[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公布说明书
[11]公开号CN 101380467A [43]公开日2009年3月11日
[21]申请号200710146306.8[22]申请日2007.09.04
[21]申请号200710146306.8
[71]申请人邵卫星
地址266000山东省青岛市市南区南京路369号
[72]发明人邵卫星 [74]专利代理机构北京捷诚信通专利事务所代理人魏殿绅 庞炳良
[51]Int.CI.A61K 39/12 (2006.01)A61K 39/295 (2006.01)A61P 31/12 (2006.01)
权利要求书 2 页 说明书 10 页
[54]发明名称
[57]摘要
本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种
多联灭活疫苗病毒(抗原)液浓缩工艺。该工艺在样
前处理阶段，采用连续离心，浓缩前对病毒液进行
了除杂蛋白和细菌处理；浓缩阶段采用多个并联浓
缩柱和大功率真空泵；并在系统清洗阶段使用胰酶
消化残留蛋白，改进了清洗方法，提高清洗的效率，
密闭连接；生产工艺适合工厂化生产，能直接进行
大规模的生产。
200710146306.8权 利 要 求 书第1/2页 1.一种多联灭活疫苗病毒(抗原)液浓缩工艺，包括如下工艺过程：
(1)采用分离因数在8000g～10000g的液—固连续离心机对液体进行离心分离，液体在离心机内驻留的时间大于15秒，出料口接密闭的物料罐I，经过离心的液体流进物料罐I内；
(2)采用微滤装置去除病毒液中的细菌，微滤装置的出口通过管道与物料罐II连接；
(3)将过滤后残留的溶液用高速离心机进行离心分离，将分离后的上清液加入到物料罐II中；
(4)使用超滤浓缩装置对病毒液进行浓缩，超滤浓缩装置中选用中空纤维或板框式膜包做为超滤柱，将多个相同的中空纤维柱或膜包并联在一起，增加浓缩的效率，并对物料罐II进行冷却，温度为4℃～10℃；
(5)病毒浓缩结束后，对整个系统进行清洗。
2.如权利要求1所述的多联灭活疫苗病毒(抗原)液浓缩工艺，其特征在于：在步骤(5)中清洗液—固连续离
心机时，首先清除转鼓或碟片中的残渣，然后开动机器，用大量的自来水清洗，然后通入蒸汽消毒，封闭连续离心。
3.如权利要求1所述的多联灭活疫苗病毒(抗原)液浓缩工艺，其特征在于：在步骤(5)中清洗高速离心机时，先用清水清洗离心管，然后用双蒸水冲洗，之后倒置干燥。
4.如权利要求1或2或3所述的多联灭活疫苗病毒(抗原)液浓缩工艺，其特征在于：在步骤(5)中清洗过滤和浓缩装置时，启
200710146306.8权 利 要 求 书 第2/2页动装置，把进料和出料口的阀门全部打开，关闭滤液阀门，先冲洗膜表面残留的蛋白，然后打开滤液阀门，关闭部分出料阀门，保证膜的内外压力差为0.25～0.30Pa，正向冲洗；然后，用无菌水配置0.025％的胰蛋白液，通过真空泵将胰酶液抽到装置中，关闭进、出料阀门，使胰酶浸泡整个浓缩柱，静置一段时间后，用胰酶消化残留的蛋白；随后启动反向冲洗系统冲洗；关闭反向冲洗系统，启动正向浓缩系统，用无菌水冲洗；最后向过滤和浓缩装置通入蒸汽消毒，然后分别用质量浓度为0.1％和0.2％的氢氧化钠溶液浸泡浓缩装置和过滤装置。
5.如权利要求1所述的多联灭活疫苗病毒(抗原)液浓缩工艺，其特征在于：步骤(2)中微滤装置的微滤柱膜的孔径为0.22微米。
6.如权利要求1所述的多联灭活疫苗病毒(抗原)液浓缩工艺，其特征在于：步骤(4)中浓缩后使病毒液的体积降为原来的1/2～1/4。
200710146306.8说 明 书第1/10页
多联灭活疫苗病毒(抗原)液浓缩工艺
技术领域
本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种多联灭活疫苗病毒(抗原)液浓缩工艺。
背景技术
灭活疫苗是目前预防控制动物病毒性传染病(如禽流感等)的必要手段。每羽份灭活疫苗中抗原量的多少决定疫苗免疫效果的好或差，提高灭活疫苗中抗原的量是生产优质灭活疫苗的关键；另一方面，在生产多联灭活病毒疫苗时，需要加入多种抗原(3或4种)，与油项按固定比例混合乳化制成疫苗，在相同的免疫剂量下，每羽份疫苗中每种抗原的含量要减少，这样会降低疫苗的免疫效果，因此，在保证不减少抗原量的条件下，必须降低每种抗原的体积，才能使多联疫苗达到单联疫苗的免疫效果。
抗原浓缩是解决该问题的唯一途径。抗原浓缩有许多方法，如化学法(PEG沉淀法)、超速离心法和超滤
法等。其中，超滤法是近年出现的一种浓缩技术。目前，超滤法用于病毒的浓缩还不多见，尤其是适用工厂化的工艺技术还不成熟，绝大多数仅限于实验研究阶段。限制工厂化应用的主要原因是：1.病毒颗粒小，从几百到几十个纳米之间，最小的只有20纳米，需要根据病毒颗粒的大小选择合适孔径的超滤膜，才能达到能完全截留病毒的目的；2.疫苗抗原液成分复杂，含有大量的不溶性和可溶性杂蛋白，比较粘稠，容易污染超滤膜，降低浓缩效率，减少设备的使用寿命。用细胞培养获得的抗原液
200710146306.8说 明 书 第2/10页含有大量的细胞碎片，通过离心，相对比较容易去除；但用鸡胚繁殖病毒所获得的抗原液含有大量的杂蛋白和颗粒，抗原液中可溶性蛋白多，相对粘稠，更容易堵塞超滤膜，造成膜污染；3.疫苗抗原液容易受到杂菌污染，一方面是在病毒液收获的过程中容易受到大肠杆菌的污染；另一方面，鸡胚可能带有一些隐性感染的细菌，如沙门氏菌。如果不除去其中污染的细菌和杂蛋白，在病毒液被浓缩的过程中，细菌和杂蛋白也被浓缩。用这样抗原液生产出来的疫苗免疫动物后，会给动物带来严重的负反应，甚至引起免疫动物的死亡。正是由于以上3个主要的原因，目前的兽用多联灭活疫苗的抗原液的浓缩工艺还不成熟，尤其不能用于工厂化，多数停留在实验室阶段，而且主要是停留在浓缩效果方面的研究，很少涉及到浓缩前的样品处理和浓缩后的设备清洗。
发明内容
本发明的目的在于针对现有抗原浓缩工艺所存在的缺陷，提供一种浓缩效率高，浓缩后病毒液品质好，适用于工业化生产的多联灭活疫苗病毒(抗原)液浓缩工艺。
本发明的技术方案如下：一种多联灭活疫苗病毒(抗原)液浓缩工艺，包括如下工艺过程：
(1)采用分离因数在8000g～10000g的液—固连续离心机对液体进行离心分离，液体在离心机内驻留的时间大于15秒，出料口接密闭的物料罐I，经过离心的液体流进物料罐I内；
(2)采用微滤装置去除病毒液中的细菌，微滤装置的出口通过管道与物料罐II连接；
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