(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910821856.8
(22)申请日 2019.09.02
(71)申请人 中国海洋大学
地址 266000 山东省青岛市崂山区松岭路
238号
(72)发明人 李国云 于广利 李超 牛庆凤
蔡超 郝杰杰
(74)专利代理机构 青岛合创知识产权代理事务
所(普通合伙) 37264
代理人 王晓晓
(51)Int.Cl.
C07H 1/08(2006.01)
C07H 11/00(2006.01)
A61P 7/02(2006.01)
A61P 7/00(2006.01)
(54)发明名称
用
(57)摘要
本发明公开了一种新型海参岩藻多糖及其
制备方法和应用。所述新型海参岩藻多糖重均分
子量为150~200kDa，硫酸根的质量比为30~45%，
具有由α-1→3连接的岩藻糖组成的四糖重复单
元，所述重复单元为：[→3-α-l -Fucp -1→3-α-
l -Fucp2(OSO 3−)-1→3-α-l -Fucp2(OSO 3−)-1→
3-α-l -Fucp2,4(OSO 3−)-1→]。所述海参岩藻多
糖为首次从爱琴海海参Holothuria polii 中分
离得到的一种结构新颖的岩藻多糖。同时，本发
明中的海参岩藻多糖可以恢复由环磷酰胺诱导
的白细胞和中性粒细胞的减少，表明本发明中的
岩藻多糖具有刺激造血的作用。此外，该海参岩
藻多糖还具有良好的内源性抗凝血活性。权利要求书2页 说明书6页 附图5页CN 110437288 A 2019.11.12
C N 110437288
A
1.一种新型海参岩藻多糖，其特征在于：它的化学结构式如式（Ⅰ）所示：
（Ⅰ）
所述新型海参岩藻多糖重均分子量为100~200kDa，硫酸根的质量比为35~45%，具有由α-1→3连接的岩藻糖组成的四糖重复单元，所述四糖重复单元为：
[→3-α-l -Fucp -1→3-α-l -Fucp2(OSO 3−)-1→3-α-l -Fucp2(OSO 3−)-1→3-α-l -Fucp2,4(OSO 3−)-1→]。
2.根据权利要求1所述的新型海参岩藻多糖，其特征在于：所述海参岩藻多糖来源于爱琴海海参Holothuria polii 。
3.根据权利要求1所述的新型海参岩藻多糖，其特征在于：所述海参岩藻多糖中岩藻糖的质量比为90~100%。
4.权利要求1所述的新型海参岩藻多糖的制备方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
（1）将干海参粉末于体积比为4~5：1的氯仿/甲醇混合溶液中浸泡脱脂，离心后去除上清液后复溶于水；
（2）然后在蛋白酶55~75℃下反应20~30h，离心去除沉淀，再用1~3倍体积的氯化十六烷基吡啶水溶液沉淀多糖；
（3）再次离心后去除上清液，将沉淀后的多糖再复溶于10~20倍体积的氯化钠水溶液和乙醇的混合溶液中，用2~4倍体积的乙醇沉淀；
（4）离心烘干得到固体粉末，溶于水后超滤脱盐，浓缩冻干得到多糖粗品；
（5）将步骤（4）所得多糖粗品分级分离，以NaCl水溶液为流动相进行洗脱，经阴离子交换柱分离纯化，透析除盐、冻干；
（6）将所得冻干组分以盐溶液为流动相，使用凝胶过滤谱柱进一步纯化，苯酚/硫酸法检测，透析后减压浓缩、冻干，即得所述岩藻多糖。
5.根据权利要求4所述的新型海参岩藻多糖的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中蛋白酶为木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、羧肽酶中的一种或多种。
6.根据权利要求4所述的新型海参岩藻多糖的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中氯化钠水溶液的浓度为3mol/L ~5mol/L。
7.根据权利要求4所述的新型海参岩藻多糖的制备方法，其特征在于：所述步骤（6）中
盐溶液为醋酸铵或碳酸氢铵；所述凝胶过滤的分离介质为葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、丙烯葡聚糖凝胶或交联琼脂糖凝胶。
8.权利要求1
~3任一所述的岩藻多糖在制备造血刺激剂与抗凝剂的药物中的应用。 9.根据权利要求8所述的岩藻多糖在制备造血刺激剂与抗凝辅助的药物中的应用，其特征在于：所述岩藻多糖能够加速环磷酰胺诱导的白细胞和中性粒细胞的恢复。
10.根据权利要求8所述的岩藻多糖在制备造血刺激剂与抗凝辅助的药物中的应用，其特征在于：所述海参岩藻多糖通过内源性凝血途径发挥作用，在100-300μg/mL浓度下抗凝血效果优于依诺肝素钠。
一种新型海参岩藻多糖及其制备方法和应用
技术领域
[0001]本发明属于天然高分子领域，具体涉及一种新型海参岩藻多糖及其制备方法和应用。
背景技术
[0002]几个世纪以来，海参一直被用作中国和其他亚洲国家的传统滋补食品。海参的主要食用和药用部分是体壁，其含有许多生物活性成分，例如多糖，海参皂苷，脑苷脂和神经节苷脂等。酸性多糖是海参中最重要的成分，主要分为两类：岩藻糖基硫酸软骨素（FCS）和岩藻多糖（Fucoidan）。据报道，从海参中获得的多糖具有抗癌，抗凝血，抗血栓，抗病毒和神经保护等作用，多糖结构解析对于构效关系阐明和相关药物开发至关重要。
[0003]Fucoidan属于一类富含岩藻糖和硫酸酯基的酸性多糖，通常存在于海藻和无脊椎动物中。自1913年，Kylin首次从褐藻中提取得到至今，在过去的一百多年中，海藻来源Fucoidan已得到广泛研究，其具有高度复杂的结构和化学组成。根据岩藻糖的不同连接方式可将其分为Type I型和Type II型。像来源于海带（Laminaria japonica）和厚叶切氏海带（Kjellmaniella crassifolia）等的Fucoidan，主链为α-1, 3连接方式的属于Type I 型，而从墨角藻（Fucus vesiculosus）和泡叶藻（Ascophyllum nodosum）等分离的Fucoidan，其主链为α-1, 3/α-1, 4交替连接方式的为Type II型。从海胆和海参等海洋无脊椎动物中提取的岩藻多糖结构较为简单，多为重复单元组成的线性多糖。近年来，关于海参岩藻多糖结构的研究日益增多。像来自海地瓜（Acaudina molpadioides）和糙刺参（Stichhopus horrens）的岩藻多糖是α-1→3连接的线性多糖，但具有不同的重复单元。海地瓜岩藻多糖由四糖重复单元组成，而糙刺参岩藻多糖由单糖重复单元组成。来自仿刺参（Apostichopus japonicas）的岩藻多糖是以五糖重复单元为主要结构的支链多糖。来自象牙参（Holothuria fuscopunctata）的岩藻多糖由α-1→4连接的单糖重复单元组成。这些海参岩藻多糖的主要结构见图1。
[0004]许多研究表明岩藻多糖具有广泛的生物学和药理学活性，中国专利C N 105399848A涉及岩藻多糖在制备抗肿瘤药物中的应用，通过与血管生成关键细胞因子BMP4结合，抑制其信号通路来发挥抗肿瘤活性。中国专利CN 108904524A涉及的是一种低分子量岩藻多糖在肠炎中的应用。中国专利CN 104586878A报道了褐藻来源岩藻多糖在制备抗代谢综合症的药物和保健品中的应用，能有效改善胰岛
素抵抗。中国专利CN 104523744A 提供了褐藻岩藻多糖在制备降血脂和物中的应用。中国专利CN 103880975A涉及一种来源于笼目海带岩藻多糖在制备抗甲型流感病毒药物中的应用，对甲型H1N1感染的狗肾上皮细胞具有明显保护作用。中国专利CN 103288978A提供了一种褐藻岩藻多糖在制备抗糖尿病的α-糖苷酶抑制剂中的应用。中国专利CN 101040867公开了一种棘皮动物或褐藻来源岩藻多糖在制备防治神经退行性疾病和认知损伤药物中的应用。中国专利C N 109432121A涉及墨角藻来源岩藻多糖在抑制LOX-1信号途径中的应用。中国专利CN 108467436A涉及一种裙带菜来源的岩藻多糖用于免疫调节药物或保健品用途的开发。中国
专利CN 108478594A涉及岩藻多糖的一种医药新用途，用于预防与有机磷农药所致的胚胎毒性作用。中国专利CN 106727668A公开了一种海带来源岩藻多糖在制备抗肿瘤及抗氧化剂中的应用。中国专利CN 107334780A公开了一种岩藻多糖在制备增强正畸支抗的药物中的应用。但以上专利均明显区别于本发明岩藻多糖的结构及其在刺激骨髓造血和抗凝方面的应用。
发明内容
[0005]本发明目的是提供一种新型海参岩藻多糖及其制备方法和应用。本发明从爱琴海海参中提取一种岩藻多糖，并进行化学结构解析和生物活性评价。
[0006]为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：
本发明提供了一种新型海参岩藻多糖，它的化学结构式如式（Ⅰ）所示：
（Ⅰ）
所述新型海参岩藻多糖重均分子量为100
~200kDa，硫酸根的质量比为35
~
45%，具有由
α-1→3连接的岩藻糖组成的四糖重复单元，所述四糖重复单元为：
[→3-α-l-Fucp-1→3-α-l-Fucp2(OSO3−)-1→3-α-l-Fucp2(OSO3−)-1→3-α-l-Fucp2,4 (OSO3−)-1→]。
[0007]进一步的：所述海参岩藻多糖来源于爱琴海海参Holothuria polii。
[0008]进一步的：所述海参岩藻多糖中岩藻糖的质量比为90~100%。
[0009]本发明还提供了所述的新型海参岩藻多糖的制备方法，所述方法包括如下步骤：
（1）将干海参粉末于体积比为4
~5：1的氯仿/甲醇混合溶液中浸泡脱脂，离心后去除上
清液后复溶于水；
（2）然后在蛋白酶55
~75℃下反应20
~
30h，离心去除沉淀，再用1
~
3倍体积的氯化十六烷
基吡啶水溶液沉淀多糖；
（3）再次离心后去除上清液，将沉淀后的多糖再复溶于10
~20倍体积的氯化钠水溶液和
乙醇的混合溶液中，用2
~4倍体积的乙醇沉淀；
（4）离心烘干得到固体粉末，溶于水后超滤脱盐，浓缩冻干得到多糖粗品；
（5）将步骤（4）所得多糖粗品分级分离，以NaCl水溶液为流动相进行洗脱，经阴离子交换柱分离纯化，透析除盐、冻干；
（6）将所得冻干组分以盐溶液为流动相，使用凝胶过滤谱柱进一步纯化，苯酚/硫酸
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