(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011236937.0
(22)申请日 2020.11.09
(71)申请人 唐山师范学院
地址 063020 河北省唐山市建设北路156号
(72)发明人 王桂兰 王英 陈娜 张红心
陈超
(74)专利代理机构 唐山科轩专利代理事务所
(特殊普通合伙) 13146
代理人 王永红
(51)Int.Cl.
A01N 61/00(2006.01)
A01P 1/00(2006.01)
A01P 3/00(2006.01)
A01H 4/00(2006.01)
(54)发明名称
和使用方法
(57)摘要
一种植物组织培养外植体消毒剂，其特征在
剂对植物组织培养中外植体上的细菌和真菌均
有很好的杀灭作用，对外植体的损害和抑制作用
较小，对环境无污染，制备方法简单快捷，使用过
程方便，
适合大范围推广。权利要求书1页 说明书3页CN 112369431 A 2021.02.19
C N 112369431
A
1.一种植物组织培养外植体消毒剂，其特征在于，所述消毒剂为木麻黄纯化木醋液。
2.根据权利要求1所述的植物组织培养外植体消毒剂，其特征在于，所述木麻黄纯化木醋液含有机酸1.4-2.4%，酚类0.9-1.9%，酮类0.8-1.8%，酯类1.7-2.7%，其余为水。
3.如权利要求1所述的植物组织培养外植体消毒剂的制备方法，其特征在于，所述消毒剂为木麻黄纯化木醋液，该木麻黄纯化木醋液的制备过程如下：
S1：选取木麻黄树木枝杈，在300-600℃的温度环境下进行无氧热裂解；
S2：步骤S1过程中所产生的烟气经冷却和静置后得到的酒红液体状的木醋原液；S3：步骤S2所获得的木醋原液经过滤、蒸馏，得到纯化木醋液，即木麻黄纯化木醋液。
4.如权利要求3所述的植物组织培养外植体消毒剂的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所选取的木麻黄树木枝杈为树木修剪下的新鲜或干燥的枝杈，截成5厘米左右。
5.如权利要求3所述的植物组织培养外植体消毒剂的制备方法，其特征在于，步骤S2中，静置时间为至少6个月。
6.一种如权利要求3-5中任一项所述方法所制得的植物组织培养外植体消毒剂的使用方法，其特征在于，所述消毒剂为木麻黄纯化木醋液；其使用步骤如下：
S1、待消毒的植物组织外植体先用清水流水冲洗15-20分钟后放置在超净工作台上，待用；
S2、将S1步骤中洗净的外植体在75%的酒精中浸润30秒；
S3、倒掉酒精，用稀释之后的消毒剂浸泡S2得到的外植体6-10分钟；
S4、取出浸泡后的外植体，再用无菌水冲洗3-4遍即可。
7.根据权利要求6所述的植物组织培养外植体消毒剂的使用方法，其特征在于，步骤S3中，消毒剂的稀释倍数是4倍。
权 利 要 求 书1/1页CN 112369431 A
植物组织培养外植体消毒剂及其制备方法和使用方法
技术领域
[0001]本发明涉及植物组织培养外植体消毒领域，属于纯化木醋液应用的技术领域，具体地说是一种植物组织培养外植体消毒剂、以及这种消毒剂的制备方法和使用方法。
背景技术
[0002]在植物组织培养技术中，植物外植体消毒成功与否是组培初代培养的技术关键。常用的外植体消毒剂有（）、次氯酸钠、次氯酸钙等化学消毒剂，其中作为外植体消毒剂效果很好，但有剧毒，对人畜有害且污染环境。次氯酸钠和次氯酸钙是具有强腐蚀性和强氧化性的含氯消毒剂，虽也有较好的消毒效果，但对使用者呼吸道有强烈的刺激，对环境也有较大污染。因此，对于植物组织培养外植体进行杀菌消毒的试剂，如何能够环保且高效，是本领域技术人员一直在研究和探索的课题。
[0003]木醋液是一种植物热解和碳化产生的气体经冷凝和分离而获得的有机液体成分，其中有机化学成分占10%-20%，主要是醋酸，含量占有机物总量的50%左右，其他有机化学成分则为酚类、醇类、醛类等。在17世纪中叶，木醋液是由欧洲的木材干馏工业而制得的，到18世纪80年代，日本引进了木醋液。20世纪40年代，木醋液被美、日、韩等国家最先重视。木醋液在美国主要被用于林果业及花园园艺等方面；在日本主要被用于农业、食品、医药等方面；在地区主要被用于促进农作物生长以及预防和病虫害等方面；而在中国大陆地区对其研究与应用比较晚，对其应用主要集中在成分分析、提纯
及农业等方面。前人研究表明，木醋液对真菌和细菌都有一定的抑制作用，有广谱抑菌的效果，而木醋液对于动物和人体未见毒害作用，因此木醋液在微生物防治等方面有广阔的应用前景。因此，木醋液在杀菌消毒方面的应用成为本领域技术人员重要的研究课题。
发明内容
[0004]本发明针对背景技术中提及的技术缺陷，一是提供一种环保高效的植物组织培养外植体消毒剂，二是提供了这种消毒剂的制备方法，三是提供了这种消毒剂的使用方法。[0005]本发明采用的技术方案是：一种植物组织培养外植体消毒剂，其特征在于，所述消毒剂为木麻黄纯化木醋液。
[0006]所述木麻黄纯化木醋液含有机酸1.4-2.4%，酚类0.9-1.9%，酮类0.8-1.8%，酯类1.7-2.7%，其余为水。
[0007]所述消毒剂为木麻黄纯化木醋液，该木麻黄纯化木醋液的制备过程如下：S1：选取木麻黄树木枝杈，在300-600℃的温度环境下进行无氧热裂解；
S2：步骤S1过程中所产生的烟气经冷却和静置后得到的酒红液体状的木醋原液；
S3：步骤S2所获得的木醋原液经过滤、蒸馏，得到纯化木醋液，即木麻黄纯化木醋液。[0008]步骤S1中，所选取的木麻黄树木枝杈为树木修剪下的新鲜或干燥的枝杈，截成5厘米左右。
[0009]步骤S2中，静置时间为至少6个月。
[0010]植物组织培养外植体消毒剂的使用方法，所述消毒剂为木麻黄纯化木醋液；其使用步骤如下：
S1、待消毒的植物组织外植体先用清水流水冲洗15-20分钟后放置在超净工作台上，待用；
S2、将S1步骤中洗净的外植体在75%的酒精中浸润30秒；
S3、倒掉酒精，用稀释之后的消毒剂浸泡S2得到的外植体6-10分钟；
S4、取出浸泡后的外植体，再用无菌水冲洗3-4遍即可。
[0011]步骤S3中，消毒剂的稀释倍数是4倍。
[0012]与现有技术相比，本发明所公开的这种消毒剂对植物组织培养中外植体上的细菌和真菌均有很好的杀灭作用，对外植体的损害和抑制作用较小，对环境无污染，制备方法简单快捷，使用过程方便，适合大范围推广。
具体实施方式
[0013]本发明所公开的这种植物组织培养外植体消毒剂为木麻黄纯化木醋液。本外植体消毒方法所用的
消毒剂为木麻黄纯化木醋液。木麻黄（学名：Casuarina equisetifolia Forst.）是木麻黄科，木麻黄属常绿乔木。木麻黄原产澳大利亚东北部、北部及太平洋各岛靠近海的沙滩和沙丘上。、福建、广东、广西等省区沿海和南海诸岛屿均有栽培。木麻黄生长迅速，萌芽力强，由于它的根系深广，具有耐干旱、抗风沙和耐盐碱的特性，因此成为热带海岸防风固沙的优良先锋树种。木麻黄可作为优良薪炭材，由于树皮含单宁11%-18%，纯度可达80%-85%，还可作为栲胶的工业原料。木麻黄枝叶可供家畜饲料，也可入药，种子还可作为鸡的饲料。
[0014]作为植物组织培养外植体消毒剂使用的木麻黄纯化木醋液，其有机成分含有机酸1.4-2.4%，酚类0.9-1.9%，酮类0.8-1.8%，酯类1.7-2.7%，其余为水，占90%以上。
[0015]该木麻黄纯化木醋液的制备过程如下：
S1：选取木麻黄树木枝杈，在300-600℃的温度环境下进行无氧热裂解；所选取的木麻黄树木枝杈为树木修剪下的新鲜或干燥的枝杈，截成5厘米左右。
[0016]S2：步骤S1过程中所产生的烟气经冷却和静置后得到的酒红液体状的木醋原液；静置时间为6个月以上。
[0017]S3：步骤S2所获得的木醋原液经蒸馏、过滤，得到纯化木醋液，即木麻黄纯化木醋液。
[0018]植物组织培养外植体消毒剂的使用方法如下：
S1、待消毒的植物组织外植体先用清水流水冲洗15-20分钟后放置在超净工作台上，待用；
S2、将S1步骤中洗净的外植体在75%的酒精中进排30-45秒；
S3、倒掉酒精，用稀释之后的消毒剂浸泡S2得到的外植体6-10分钟；消毒剂的稀释倍数是1-4倍。作为最佳的方案，消毒剂的稀释倍数是4倍，即使用时消毒剂的浓度为25%。植物组培外植体消毒的原则是既要杀灭外植体上的所有菌类又不能伤害植物组织细胞，为了最大限度降低细胞伤害，也为了降低成本，所以，用于植物组培外植体消毒的稀释倍数采用4倍。[0019]S4、取出浸泡后的外植体，再用无菌水冲洗3-4遍即可。
[0020]下面以具体实施例来详细说明本方案。
[0021]实施例1
用配制含此纯化木醋液10%、12.5%、16.7%、25%、50%（体积比）的PDA培养基，将植物组织培养常见的球状枝孢菌、米曲霉、栖土曲霉等三种真菌和成团泛菌、内生芽孢杆菌、病研所芽孢杆菌和腐臭假单胞菌等四种细菌接种于以上的培养基上。不同浓度的纯化木醋液对七种菌的抑制作用不同，其中25%及以上的浓度对三种真菌和四种细菌均有完全的杀灭作用（具体消毒情况见表1）。
[0022]实施例2
25%纯化木醋液（稀释倍数为4倍为常规用法）对不同外植体如八宝景天叶片、银杏叶片、鹅绒藤茎段和带表皮毛的非洲紫罗兰叶片等进行处理，在消毒时间6-10min范围内能完全杀灭其外植体的各种菌类，可获得无菌外植体。在相同条件下处理10min，木醋液对外植体的消毒效果与次氯酸钠和的消毒效果相同，且对人体无伤害，对环境无污染（不同消毒液的消毒方法与环保情况见表2）。
[0023]表2外植体消毒处理方法及环保情况
消毒剂种类处理时间（min）环境污染程度组培操作中对人体伤害程度
木麻黄木醋液6-10--
次氯酸钠6-10+++
次氯酸钙6-10+++++
6-10++++++
注：“-”表示无污染和无伤害；“+”表示轻度；“++”表示中度；“+++”表示重度。
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