[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公开说明书
[11]公开号CN 1699417A [43]公开日2005年11月23日
[21]申请号200510077282.6[22]申请日2005.06.21
[21]申请号200510077282.6
[71]申请人江永忠
地址515556广东省揭东县云路镇陇上村
共同申请人陈爱民 周潮 樊绍文
[72]发明人江永忠 陈爱民 周潮 樊绍文 [74]专利代理机构北京元中知识产权代理有限责任公司代理人王明霞[51]Int.CI 7C07K 14/435C07K 14/47C07K 1/34
A61P 9/10
A61P 3/06A61P 31/04
权利要求书 2 页 说明书 16 页 附图 7 页
[54]发明名称
[57]摘要
本发明涉及一种人血高密度脂蛋白及其产品，
以及其制造方法和应用。所述的人血高密度脂蛋白
中，apo AI含量为77－89％。本发明以人血浆为原
料，通过分离纯化步骤，从中提取HDL，提供了大
规模制备人血浆HDL的新工艺方法，是对宝贵人血
资源的充分利用。本发明涉及的人血高密度脂蛋白
及其产品在制备多器官功能障碍综合症(MODS)、
心血管系统疾病，如动脉粥样硬化(AS)以及中和细
200510077282.6权 利 要 求 书第1/2页
1、一种人血高密度脂蛋白，其特征在于，该高密度脂蛋白中apo AI的含量为77-89％和/或人血高密度脂蛋白中apoAI分子量为27.7KD。
2、一种人血高密度脂蛋白产品，其特征在于，所述的人血高密度脂蛋白产品中含有0.1-99％的人血高密度脂蛋白。
3、根据权利要求2所述的人血高密度脂蛋白产品，其特征在于，所述的人血高密度脂蛋白产品为静脉注射剂，其中含有9～11％蔗糖和/或0.5％白蛋白和/或150mg±
1mg/L维生素C。
4、根据权利要求2或3所述的人血高密度脂蛋白产品，其特征在于，所述的人血高密度脂蛋白中apo AI的含量为77-89％和/或人血高密度脂蛋白中apoAI分子量为27.7KD。
5、一种人血高密度脂蛋白及其产品的制造方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
A.取原料血浆，滴加缓冲溶液至混合液的pH为5.0-5.5，加入混合液1/4～1/3
体积的95％乙醇，在-5～-2℃下搅拌1-3小时，静置6-8小时，离心得上清；向上清补加45-55％上清体积的注射用水，滴加缓冲溶液，使混合液p H为
4.5-6.0，在-6～-3℃下搅拌1-3小时，静置1-3小时，离心得沉淀，弃上清；
B.沉淀用2-3倍重量的0.02～0.1M NaCl溶液溶解，调pH至5.2±0.5后，在0～2℃下搅拌2-6小时，然后离心得沉淀；沉淀用50-150倍重量的0.1～0.2M NaCl
溶液溶解，调节溶液pH为7.2±0.5，在2～8℃下搅拌6-20小时，过滤得滤液； C.上述滤液加入缓冲液，使pH为5.2±0.5，搅拌1-3小时，在2～4℃下，静置
6-20小时，离心收集沉淀；沉淀用50～150倍量的0.1～0.2M NaCl溶液溶解，调pH至7.2±0.5，搅拌使沉淀完全溶解，过滤，得滤液；
D.滤液用超滤膜超滤，脱盐并浓缩，得富含H D L的溶液，经后处理，得H D L
及其产品。
6、根据权利要求5所述的制造方法，其特征在于，所述方法中调节pH使用1mol/L NaHCO3溶液和/或所述的缓冲液为pH＝4的HAC/NaAC缓冲体系。
7、根据权利要求5所述的制造方法，其特征在于，所述步骤C结束后重复一遍。
8、根据权利要求5所述的制造方法，其特征在于，所述步骤D中的超滤膜为8-70KD
200510077282.6权 利 要 求 书 第2/2页
超滤膜；优选使用30～50KD超滤膜。
9、根据权利要求5所述的制造方法，其特征在于，所述步骤D所述的后处理可以是：超滤浓缩液加9～11％注射用蔗糖或0.5％白蛋白，按每升加入150mg±1mg注射用维生素C，调p H至7.2±0.5，得H D L溶
液；上述H D L溶液于微机自控的巴氏灭菌器内60±1℃、10小时灭活病毒；灭活病毒后的HDL溶液，除菌分装，并于2～8℃保存。
10、权利要求1-9所述人血高密度脂蛋白及其产品在制备多器官功能障碍综合症(M O D S)；或制备心血管系统疾病，如动脉粥样硬化(A S)的药物；或制备中和细菌毒素等急性症状药物方面的应用。
200510077282.6说 明 书第1/16页
人血高密度脂蛋白、其制造方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种人血高密度脂蛋白、其制造方法及其在药剂学上的应用，属于生物化学领域。
背景技术
AS是因动脉壁脂质沉积，纤维及结缔组织增生，而造成动脉管壁增厚变硬，弹性减退并形成糜粥样病灶的常见多发性疾病。AS引起的动脉管腔闭塞，可使心、脑、肾等重要器官供血不足，从而严重威胁人类健康和生命。目前临床上常用的AS 药物，一般有扩张血管药物、降血脂药物、抗血小板药物及溶栓药物等。这些药物虽然可通过解除血管运动障碍及调节血脂等作用对抗AS，但均不能安全、有效的预
防和消除A S斑块。并且由于A S是一种慢性非炎症性、退行性和增生性的病变，长期使用某些药物，会引起胆石症、肝功能损伤等副作用。
大量流行病学研究表明，血脂升高、肥胖、高血压、糖尿病以及吸烟等是AS主要危险因素。但是，目前对A S的防治并无理想的方法和药物。现阶段防治A S除饮食控制外，在药物上一般多选用降低血脂、扩张血管或针对易患因子的药物。因此发现和制备能够预防，特别是可以促使A S逆转或发生消退的新药就十分必要。 七十年代以来大量流行病学调查已经发现，血浆高密度脂蛋白(HDL)水平与动脉粥样硬化(AS)发病率呈负相关。Framingham调查表明，血浆高密度脂蛋白-胆固醇(H D L-C，可以代表血浆H D L含量的指标)高的家庭或地区冠心病(C H D)发生率明显降低。Rifkind等在调查的人中发现，血浆HDL-C含量每增加1mg/dL，CHD的危险性就减少2-3％。Helsinki Heart Study(赫尔辛基心脏研究)也证实，如用药物升高血浆H D L-C水平，男性C H D发生率可以下降34％。动物实验还证明，血浆H D L水平较低的动物如家免、猴、猪等均易诱发A S，相反血浆H D L含量较高的动物如貂、北京鸭和树鼩等则不易甚至不产生AS。另外，细胞培养证明，HDL可促进细胞(包括动脉平滑肌细胞)内胆固醇的移出，动物实验也证明H D L有抑制A S 斑块形成及促进斑块消退的作用。这些都说明H D L具有对抗A S的作用。而且由于HDL是来源于人血浆的天然药物，在预防和AS的长期过程中具有其它人工合成药物无法比拟的优势。
200510077282.6说 明 书 第2/16页 HDL主要由载脂蛋白和脂质组成，是血浆中密度最高但组成极不均
一的一类脂蛋白。HDL是由蛋白质和脂质组成的脂蛋白，它含蛋白质50％～55％，主要由载脂蛋白(apo)AI和AII构成，另含少量的apoAIV、CI、CII、CIII、D、E以及J，HDL 含脂质约45％～50％，主要由磷脂(PL，40～60％)、胆固醇及胆固醇酯(总胆固醇T C，30％～40％)及少量甘油三酯(T G，10％左右)构成。在H D L中a p o A I的含量最多而且又是HDL主要的功能蛋白质，因此可以用apo AI的含量反映HDL的含量。 目前尚无由血浆直接制备HDL的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种人血高密度脂蛋白及其产品。
本发明的另一目的是提供人血高密度脂蛋白及其产品的制造方法，该方法直接以血浆为原料，制备HDL。
本发明的再一目的是提供上述人血高密度脂蛋白及其产品在制备多器官功能障碍综合症(M O D S)、心血管系统疾病，如A S以及中和细菌毒素等急性症状药物方面的应用。
本发明所述的人血高密度脂蛋白中，apo AI含量为77-89％。
上述的人血高密度脂蛋白中apoAI分子量为27.7KD。
本发明所述的人血高密度脂蛋白产品中可含有0.1-99％的人血高密度脂蛋白。 上述的人血高密度脂蛋白产品可以加入9～11％蔗糖和/或0.5％白蛋白和/或150mg±1mg/L维生素C，制成供静脉输注的人血HDL制剂。
上述的H D L不限于本发明所述的H D L，现有技术中的H D L同样适用前述的组合互配。
本发明所述方法包括以下步骤：
A.取原料血浆，滴加缓冲溶液至混合液的pH为5.0-5.5，加入混合液1/4～1/3体积的95％乙醇，在-5～-2℃下搅拌1-3小时，静置6-8小时，离心得上清；向上清补加45-55％上清体积的注射用水，滴加缓冲溶液，使混合液pH为4.5-6.0，在-6～-3℃下搅拌1-3小时，静置1-3小时，离心得沉淀，弃上清；
B.沉淀用2-3倍重量的0.02～0.1M NaCl溶液溶解，调pH至5.2±0.5后，在0～2℃下搅拌2-6小时，然后离心得沉淀；沉淀用50-150倍重量的0.1～0.2M N a C l溶液溶解，调节溶液p H为7.2±0.5，在2-8℃下搅拌6-20小时，过滤得滤液；
C.上述滤液加入缓冲液，使pH为5.2±0.5，搅拌1-3小时，在2～4℃下，静置6-20
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议