(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810413398.X
(22)申请日 2018.05.03
(71)申请人 东营天东制药有限公司
地址 257000 山东省东营市东营区南二路
1236号
(72)发明人 杨晓宏 郭林 陈少鹏 马向明
张岩岩
(74)专利代理机构 北京集佳知识产权代理有限
公司 11227
代理人 张雪娇 赵青朵
(51)Int.Cl.
C08B 37/00(2006.01)
(54)发明名称一种舒洛地特原料药的制备方法(57)摘要本发明提供了一种舒洛地特原料药的制备方法，包括：S1)在低温条件下，将肝素钠粗品水溶液调节pH值至酸性，低温离心，收集上清液得到硫酸多糖溶液；S2)将所述硫酸多糖溶液进行乙醇分级沉淀处理，得到去除慢速移动肝素后的硫酸多糖沉淀；S3) 将所述硫酸多糖沉淀溶解后加入阴离子交换树脂进行吸附；S4)用2～5wt％的氯化钠溶液对吸附后的阴离子交换树脂进行洗脱；S5)用10～15wt％的氯化钠溶液对洗脱后的阴离子交换树脂进行洗脱，得到洗脱液；S6)将所述洗脱液进行乙醇沉淀，得到舒洛地特原料药。与现有技术相比，本发明以肝素钠粗品为原料，避免有效组分的丢失，原料来源稳定、没有引入杂质、工艺简单、成本低、
易放大。权利要求书1页 说明书8页 附图3页CN 108484789 A 2018.09.04
C N 108484789
A
1.一种舒洛地特原料药的制备方法，其特征在于，包括：
S1)在低温条件下，将肝素钠粗品水溶液调节pH值至酸性，低温离心，收集上清液得到硫酸多糖溶液；
S2)将所述硫酸多糖溶液进行乙醇分级沉淀处理，得到去除慢速移动肝素后的硫酸多糖沉淀；
S3)将所述硫酸多糖沉淀溶解后加入阴离子交换树脂进行吸附；
S4)用2～5wt％的氯化钠溶液对吸附后的阴离子交换树脂进行洗脱；
S5)用10～15wt％的氯化钠溶液对洗脱后的阴离子交换树脂进行洗脱，得到洗脱液；S6)将所述洗脱液进行乙醇沉淀，得到舒洛地特原料药。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1)具体为：
在0℃～5℃条件下，将肝素钠粗品水溶液调节pH值至1～2，低温离心，收集上清液得到硫酸多糖溶液。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述肝素钠粗品水溶液中肝素钠粗品的浓度为5～20wt％。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述低温离心的转速为2000～6000转/分钟；时间为5～20min。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2)具体为：
将所述硫酸多糖溶液与碱金属盐混合，调节混合液温度为20℃～30℃、pH值至6～8，再加入乙醇至液体中乙醇的浓度为30～35wt％，室温进行第一次沉淀，收集液体，继续加入乙醇至液体中乙醇的浓度为55～60wt％，室温进行第二次沉淀，去除上清，得到去除慢速移动肝素后的硫酸多糖沉淀。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述碱金属盐为氯化钠；所述碱金属盐的体积为硫酸多糖溶液体积的1％～3％。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S3)具体为：
将所述硫酸多糖沉淀溶解至质量浓度为1～10wt％的溶液，调节温度为50℃～60℃、pH 值至6～8，然后加入阴离子交换树脂进行吸附。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S4)中氯化钠溶液的温度为30℃～40℃,pH值为8～10；所述氯化钠溶液的体积为阴离子交换树脂体积的3～4倍。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S5)中氯化钠溶液的温度为30℃～40℃,pH值为8～10；所述氯化钠溶液的体积为阴离子交换树脂体积的3～4倍。
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S6)具体为：
将所述洗脱液与乙醇混合，室温沉淀，得到舒洛地特原料药；所述乙醇的添加量为至混合后液体中乙醇的浓度为55～60wt％。
权 利 要 求 书1/1页CN 108484789 A
一种舒洛地特原料药的制备方法
技术领域
[0001]本发明属于生物制药技术领域，尤其涉及一种舒洛地特原料药的制备方法。
背景技术
[0002]舒洛地特(Sulodexide Soft Capsules)，商品名(Vessel Due F)，最早由意大利阿尔法韦士曼(ALFA WASSERMANN)制药公司开发，于1974年上市。它由猪肠黏膜提取精制，是高度纯化的糖胺聚糖，属于类肝素，其化学组成为80％快速移动肝素。舒洛地特作为抗血栓药各种心血管疾病已有20多年，目前在意大利、西班牙、东欧、南美以及亚洲地区主要作为抗血栓药物用来外周心血管疾病，我国于20世纪90年代开始开始进口。[0003]与肝素相比，舒洛地特在降低出血的前提下有着更强的抗血栓潜能，并且具有更长的半衰期，以及较低的凝血作用和出血参数。临床研究证明舒洛地特安全有效。近些年来，舒洛地特在糖尿病肾病领域研究比较多，其机理研究、实验动物研究及临床应用研究已有广泛报道，如美国的Keryx生物制药公司生产的舒洛地特(商品名：Sulonex TM)，作为糖尿病肾病药，曾被美国FDA批准进入快速审评通道，进行Ⅲ期和Ⅳ期临床试验。[0004]舒洛地特是高度纯化的天然糖胺聚糖(glycosaminoglycans，GAGS)是从猪肠黏膜提取精制的，它有重复二糖结构单元组成的带有负电荷的长链大分子，二糖单元包含两个改构糖，即N-乙酰半乳糖按或N-乙酰葡糖胺及糖胺酸，如
普糖醛酸酯或艾杜糖醛酸。琼脂凝胶电泳法测得含有80％的快速移动肝素(“fast moving”heparin FMH)(基于电泳迁移率)和20％的硫酸皮肤素(dermatan sulfate，DS)及少量慢速移动肝素(不得大于2％)。快速移动肝素(FMH)与硫酸皮肤素(DS)由于作用原理不同而协同增效。与其中的FMH部分与未分级肝素一样含有二糖聚合结构，但硫酸化程度较低，多糖链的长度较短，未降解DS是由许多不同二糖组成的多糖，平均相对分子质量25000Da。
[0005]公开号为CN104398533B的中国专利公开了一种舒洛地特的制备方法，该方法以肝素副产物为原料，经过氧化得到中间体粗品肝素溶液；向中间体粗品肝素溶液中加入醋酸盐，超滤分离，得到快速移动肝素粗品和硫酸皮肤素粗品；然后对快速移动肝素粗品和硫酸皮肤素粗品分别精制；最后将精制所得的沉淀物混合溶解，过滤，收集滤液，进行冻干处理，得到舒洛地特原料。该方法由于加入醋酸盐，引入了醋酸等杂质，而且还采用了配比混合工艺，使得到的最终组分可能与现有的舒洛地特原料药存在一定差距，还可能缺失组分。[0006]公开号为CN106883321A的中国专利公开了一种从肝素钠副产物中提取舒洛地特原料药的方法，该方法也以肝素副产物为原料，溶解后沉淀，收集沉淀物后经氧化、沉淀、干燥制得。该方法虽然工艺简单，但去除蛋白质。核酸等杂质的能力欠缺，且得到的产物中快速移动肝素组分与硫酸皮肤素组分比例不可控。
[0007]公开号为CN104017102B的中国专利公开了乙醇沉淀法从肝素副产物制备舒洛地特原料药的方法，该方法也以肝素副产物为原料，溶解，以氢氧化钠调节溶液至高pH值，以适量的乙醇做低温沉淀，
去沉淀后得到硫酸多糖溶液；以盐酸调该硫酸多糖溶液至低pH值，以适量乙醇做低温沉淀，去沉淀后得到硫酸多糖溶液；再以氢氧化钠调节该溶液至pH中心，
以适量乙醇做室温沉淀，取沉淀烘干制得舒洛地特原料。该方法也存在去除蛋白质、核酸等杂质的能力欠缺，且得到的舒洛地特原料中的快速移动肝素组分与硫酸皮肤素组分比例不可控的缺点。
[0008]公开号为CN102603924A的中国专利公开了一种从肝素副产物分离舒洛地特原料的方法，该方法以肝素副产物为原料，溶解后加入醋酸钾使质量分数增加，再用醋酸调节溶液的pH值，然后沉淀，收集上清液；再加入班氏试剂和饱和氢氧化钠溶液，搅拌后沉淀，分离上清液；向上清液中加入氯化钠，溶解后再加入乙醇进行沉淀，分离出沉淀物，将其用水稀释，加入EDTA，搅拌溶解后继续加入阴离子交换树脂进行搅拌吸附；吸附后先氯化钠溶液搅拌洗脱树脂，收集洗脱液并用无水乙醇沉淀，得到舒洛地特原料。该方法引入了醋酸钾、硫酸铜、EDTA等杂质，且后期工艺没有相应的去除步骤，使得到的舒洛地特原料药中毒性杂质不可控。
发明内容
[0009]有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种舒洛地特原料药的制备方法，该制备方法简单。
[0010]本发明提供了一种舒洛地特原料药的制备方法，包括：
[0011]S1)在低温条件下，将肝素钠粗品水溶液调节pH值至酸性，低温离心，收集上清液得到硫酸多糖溶液；
[0012]S2)将所述硫酸多糖溶液进行乙醇分级沉淀处理，得到去除慢速移动肝素后的硫酸多糖沉淀；
[0013]S3)将所述硫酸多糖沉淀溶解后加入阴离子交换树脂进行吸附；
[0014]S4)用2～5wt％的氯化钠溶液对吸附后的阴离子交换树脂进行洗脱；
[0015]S5)用10～15wt％的氯化钠溶液对洗脱后的阴离子交换树脂进行洗脱，得到洗脱液；
[0016]S6)将所述洗脱液进行乙醇沉淀，得到舒洛地特原料药。
[0017]优选的，所述步骤S1)具体为：
[0018]在0℃～5℃条件下，将肝素钠粗品水溶液调节pH值至1～2，低温离心，收集上清液得到硫酸多糖溶液。
[0019]优选的，所述肝素钠粗品水溶液中肝素钠粗品的浓度为5～20wt％。
[0020]优选的，所述低温离心的转速为2000～6000转/分钟；时间为5～20min。
[0021]优选的，所述步骤S2)具体为：
[0022]将所述硫酸多糖溶液与碱金属盐混合，调节混合液温度为20℃～30℃、pH值至6～8，再加入乙醇至液体中乙醇的浓度为30～35wt％，室温进行第一次沉淀，收集液体，继续加入乙醇至液体中乙醇的浓度为55～60wt％，室温进行第二次沉淀，去除上清，得到去除慢速移动肝素后的硫酸多糖沉淀。
[0023]优选的，所述碱金属盐为氯化钠；所述碱金属盐的体积为硫酸多糖溶液体积的1％～3％。
[0024]优选的，所述步骤S3)具体为：
[0025]将所述硫酸多糖沉淀溶解至质量浓度为1～10wt％的溶液，调节温度为50℃～60
℃、pH值至6～8，然后加入阴离子交换树脂进行吸附。
[0026]优选的，所述步骤S4)中氯化钠溶液的温度为30℃～40℃,pH值为8～10；所述氯化钠溶液的体积为阴离子交换树脂体积的3～4倍。
[0027]优选的，所述步骤S5)中氯化钠溶液的温度为30℃～40℃,pH值为8～10；所述氯化钠溶液的体积为阴离子交换树脂体积的3～4倍。
[0028]优选的，所述步骤S6)具体为：
[0029]将所述洗脱液与乙醇混合，室温沉淀，得到舒洛地特原料药；所述乙醇的添加量为至混合后液体中乙醇的浓度为55～60wt％。
[0030]本发明提供了一种舒洛地特原料药的制备方法，包括：S1)在低温条件下，将肝素钠粗品水溶液调节pH值至酸性，低温离心，收集上清液得到硫酸多糖溶液；S2)将所述硫酸多糖溶液进行乙醇分级沉淀处理，得到去除慢速移动肝素后的硫酸多糖沉淀；S3)将所述硫酸多糖沉淀溶解后加入阴离子交换树脂进行吸附；S4)用2～5wt％的氯化钠溶液对吸附后的阴离子交换树脂进行洗脱；S5)用10～15wt％的氯化钠溶液对洗脱后的阴离子交换树脂进行洗脱，得到洗脱液；S6)将所述洗脱液进行乙醇沉淀，得到舒洛地特原料药。与现有技术相比，本发明以肝素钠粗品为原料，避免了有效组分的丢失，通过低温酸处理工艺，去除肝素钠粗品中的蛋白质、、核酸等杂质，然后采用乙醇分级沉淀工艺，去除硫酸多糖中慢速移动肝素杂质，再采用离子交换工艺以低浓度氯化钠溶液去除硫酸多糖中多余的硫酸皮肤素，以高浓度氯化钠溶液洗脱下舒洛地特洗脱液，最后乙醇沉淀，得到舒洛地特原料药，原料来源稳定、没有引入杂质、工艺简单、成本低、易放大，适于工业化生产。
[0031]实验表明，本发明制备的舒洛地特原料药中快速移动肝素：75％～85％，硫酸皮肤素：15％～25％，慢速移动肝素含量小于2％；抗Xa活性：70～100IU/mg；脂酶活性：11-16LRU/mg；肝素二糖结构与比例与现有舒洛地特原料药基本一致。
附图说明
[0032]图1为本发明实施例1制备舒洛地特原料药的流程示意图；
[0033]图2为本发明实施例1中原料肝素钠粗品、低温酸处理后、乙醇分级沉淀后、底盐度洗脱物、实施例1中得到的舒洛地特原料药及进口舒洛地特原料药的琼脂糖凝胶电泳图谱；[0034]图3为本发明实施例1中得到的舒洛地特原料药与慢速移动肝素对照品及硫酸软骨素对照品的琼脂糖凝胶电泳图谱；
[0035]图4为进口舒洛地特原料药的高效毛细血管电泳图谱；
[0036]图5为本发明实施例1中的舒洛地特原料药的高效毛细血管电泳图谱。
具体实施方式
[0037]下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0038]本发明提供了一种舒洛地特原料药的制备方法，包括：
[0039]S1)在低温条件下，将肝素钠粗品水溶液调节pH值至酸性，低温离心，收集上清液
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