(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010976584.1
(22)申请日 2020.09.16
(71)申请人 北京鑫开元医药科技有限公司
地址 101102 北京市通州区中关村科技园
区通州园金桥科技产业基地景盛南四
街15号20号楼二层B
申请人 上海现代哈森（商丘）药业有限公司
(72)发明人 霍志强 陈洪 吕永磊 唐睿
戴信敏
(74)专利代理机构 北京嘉科知识产权代理事务
所(特殊普通合伙) 11687
代理人 杨波
(51)Int.Cl.
G01N 21/31(2006.01)
G01N 21/33(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明属于药物领域，尤其涉及一种含铋制
剂中游离铋的测定方法，该方法包括：制备供试
溶出仪小杯法装置制备样品，取样后，加入离心
机离心，取上清液，用硝酸溶液稀释，得到供试品
溶液；制备对照溶液：量取铋标准溶液，用硝酸溶
液将所述铋标准溶液稀释成不同铋浓度的溶液，
得到对照溶液；游离铋含量的测定：按照原子吸
收分光光度法测定所述供试品溶液和所述对照
溶液中游离铋的浓度，进而计算出所述含铋制剂
中游离铋的含量。本发明提供的含铋制剂中游离
铋的测定方法采用含铋制剂在人工胃液中的溶
出量，评价含铋制剂中的游离铋含量，为含铋制
剂质量评价提供了很好的手段。权利要求书1页 说明书14页 附图3页CN 112285040 A 2021.01.29
C N 112285040
A
1.一种含铋制剂中游离铋的测定方法，其特征在于，包括：
制备供试品溶液：称取含铋制剂，以人工胃液为介质，采用溶出仪小杯法装置制备样品，取样后，加入离心机离心，取澄清液，用硝酸溶液稀释，得到供试品溶液；
制备对照溶液：量取铋标准溶液，用硝酸溶液将所述铋标准溶液稀释成不同铋浓度的溶液，得到对照溶液；
游离铋含量的测定：按照原子吸收分光光度法在223.0nm波长处分别测定对照溶液的吸光度，绘制出标准曲线，得到线性方程；测试供试品溶液的吸光度，根据标准曲线的线性方程计算出供试品溶液中游离铋的浓度，进而计算出所述含铋制剂中游离铋的含量。
2.根据权利要求1所述的含铋制剂中游离铋的测定方法，其特征在于，所述人工胃液的制备方法包括：
量取第一体积的盐酸，加水稀释至第二体积，得到稀盐酸；
称取第三体积的所述稀盐酸、第四体积的水和预设质量的胃蛋白酶，混合均匀后，加水定容至第五体积，得到人工胃液。
3.根据权利要求1所述的含铋制剂中游离铋的测定方法，其特征在于，所述采用溶出仪小杯法装置制备样品，包括：
采用溶出仪小杯法装置，加入体积为80-150mL的人工胃液，投入单位计量以三氧化二铋计120mg，转速不低于每分钟50转，时间不少于30分钟后取样，取样量不少于5mL。
4.根据权利要求1所述的含铋制剂中游离铋的测定方法，其特征在于，所述离心机的转速为每分钟不少于4000转，离心时间不低于5分钟。
5.根据权利要求1所述的含铋制剂中游离铋的测定方法，其特征在于，所述硝酸溶液的浓度为1-3％。
6.根据权利要求1所述的含铋制剂中游离铋的测定方法，其特征在于，所述制备供试品溶液步骤包括：离心后，量取第六体积的上清液，用所述硝酸溶液稀释至第七体积，得到供试品溶液。
7.根据权利要求1所述的含铋制剂中游离铋的测定方法，其特征在于，所述制备对照溶液步骤中，得到的对照溶液中铋浓度分别为：0、5ppm、10ppm、15ppm、20ppm、25ppm。
8.根据权利要求1所述的含铋制剂中游离铋的测定方法，其特征在于，所述按照原子吸收分光光度法是指按照中国药典2020年版四部通则0406第一法。
9.根据权利要求1所述的含铋制剂中游离铋的测定方法，其特征在于，所述游离铋含量的测定步骤中，
含铋制剂中游离铋的含量的计算公式为：
其中，m为含铋制剂中游离铋的含量(mg)，C为供试品溶液中游离铋的浓度(μg/mL)，V为稀释后的总体积。
权 利 要 求 书1/1页CN 112285040 A
一种含铋制剂中游离铋的测定方法
技术领域
[0001]本发明属于药物领域，具体涉及一种含铋制剂中游离铋的测定方法。
背景技术
[0002]消化道系统疾病是常见病、多发病，在该系统疾病中尤其以胃及十二指肠的发病率最高，患病人数占世界人口的10％以上。同时胃肠道溃疡是当今影响人类健康的主要疾病之一，因此，寻疗效好、价格低廉的抗溃疡病药物是我国药物研发领域的热点。[0003]枸橼酸铋钾是一种不定组成的含铋复合物，为白粉末，味咸，在水中极易溶解，在乙醇中溶解极微。枸橼酸铋钾经定量热水溶解后口服，进入胃液后，在酸性条件下与胃蛋白酶中的蛋白质及氨基酸进一步络合生成有效成分三氧化二铋胶体沉淀，三氧化二铋胶体沉淀可形成弥漫型的保护层覆盖于溃疡面上，促进溃疡粘膜再生和溃疡愈合。
[0004]现在国内枸橼酸铋钾颗粒、枸橼酸铋钾胶囊、枸橼酸铋钾片、胶体果胶铋胶囊、含胶体果胶铋制剂等含铋制剂，所用的辅料一般为淀粉、羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁等。通常采用湿法制粒后分装，此方法得到的产品稳定性差异大，在胃中难以迅速形成均匀胶体沉淀，临床上不利于胶体沉降在溃疡面、促进溃疡粘膜再生和溃疡愈合，导致临床疗效差异大。铋作为一种重金属，一旦过多被人体吸收，将会导致毒性反应，出现肾脏、骨关节以及中枢神经系统等的损害。枸橼酸铋钾颗粒、枸橼酸铋钾胶囊、枸橼酸铋钾片、胶体果胶铋胶囊等含铋制剂溶解后形成游离铋，在胃的酸性环境中大部分形成弥散性保护层覆盖在溃疡面上产生药理作用，少量游离在人体消化系统中。如果原料和制剂中游离铋的含量偏高，必然会导致进入人体消化系统中的游离铋的总量增加，从安全性的角度出发，这是潜在的安全隐患。而枸橼酸铋钾颗粒、枸橼酸铋钾胶囊、枸橼酸铋钾片、胶体果胶铋胶囊等含铋制剂中游离铋的来源可能是部分起始物中含有过量的游离铋未反应完全，未能全部形成稳定的形态，导致原料中有少量游离态铋的存在，这一部分游离铋在体内有可能吸收入血，造成血铋浓度的异常高值，导致相关的不良反应。因此，有必要对原料游离铋进行总量控制。
发明内容
[0005]本发明的目的在于提供一种含铋制剂中游离铋的测定方法，为含铋制剂质量评价提供很好的手段。
[0006]为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
[0007]本发明提供一种含铋制剂中游离铋的测定方法，包括：
[0008]制备供试品溶液：称取含铋制剂，以人工胃液为介质，采用溶出仪小杯法装置制备样品，取样后，加入离心机离心，取澄清液，用硝酸溶液稀释，得到供试品溶液；
[0009]制备对照溶液：量取铋标准溶液，用硝酸溶液将所述铋标准溶液稀释成不同铋浓度的溶液，得到对照溶液；
[0010]游离铋含量的测定：按照原子吸收分光光度法在223.0nm波长处分别测定对照溶液的吸光度，绘制出标准曲线，得到线性方程；测试供试品溶液的吸光度，根据标准曲线的
线性方程计算出供试品溶液中游离铋的浓度，进而计算出所述含铋制剂中游离铋的含量。[0011]在一个实施例中，所述人工胃液的制备方法包括：
[0012]量取第一体积的盐酸，加水稀释至第二体积，得到稀盐酸；
[0013]称取第三体积的所述稀盐酸、第四体积的水和预设质量的胃蛋白酶，混合均匀后，加水定容至第五体积，得到人工胃液。
[0014]在一个实施例中，所述采用溶出仪小杯法装置制备样品，包括：
[0015]采用溶出仪小杯法装置，加入体积为80-150mL的人工胃液，投入单位计量以三氧化二铋计120mg，转速不低于每分钟50转，时间不少于30分钟后取样，取样量不少于5mL。[0016]在一个实施例中，所述离心机的转速为每分钟不少于4000转，离心时间不低于5分钟。
[0017]在一个实施例中，所述硝酸溶液的浓度为1-3％。
[0018]在一个实施例中，所述制备供试品溶液步骤包括：离心后，量取第六体积的上清液，用所述硝酸溶液稀释至第七体积，得到供试品溶液。
[0019]在一个实施例中，所述制备对照溶液步骤中，得到的对照溶液中铋浓度分别为：0、5ppm、10ppm、15ppm、20ppm、25ppm。
[0020]在一个实施例中，所述按照原子吸收分光光度法是指按照中国药典2020年版四部通则0406第一法。
[0021]在一个实施例中，所述游离铋含量的测定步骤中，含铋制剂中游离铋的含量的计算公式为：
[0022]
[0023]其中，m为含铋制剂中游离铋的含量(mg)，C为供试品溶液中游离铋的浓度(μg/ mL)，V为稀释后的总体积。
[0024]本发明提供的含铋制剂中游离铋的测定方法，根据含铋制剂的作用机制：含铋制剂溶解后形成游离铋，在胃的酸性环境中大部分形成弥散性保护层覆盖在溃疡面上产生药理作用，少量游离在人体消化系统中。本发明开发了一种可以体外评估铋盐水平的检测方法，通过溶出仪小杯法装置制备样品，并选择合理的取样时间和人工胃液作为溶剂，通过人工胃液中的胃蛋白酶的蛋白质及氨基酸与含铋制剂进一步络合生成有效成分三氧化二铋胶体沉淀，将人工胃液下形成的胶体溶液与非胶体溶液分离，检测非胶体中游离铋的含量，达到测定含铋制剂中游离铋的目的，为含铋制剂质量评价提供了很好的手段。同时该方法还具有测定数据稳定，灵敏可靠，重现性良好的优点。
附图说明
[0025]图1为本发明实施例1中标准曲线图；
[0026]图2为本发明实施例5中游离铋随时间变化曲线图；
[0027]图3为本发明实施例6中游离铋随时间变化曲线图；
[0028]图4为本发明实施例7中游离铋随时间变化曲线图；
[0029]图5为本发明实施例8中游离铋随时间变化曲线图。
具体实施方式
[0030]为了使本发明要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0031]本发明实施例提供了一种含铋制剂中游离铋的测定方法，包括：
[0032]步骤S11，制备供试品溶液：称取含铋制剂，以人工胃液为介质，采用溶出仪小杯法装置制备样品，取样后，加入离心机离心，取上清液，用硝酸溶液稀释，得到供试品溶液；[0033]步骤S12，制备对照溶液：量取铋标准溶液，用硝酸溶液将所述铋标准溶液稀释成不同铋浓度的溶液，得到对照溶液；
[0034]步骤S13，按照原子吸收分光光度法在223.0nm波长处分别测定对照溶液的吸光度，绘制出标准曲线，得到线性方程；测试供试品溶液的吸光度，根据标准曲线的线性方程计算出供试品溶液中游离铋的浓度，进而计算出所述含铋制剂中游离铋的含量。
[0035]本发明提供的含铋制剂中游离铋的测定方法，根据含铋制剂的作用机制：含铋制剂溶解后形成游离铋，在胃的酸性环境中大部分形成弥散性保护层覆盖在溃疡面上产生药理作用，少量游离在人体消化
系统中。本发明开发了一种可以体外评估铋盐水平的检测方法，通过溶出仪小杯法装置制备样品，并选择合理的取样时间和人工胃液作为溶剂，通过人工胃液中的胃蛋白酶的蛋白质及氨基酸与含铋制剂进一步络合生成有效成分三氧化二铋胶体沉淀，将人工胃液下形成的胶体溶液与非胶体溶液分离，检测非胶体中游离铋的含量，达到测定含铋制剂中游离铋的目的，为含铋制剂质量评价提供了很好的手段。同时该方法还具有测定数据稳定，灵敏可靠，重现性良好的优点。
[0036]进一步地，在步骤S11中，所述采用溶出仪小杯法装置制备样品，包括：
[0037]采用溶出仪小杯法装置，加入体积为80-150mL的人工胃液，投入单位计量以三氧化二铋计120mg，转速不低于每分钟50转，时间不少于30分钟后取样，取样量不少于5mL。[0038]转速每分钟50转相当于老年人或者虚弱病人胃蠕动能力，转速每分钟100转相当于年轻人的胃蠕动能力，所以转速不低于每分钟50转更能达到模拟人体胃肠道系统环境的效果。
[0039]采用溶出仪小杯法装置制备样品可以达到模拟人体胃肠道系统环境的效果，使得含铋制剂的游离铋测定值更符合人体胃肠道系统中的含铋制剂的游离铋实际值，从而为含铋制剂质量评价提供了很好的手段。
[0040]所述溶出仪小杯法为中国药典2020年版四部通则0931第三法中的溶出仪小杯法。[0041]加入人工胃液的体积为80-150mL，投入单位计量以三氧化二铋计120mg，例如投入三氧化二铋计为120mg时，
加入人工胃液的体积为80-150mL；投入三氧化二铋计为180mg时，加入人工胃液的体积为120-225mL等。
[0042]在人工胃液介质中，含铋制剂0-5min时间段内游离铋的累积量随时间增加逐渐增长，5-30min以后游离铋的累积量随时间增加逐渐降低，30-60min游离铋的累积量基本趋于稳定，所以时间不少于30分钟后取样，这样才能保证游离铋的测定值更准确。
[0043]含铋制剂进入人体胃肠道系统后，在酸性条件下与胃蛋白酶中的蛋白质及氨基酸进一步络合生成有效成分三氧化二铋胶体溶液，所以相同pH条件下，在一定浓度盐酸溶液中加入胃蛋白酶比不加胃蛋白酶更能促进铋制剂产生胶体溶液，而人体胃的酸性环境具有
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