(10)申请公布号 (43)申请公布日 2015.02.04
C N 104327164
A (21)申请号 201410512199.6
(22)申请日 2014.09.29
C07K 7/08(2006.01)
A61K 6/02(2006.01)
(71)申请人广西中医药大学
地址530213 广西壮族自治区南宁市青秀区
五合大道13号
(72)发明人李培源 苏炜 霍丽妮 陈睿
(74)专利代理机构北京远大卓悦知识产权代理
事务所(普通合伙) 11369
代理人
靳浩
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了一种合成多肽，所述合成多肽
包含：(a)合成多肽氨基酸序列：SEQ ID No.1所
示的氨基酸序列；(b)在(a)限定的合成多肽中经
过缺失、插入或置换一个或几个氨基酸且与(a)
所述多肽具有相同生物学功能的由(a)衍生的多
肽；所述合成多肽分子量为1691.05g/mol ，等电
点为9.7；其可应用于制备抗菌和促进成骨细胞
能力，也可促进成骨细胞的生长，稳定性强，易于
与其它化合物结合，可以简单应用于各种形式的
材料，本发明无毒，具有一定的应用潜力。
(51)Int.Cl.
权利要求书1页 说明书5页
序列表1页 附图1页
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请
权利要求书1页 说明书5页序列表1页 附图1页(10)申请公布号CN 104327164 A
1.一种合成多肽，其特征在于，所述合成多肽包含：
(a)合成多肽氨基酸序列：SEQ ID No.1所示的氨基酸序列；
(b)在(a)限定的合成多肽中经过缺失、插入或置换一个或几个氨基酸且与(a)所述多肽具有相同生物学功能的由(a)衍生的多肽。
2.根据权利要求1所述的合成多肽，其特征在于，所述合成多肽分子量为1691.05g/ mol。
3.根据权利要求1所述的合成多肽，其特征在于，所述合成多肽等电点为9.7。
4.权利要求1所述的合成多肽，其特征在于，其在制备抗菌和促进成骨细胞生长的材料中的应用。
一种合成多肽及其用途
技术领域
[0001] 本发明涉及生物医药领域，特别涉及一种合成多肽及其用途。
背景技术
[0002] 通过外科手术将种植体植入人体缺牙部位，在其上部安装修复假牙的种植称为牙种植，种植体的与人体的生物相容性及骨整合之间关系重大，它可为病原微生物提供栖息场所，一旦发生感染，都会导致种植失败。牙种植体按其材料不同，分为金属与合金材料类，陶瓷材料类，碳素材料类，高分子材料类，复合材料类。 [0003] 骨基质中具有特定功能的蛋白质、酶、多肽等可促进骨潜能细胞及成骨细胞的增殖、分化，可通过将其固定在种植体表面，改良种植体表面的结构和成分促进早期骨整合。将具有特定功能的蛋白质、酶、多肽等生物活性物质固定于种植体表面，可促进骨潜能细胞及成骨细胞的增殖、分化，达到良好的成骨作用，因此，寻一种化合物用于提高种植体性能和预防种植体相关感染是很有必要的。 发明内容
[0004] 本发明目的之一在于提供一种具有抗菌和促进成骨细胞生长的合成多肽；本发明目的之二在于提供该合成多肽在制备抗菌和促进成骨细胞生长的材料中的应用。[0005] 本发明提供的技术方案为：
[0006] 一种合成多肽，所述合成多肽包含：
[0007] (a)合成多肽氨基酸序列：SEQ ID No.1所示的氨基酸序列；
[0008] (b)在(a)限定的合成多肽中经过缺失、插入或置换一个或几个氨基酸且与(a)所述多肽具有相同生物学功能的由(a)衍生的多肽。
[0009] 优选的是，所述合成多肽分子量为1691.05g/mol。
[0010] 优选的是，所述合成多肽等电点为9.7。
[0011] 优选的是，其在制备抗菌和促进成骨细胞生长的材料中的应用。种植体的钛表面可用连接子预处理，并且可将含有-SH基团的氨基酸，例如半胱氨酸引入本发明合成多肽的N末端或C末端中，以结合所述连接子的官能团。也可用连接子对钛表面预处理后连接基团，将多肽连接在钛表面。举例来说，结合连接子，本发明合成多肽在N 多肽中的-NH
2
末端含有半胱氨酸以便借助于连接子与半胱氨酸之间的相互作用容易地被引入种植体中。另外，为了将本发明合成多肽稳定地引入种植体的钛(Ti)表面中，优选利用硅烷-连接子-肽的连接关系将这些合成多肽引入种植体表面中。这样处理得到的钛金属可作为牙种植体和骨种植体使用，由于其优异的抗菌性能和促进成骨细胞生长功能，对于避免种植体细菌感染和挽救病人生命有重大意义。
[0012] 此外，本发明的合成多肽也可简单应用于其他日常使用的材料表面，如塑料、玻璃和其他金属表面，可有效预防日常接触引起的细菌感染。
[0013] 本发明的有益效是：
[0014] 第一、本发明合成多肽无毒，适用于种植体材料，通过细胞毒性分析可知本发明合成多肽乳酸脱氢酶活性略低于没有加入本发明合成多肽的培养基，乳酸脱氢酶活性越高表明细胞受损程度越高，由此可知本发明合成多肽无毒；
[0015] 第二、本发明合成多肽具有良好的杀菌效果，对金黄葡萄球菌(ATCC 6538)、大肠埃希氏菌(ATCC 25922)、白假丝酵母(ATCC 10231)、枯草芽孢杆菌黑变种(ATCC 9372)都具有很强的杀菌性，其杀菌率达99％以上；
[0016] 第三、本发明合成多肽具有提高成骨细胞活性，促进成骨细胞分化的能力；[0017] 第四、本发明
合成多肽制作成本相较于其它材料成本更低，易于大规模生产；[0018] 第五、本发明提供的合成多肽稳定性强，结构易于调控，易于与其它化合物结合，可以简单应用于各种形式的材料，具有很明显的应用潜力，也可简单应用于其他日常使用的材料表面，如塑料、玻璃和其他金属表面，可有效预防日常接触引起的细菌感染。[0019] 本发明所涉及到的术语定义
[0020] 除非另外定义，否则本文所用的所有技术及科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所了解相同的含义。虽然在本发明的实践或测试中可使用与本文所述者类似或等效的任何方法、装置和材料，但现在描述优选方法、装置和材料。
[0021] 术语“氨基酸”意指构成蛋白质的基本单位，赋予蛋白质特定的分子结构形态，使它的分子具有生化活性。蛋白质是生物体内重要的活性分子，包括催化新陈代谢的酶，两个或两个以上的氨基酸化学聚合成肽，一个蛋白质的原始片段，是蛋白质生成的前体，氨基酸广义上是指既含有一个碱性氨基又含有一个酸性羧基的有机化合物，正如它的名字所说的那样。但一般的氨基酸，则是指构成蛋白质的结构单位。在生物界中，构成天然蛋白质的氨基酸具有其特定的结构特点，即其氨基直接连接在α-碳原子上，这种氨基酸被称为α-氨基酸。在自然界中共有300多种氨基酸，其中α-氨基酸21种。α-氨基酸是肽和蛋白质的构件分子，也是构成生命大厦的基本砖石之一。
[0022] 术语“多肽”意指α-氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物。由
两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二肽，同理类推还有三肽、四肽、五肽等，通常由10～100氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫多肽，它们的分子量低于10000道尔顿，能透过半透膜，不被三及硫酸铵所沉淀，也有文献把由2～10个氨基酸组成的肽称为寡肽(小分子肽)；10～50个氨基酸组成的肽称为多肽；由50个以上的氨基酸组成的肽就称为蛋白质。
[0023] 术语“缺失”意指一个正常染体断裂后丢失了一个片段，这片段上的基因也随之失去，在本发明中意指合成多肽除了为SEQ ID No.1所示的氨基酸序列之外，还包括合成多肽氨基酸序列中丢失一个或几个氨基酸的不影响其功能的新的氨基酸序列的合成多肽。[0024] 术语“插入”意指利用基因操作技术把一段DNA接入另一段DNA中或克隆载体中去，在本发明中意指合成多肽除了为SEQ ID No.1所示的氨基酸序列之外，还包括合成多肽氨基酸序列中插入一个或几个氨基酸的不影响其功能的新的氨基酸序列的合成多肽。[0025] 术语“置换”意指一种基因重组载体，一般利用同源重组将基因组中的某段基因替换，而达到基因敲除的目的，在本发明中意指合成多肽除了为SEQ ID No.1所示的氨基酸序列之外，还包括合成多肽氨基酸序列中一个或几个氨基酸被其他种类的氨基酸置换后的不影响其功能的新的氨基酸序列的合成多肽。
[0026] 术语“等电点”意指在某一pH的溶液中，氨基酸或蛋白质解离成阳离子和阴离子的趋势或程度相等，成为兼性离子，呈电中性，此时溶液的pH成为该氨基酸或蛋白质的等电点，生物两性分子如蛋白质即含有酸性的，也含有碱性的官能团。组成蛋白质的氨基酸可能是带正电荷的、带负电荷的、中性的或
者本生是两性的，它们的电荷加在一起是蛋白质的电荷，pH值小于等电点时蛋白质的总电荷是正的，大于等电点时是负的。
附图说明
[0027] 图1为本发明所述合成多肽对成骨细胞增殖活性的影响与普通培养基对成骨细胞增殖活性影响的比较结果对照图；
[0028] 图2为本发明所述合成多肽对初始细胞分化能力与普通培养基对初始细胞分化能力的比较结果对照图。
具体实施方式
[0029] 下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0030] 实施例1：
[0031] 一种合成多肽，氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；
[0032] SEQ ID No.1：QKKPVPIIYC NGTCQ。
[0033] 实施例2：
[0034] 合成多肽的制备：
[0035] 选用氨基酸-王树脂作为载体(树脂)，用二氯甲烷将树脂充分溶胀，用二甲基甲酰胺清洗几遍，用适当浓度的DBLK，将Fmoc-保护基团脱出，之后用二甲基甲酰胺清洗数遍，洗去DBLK，称取适合的缩合剂苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐和活化剂甲基吗啉以及C端第二个Fmoc-保护氨基酸(Fmoc-Pro-OH)进行偶联，通过茚三酮检测法进行检测确保连接比较完全，用二甲基甲酰胺清洗几遍，洗去残留的各种残基，活化剂和缩合剂，依氨基酸序列进行偶联，将所有的氨基酸连接结束后，脱去最后的Fmoc-保护基团，用切割液裂解，去除树脂和氨基酸保护基团，得到合成多肽的粗品，送质谱确认产品分子量1691.05g/mol符合理论值。
[0036] 实施例3：
[0037] 抗菌能力实验：
[0038] 一、实验方法
[0039] 在灭菌试管中加入1mL浓度为1×106个/mL的菌液，加入1mg本发明所提供的合成多肽，37℃培养24小时后，培养基收集起来用倍比稀释，稀释倍数为10倍和涂布培养法检测活菌数。
[0040] 二、实验结果：
[0041] 表1 本发明所述合成多肽的杀菌率(％)
[0042]
细菌ATCC 6538ATCC 25922ATCC 10231ATCC 9372
豫公网安备41160202000603
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