肿瘤。除了使IL-6细胞因子药被负载于纳米材料上先于CD47抗体施用外，还能使IL-6细胞因子药与CD47抗体相伴施用，但其在施用前需给予IL-6细胞因子药特定高的浓度以使得其在靶向到达肿瘤时具有或产生适应与CD47抗体联合作用的IL-6细胞因子浓度，该方式同样能实现联合应用肿瘤的效果，但相比于IL-6细胞因子药负载于纳米材料上并先施用的方式需要用量上的准确把控。
[0018]本发明的另一目的是提供一种验证CD47抗体与IL-6细胞因子药联合应用以有效
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