(19)国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202210381303.7
(22)申请日 2022.04.12
(71)申请人 南京大学
地址 210093 江苏省南京市鼓楼区汉口路
22号
(72)发明人 吴旭东 徐强 罗康康
(51)Int.Cl.
A61K 35/741(2015.01)
A61P 1/16(2006.01)
(54)发明名称拟杆菌Bacteroides caecimuris在制备肝损伤药物中的应用(57)摘要本发明公开了一种拟杆菌Bacteroides caecimuris菌在制备肝损伤药物中的应用。属于生物制药技术领域，本发明叙述了一种拟杆菌Bacteroides caecimuris菌具有显著的肝脏保护作用。本发明研究了B a c t e r o i d e s caecimuris菌在四氯化碳(CCl 4)诱导的肝损伤中的功能。结果显示Bacteroides caecimuris菌能够明显改善CCl 4导致的肝细胞坏死和炎性细胞的浸润，改善肝组织损伤，显著降低血清中的谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)，并且抑制肝组织中的炎症因子表达(IL ‑1β、TNF ‑α)。因此，Bacteroides caecimuris菌对于肝损伤的相关疾病，特别是对免疫性和化学性因素诱导的肝脏转氨酶升高、炎症因子表达增多、肝组织细胞 坏死等损伤有着显著的疗效。权利要求书1页 说明书7页 附图2页CN 114522185 A 2022.05.24
C N 114522185
A
1.Bacteroides caecimuris在肝损伤中的应用。
2.根据权利要求1所述的Bacteroides caecimuris在肝损伤中的应用，其特征在于，所述的Bacteroides caecimuris用于改善四氯化碳(CCl
4
)导致的ALT和AST转氨酶升高。
3.根据权利要求1所述的Bacteroides caecimuris在肝损伤中的应用，其特征在
于，所述的Bacteroides caecimuris用于改善CCl
4
导致的肝组织炎症因子浸润。
4.根据权利要求1所述的Bacteroides caecimuris在肝损伤中的应用，其特征在
于，所述的Bacteroides caecimuris用于改善CCl
4导致的肝细胞坏死。
权 利 要 求 书1/1页CN 114522185 A
拟杆菌Bacteroides caecimuris在制备肝损伤药物中的
应用
技术领域
[0001]本发明涉及生物制药技术领域，具体涉及一种拟杆菌Bacteroides caecimuris，
)造成的肝损伤。
它能够改善四氯化碳(CCl
4
背景技术
[0002]肝损伤的研究现状
[0003]肝脏是体内重要的实质性器官，负担人体的重要生理功能。目前，各种原因导致的肝损伤已成为威胁人类健康的常见疾病之一。常见的肝损伤原因包括：化学性肝损伤、免疫性肝损伤、酒精性肝损伤、药物性肝损伤等等。各种肝损伤的发病原因和机制各有不同，但都是对肝脏组织和肝细胞造成了难以逆转的损害，严重的时候肝功能极度受损，会危及生命。
、D‑氨基半乳糖、亚硝胺等引起。[0004]化学性肝损伤常见的有一些化学毒物，例如CCl
4
这些化学毒物可以蓄积在肝组织中，促进肝脏部位产生大量炎症因子，导致炎症反应持续进行，增加肝脏星形胶质细胞的激活，产生肝纤维化与肝细胞坏死。
[0005]免疫性肝损伤常见于自身免疫性肝炎以及病毒性肝炎免疫性肝损害的病人体内。免疫性肝损伤的主要参与细胞是CD4 T细胞与自然杀伤T细胞。这些免疫细胞在病人体内大量活化，释放大量致炎细胞因子，进一步激活体内的其它炎症细胞，如单核细胞、kupffer细胞等等，最终在肝脏部位造成过度激活的炎症反应，损伤肝实质细胞。
[0006]酒精性肝损伤是由于过量长期过量饮酒导致。乙醇进入体内，主要的代谢途径是在肝脏内将乙醇转变为乙醛，再使乙醛转化为乙酸，进行代谢。乙醛可诱导肝脏发生氧化应激，损害线粒体和微管，可以诱导肝细胞发生凋亡或坏死。
[0007]药物性肝损伤常见于对乙酰氨基酚、利福平、等临床常用药，在病人体内引发的肝脏转氨酶升高，肝组织炎症坏死等。主要是由于这些药物在肝细胞中激活了线粒体氧化应激，导致钙稳态失衡，增加了促炎信号而抑制了抗炎信号，最终导致肝细胞坏死。[0008]肝损伤的
[0009]虽然上述肝损伤的产生原因各不相同，但它们都有一些一致的病理现象，包括AST、ALT转氨酶升高，肝组织产生大量炎症因子，肝细胞变性、凋亡或坏死等等。这些病理现象在各种肝损伤中都很常见，因此，临床上肝损伤也大都使用的是降低转氨酶、降低炎症的相关药物。但由于这些抗肝损伤的药物也绝大部分是经由肝脏代谢的，这对于已经发生肝损伤的病人来说，无疑加重了他们的肝脏负担，让本就损伤的肝脏不堪重负，并且目前临床上使用的抗肝损伤药物的使用时间都比较长，有可能保护性作用还未发挥就会带来新的副作用，加剧肝脏损伤，因此需要寻新的方式和手段，来改善肝损伤。
[0010]肠道菌在肝损伤中的应用前景
[0011]肝脏具有肝动脉和肝静脉的两重血供。其中，肝门静脉系统主要接收肠道血液并汇聚至肝脏，从而使得肠道与肝脏之间存在密切联系，形成肝肠循环，例如胆盐就是通过肝
肠循环，从小肠回到肝脏再利用的。近年来，随着肝肠轴的不断深入研究，发现肠道菌在慢性肝功能损伤的过程中发挥了重要的作用。菌是机体的重要组成部分，菌的过度生长、菌异位、肠粘膜通透性增加以及免疫功能受损都能对肝功能产生影响。
[0012]益生菌的概念是1965年提出的，其作用是促进有益菌繁殖、抑制致病菌生长，维持肠道菌平衡，有益于人体健康。目前，不少益生菌已广泛应用于胃肠疾病的临床，效果显著。常见益生菌有
乳杆菌(Lactobacillus)、双歧杆菌(Bifidobacterium)、嗜酸杆菌(Acidophilus)等。除此之外，益生菌还可发挥免疫调节的作用。乳杆菌和双歧杆菌是益生菌中重要的抗炎菌，已证明Lactobacillus casei可通过增加机体抑炎细胞因子(如IL‑10、TGF‑β)，抑制促炎细胞因子(如IL‑1β、IL‑2、IL‑6、IL‑12、IL‑17)缓解大鼠类风湿关节炎；Lactobacillus plantarum LC27和Bifidobacterium longum LC67均可通过抑制核因子‑κB(nuclear factor κB，NF‑κB)炎性通路抑制炎症反应；Lactobacillus casei可促使CD4+T 分化为调节性T细胞(regulatory T cell，Treg)而抑制其分化为Th17细胞，并增强Treg细胞功能、抑制Th17功能，通过免疫调节缓解自身免疫性疾病。
[0013]最近有研究结果显示，拟杆菌Bacteroides acidifaciens能够减少肝细胞内的脂滴蓄积，改善胰岛素抵抗，具有减肥的作用。因此拟杆菌Bacteroides acidifaciens可能是体内的益生菌。而拟杆菌的其它菌株对上述各类型的肝损伤是否具有保护作用目前还不得而知。鉴于不少菌已经在临床上成功应用的先例，后续开发肝损伤的有益菌，前景可观。并且，菌不直接进入体内而是通过代谢产物发挥效应，因此可以避免加重受损肝脏的负担。
[0014]我们前期的工作结果显示，肝损伤的小鼠粪便中各类菌的成分发生了明显改变，通过测序证实，Bacteroides caecimuris在肝损伤的粪便中表达较高。Bacteroides ca e cim u ris在各类型肝损伤中的作用尚未见报道。因此，本发明旨在进一步明确Bacteroides caecimuris在制备肝损伤药物中的应用。
发明内容
[0015]针对上述情况，本发明提供了一种拟杆菌Bacteroides caecimuris，能够显著改善CCl
介导的肝脏急性损伤，保护肝细胞膜完整性，降低血清转氨酶，改善肝脏组织内部的4
炎症反应以及细胞损伤等等。
[0016]本发明的技术方案是拟杆菌Bacteroides caecimuris在制备肝损伤中的应用。
[0017]进一步的，所述Bacteroides caecimuris用于肝损伤导致的转氨酶升高。[0018]进一步的，所述Bacteroides caecimuris用于改善肝损伤导致的肝脏炎症。[0019]进一步的，所述Bacteroides caecimuris用于肝损伤导致的肝细胞变性坏死等。
[0020]本发明的目的在于探索Bacteroides caecimuris作为保护肝细胞损伤，减轻肝脏炎症的有效药物在化学性肝损伤、药物性肝损伤、免疫性肝损伤等肝脏疾病中的功能与应用。
[0021]前期工作中，我们首次证实在肝损伤的小鼠模型中，粪便中的菌组分发生了显著改变，进一步分析发现其中的Bacteroides caecimuris菌表达显著增高。进而我们购买
了Bacteroides caecimuris菌株，进行扩增，并在CCl
4
肝损伤模型小鼠中灌胃给予
Bacteroides caecimuris菌。观察到Bacteroides caecimuris灌胃的小鼠，血清中ALT和AST明显下降，肝脏组织中的炎症因子水平(IL‑1β和TNF‑α)也显著降低，组织学评分显示，
给予Bacteroides caecimuris能够明显改善CCl
4
造成的肝脏细胞变性坏死等损伤。并且，我们也检测了灌胃之后，粪便中的Bacteroides caecimuris菌确实有显著升高，同时也佐证了Bacteroides caecimuris确实在体内发挥保肝效应。这些研究说明，本发明的有益效果是Bacteroides caecimuris能够作为潜在的肝损伤的有益菌药物继续开发应用。
附图说明
[0022]图1.是本发明Bacteroides caecimuris在制备肝损伤药物中应用的流程图
[0023]图2.是本发明中Bacteroides caecimuris降低CCl
4
致小鼠血清转氨酶升高的对比图。(A)ALT；(B)AST。
[0024]图3.是本发明中Bacteroides caecimuris抑制CCl
4
致小鼠肝脏炎症因子表达的对比图。(A)IL‑1β；(B)TNF‑α。
[0025]图4.是本发明中Bacteroides caecimuris改善CCl
4
致小鼠肝脏组织损伤的统计图。
[0026]图5.是本发明中Bacteroides caecimuris灌胃给予小鼠之后，粪便中检测到的Bacteroides caecimuris量。
具体实施方式
[0027]为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面结合附图对本发明的技术方案做进一步的详细说明：
[0028]本发明的技术方案是拟杆菌Bacteroides caecimuris在制备肝损伤中的应用。
[0029]进一步的，所述Bacteroides caecimuris用于肝损伤导致的转氨酶升高。[0030]进一步的，所述Bacteroides caecimuris用于改善肝损伤导致的肝脏炎症。[0031]进一步的，所述Bacteroides caecimuris用于肝损伤导致的肝细胞变性坏死等。
[0032]具体实施例：
[0033]如图1‑5所述，其中，图1是拟杆菌Bacteroides caecimuris肝损伤的操作流
程示意图。图2是本发明中使用Bacteroides caecimuris缓解CCl
4
所致的肝脏转氨酶升高(ALT、AST)的示意图。选取6‑8周龄的C57BL/6雄鼠，灌胃给予Bacteroides caecimuris，(每
天一次，连续灌胃1周)，之后腹腔注射0.2％CCl
4溶液建立CCl
4
肝损伤模型，24小时后收取小
鼠血样和肝组织。(A)、空白组、模型组和给药组小鼠血清的ALT；(B)、空白组、模型组和给药
组小鼠血清的AST。图3是本发明中Bacteroides caecimuris改善CCl
4
所致的肝脏炎症反应。小鼠的处理方式与图2相同，收取各组的肝脏组织，进行是是荧光定量PCR检测。(A)IL‑1β；(B)TNF‑α。图2和图3的数据以平均值±SD表示，每组10只小鼠。#P＜0.05对比正常组，＊P
＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001对比CCl
4
组。图4是本发明中Bacteroides caecimuris改
善CCl
4
致小鼠肝脏组织损伤的统计图。小鼠的处理方式同前，收取各组肝脏组织，用福尔马
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议