(10)申请公布号
(43)申请公布日 (21)申请号 201510336334.0
(22)申请日 2015.06.17
C08B 37/00(2006.01)
A61P 37/02(2006.01)
A61P 39/06(2006.01)
A61P 9/00(2006.01)
A61P 3/06(2006.01)
A61P 29/00(2006.01)
A61P 11/00(2006.01)
地址400065 重庆市南岸区黄桷垭南山路
34号
(72)发明人杨勇 周雅琳 谭红军
(74)专利代理机构重庆志合专利事务所 50210
代理人
胡荣珲
(54)发明名称
(57)摘要
本发明涉及一种银耳多糖的制备方法，该方
辅助处理后再加热提取银耳多糖，然后精制。本发
明工艺简化，工时缩短，节省能源，同时，由于提取
工艺过程在中性条件下进行，利于银耳多糖提取
废液的综合利用。制备成的银耳多糖在干燥状态
下性能稳定。(51)Int.Cl.
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书4页 附图1页
(10)申请公布号CN 104926953 A (43)申请公布日2015.09.23
C N 104926953
A
1.一种银耳多糖的制备方法，其特征在于，有以下步骤：
1）原料预处理
A.取银耳，90-110℃下干燥，粉碎，过80目筛，得银耳干粉；
B. 将银耳干粉进行超微粉碎，粒径≥200目，得银耳超微粉；
C. 将银耳超微粉加蒸馏水，搅拌均匀，间歇超声1-4次，每次超声0.5h，得超声溶液；
2）提取
将超声后的溶液在80-100℃下连续振摇提取2-5小时，离心分离，取上清液，得到提取液，备用；
3）精制
A.提取液中加入4倍体积的95%乙醇，搅拌混匀，4℃条件下沉淀，离心20min，弃上清液，用95%乙醇洗涤沉淀一次，离心分离；
B.加入与提取液等体积的Sevage试剂，剧烈振摇15 min，4℃下，离心20min，将最上层的水层倾出，重复去蛋白至无明显蛋白层出现，50℃旋转蒸发真空浓缩；
C. 双氧水法脱，透析过夜，冷冻干燥，得所述银耳多糖。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1）中所述银耳超微粉与蒸馏水的重量比为1∶60-100。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1）中所述超声的工作频率为40KHz；间隔时间为0.5小时。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤3）中所述Sevage试剂为氯仿∶正丁醇的体积比为5∶1。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述离心分离的转速为6000-10000 r/ min。
银耳多糖的制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于食品领域，特别涉及一种银耳多糖及其制备方法。
背景技术
[0002] 银耳（Tremella fuciformis Berk）是一种营养价值极高的食用菌，在我国的种植较为普遍。银耳的营养成分十分丰富，研究表明，其含蛋白质6.7-10%，碳水化合物65-71.2%，脂肪0.6-1.28%，粗纤维2.4-2.75%，无机盐4.0-5.44%，及少量B族维生素。在传统中医及保健领域，通常认为银耳具有强精、补肾、润肠、益胃、补气、活血、强心、壮身、补脑、提神、美容、嫩肤等功效。
[0003] 目前，国内外对食用菌及其制品的消费需求呈上升趋势，尤其是食用菌的功能性有效成分的提取产品需求更为旺盛。如何从银耳中提取银耳多糖，并且采用更经济高效的技术手段，为保健食品、功能性食品、医药等行业提供高质量的银耳多糖产品，是目前银耳精深加工的方向，具有广阔的市场。
[0004] 银耳多糖是从银耳中提取得到的乳白或淡黄固体。目前，银耳多糖的主要用途有：（1）作为保健品，改善或提高机体免疫功能；（2）作为免疫功能调节剂，用于肿瘤化疗或放疗以及其它原因所致的白细胞减少症；（3）作为抗氧化剂，用于延缓衰老的口服及美容产品；（4）作为医药，用作心血管疾病、高血脂、炎症溃疡、慢性支气管炎等的。[0005] 提取银耳多糖的主要方法有：酶法提取、碱法提取、酸法提取、挤压处理提取等。从银耳子实体中提取制备银耳多糖一般采用两步法，即先用上述方法将银耳多糖提取出来，然后再对获得的粗多糖进行精制处理。
[0006] 酶法提取效果较好，是较为理想的提取方法。如：“酶法逆向提取银耳多糖的工艺研究”（中国疗养医学，2009年04期，作者：济南军区第二疗养院，中国海洋大学，福建古田药业公司）报道了以银耳子实体为原料，采用酶法逆向提取银耳多糖的工艺研究，重点研究了酶的选择。然而，由于酶法提取银耳多糖对反应过程要求严格，操作技术要求较高，且成本较高。
[0007] 酸、碱法提取银耳多糖是常用的方法，如“银耳多糖工业化提取工艺优化及护肤功效研究”（日用化学工业，2010年04期，作者：北京工商大学，北京市植物资源研究开发重点实验室）研究了以银耳子
实体为原料，在碱性条件下加热提取银耳多糖，结果表明，干银耳与去离子水质量比1∶100，pH = 9.0，90℃下提取4 h，提取液中银耳多糖质量浓度可达2.70 mg /mL，银耳多糖产品具有较好的热稳定性和酸碱稳定性，能够作为功效成分添加剂应用于化妆品中。酸、碱法提取中酸、碱的添加对提取过程中已溶银耳多糖的结构有一定的破坏，使银耳多糖的提取率普遍不高。
[0008] 挤压提取采用物理方法对银耳细胞进行破碎，对提高银耳多糖的提取率有一定帮助，如 “挤压处理银耳子实体对多糖提取效果的影响”（食品工业科技，2011年11期，作者：南京师范大学金陵女子学院）报道了以银耳子实体为原料，比较研究了挤压和粉碎预处理与不同提取方法结合对银耳多糖提取的影响，结果表明，挤压与高温高压结合提取2h，银耳
水溶性多糖提取率可达27.3%。挤压处理提取银耳多糖的缺点是，提取率不高，提取时间较长，与高温高压结合提取可提高提取率，但长时间的高温高压处理会对银耳多糖的结构和性能产生不利影响。
[0009] 目前银耳多糖的制备工艺研究还不甚成熟，还需要进一步的完善，而银耳多糖产品除了在医药领域有相关产品，在食品领域尚还未见。
发明内容
[0010] 本发明的目的是提供一种银耳多糖及其制备方法，该方法在提取前，先将银耳子实体超微粉碎，
进行超声辅助处理后再加热提取银耳多糖，然后精制，工艺简化，工时缩短，节省能源。同时，由于提取工艺过程在中性条件下进行，利于银耳多糖提取废液的综合利用。制备成的银耳多糖在干燥状态下性能稳定。
[0011] 本发明的技术方案是：
银耳多糖的制备方法，有以下步骤：
1）原料预处理
A.取银耳，90-110℃下干燥，粉碎，过80目筛，得银耳干粉；
B. 将银耳干粉进行超微粉碎，粒径≥200目，得银耳超微粉；
C. 将银耳超微粉加蒸馏水，搅拌均匀，间歇超声1-4次，每次超声0.5h，得超声溶液；
2）提取
将超声后的溶液在80-100℃下连续振摇提取2-5小时，离心分离，取上清液，得到提取液，备用；
3）精制
A.提取液中加入4倍体积的95%乙醇，搅拌混匀，4℃条件下沉淀，离心20min，弃上清液，用95%乙醇洗涤沉淀一次，离心分离；
B.加入与提取液等体积的Sevage试剂，剧烈振摇15 min，4℃下，离心20min，将最上层的水层倾出，重复去蛋白至无明显蛋白层出现，50℃旋转蒸发真空浓缩；
C. 双氧水法脱，透析过夜，冷冻干燥，得所述银耳多糖。
[0012] 步骤1）中所述银耳超微粉与蒸馏水的重量比为1∶60-100。
[0013] 步骤1）中所述超声的工作频率为40KHz；间隔时间为0.5小时。
[0014] 步骤3）中所述Sevage试剂为氯仿∶正丁醇的体积比为5∶1，所述氯仿和正丁醇均为市售的分析纯原液。
[0015] 所述离心分离的转速为6000-10000 r/min。
[0016] 本发明采用超微粉碎和超声波结合预处理，增强银耳子实体细胞的破壁，利于胞内多糖的溶出，有助于获得高含量的银耳多糖。本发明所述银耳多糖的提取过程在中性条件下进行，十分便于副产物银耳膳食纤维、银耳蛋白等的回收利用，可以有效利用资源和最大限度减少环境污染排放物。
[0017] 本发明所述银耳多糖的提取过程没有使用酸碱和其他有机化学试剂，仅在后续的精制过程中使用了少量的有机试剂，省去了大量的溶剂回收工序，具有节能、环保的优点。[0018] 本发明的制备方法简单，生产条件温和，不需要特殊设备，便于工业化生产。[0019] 本发明所述试剂均采用市售分析纯产品。
[0020] 下面将结合具体实施例，对本发明作进一步的说明。
附图说明
[0021] 图1为银耳多糖的气相谱图。
具体实施例
[0022] 实施例1
粉碎：市售干银耳，105℃热风烘干2h，粉碎，过80目筛，超微粉碎，过200目筛，备用。[0023] 超声处理：取银耳粉50g，加蒸馏水3L，搅拌均匀，在超声工作频率40KHz条件下间歇超声2次（每隔0.5小时超声0.5h）。
[0024] 提取：将超声后的溶液在100℃下连续振摇提取4小时，6000-10000r/min离心分离，取上清液，得到提取液，备用。
[0025] 精制：提取液加入4倍体积的95%乙醇沉淀，用玻璃棒搅拌混匀，置4℃冰箱中沉淀过夜。4℃下，6000-10000 r/min离心20min，弃上清液，用95%乙醇洗涤沉淀一次，离心分离。然后加入与提取液等体积的Sevage试剂（氯仿∶正丁醇=5∶1)，剧烈振摇15 min，4℃下，6000-10000 r/min离心20min，小心地将最上层的水层倾出，重复去蛋白至无明显蛋白层出现，50℃旋转蒸发真空浓缩。然后用双氧水法脱，再透析过夜，冷冻干燥即得银耳多糖。所得银耳多糖产品的多糖得率（干基）为19.8%，其外观为淡黄固体，无异味，水分含量为9.2%。
[0026] 所得银耳多糖经重庆食品工业研究所测试，其气相谱图见图1，各组分之间的摩尔比为木糖∶鼠李糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖=15.32∶9.88∶76.99∶2.89∶1.09。[0027] 实施例2
粉碎：市售干银耳，105℃热风烘干2h，粉碎，过80目筛，超微粉碎，过300目筛，备用。[0028] 超声处理：取银耳粉50g，加蒸馏水3.5L，搅拌均匀，在超声工作频率40KHz条件下间歇超声3次（每隔0.5小时超声0.5h）。
[0029] 提取：将超声后的溶液在90℃下连续振摇提取4小时，6000-10000r/min离心分离，取上清液，得到提取液，备用。
[0030] 精制：提取液加入4倍体积的95%乙醇沉淀，用玻璃棒搅拌混匀，置4℃冰箱中沉淀过夜。4℃下，6000-10000 r/min离心20min，弃上清液，用95%乙醇洗涤沉淀一次，离心分离。然后加入与提取
液等体积的Sevage试剂（氯仿∶正丁醇=5∶1)，剧烈振摇15 min，4℃下，6000-10000 r/min离心20min，小心地将最上层的水层倾出，重复去蛋白至无明显蛋白层出现，50℃旋转蒸发真空浓缩。然后用双氧水法脱，再透析过夜，冷冻干燥即得银耳多糖。经检测，所得银耳多糖产品的多糖得率（干基）为19.3%，其外观为乳白固体，无异味，水分含量为9.6%。
[0031] 实施例3
粉碎：市售干银耳，105℃热风烘干2h，粉碎，过80目筛，超微粉碎，过200目筛，备用。[0032] 超声处理：取银耳粉50g，加蒸馏水4L，搅拌均匀，在超声工作频率40KHz条件下间歇超声4次（每隔0.5小时超声0.5h）。
[0033] 提取：将超声后的溶液在80℃下连续振摇提取3小时，6000-10000r/min离心分
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