(10)申请公布号 (43)申请公布日 2015.02.11
C N 104342422
A (21)申请号 201310338922.9
(22)申请日 2013.08.06
C12N 9/68(2006.01)
地址300000 天津市宁河县芦台镇曹庄村周
营
(72)发明人贾立明 王凤艳 贾京华 刘平
陈小明
(54)发明名称
(57)摘要
一种从蚯蚓中提取高活性蚓激酶的方法，包
括以下步骤:(1)选择蚯蚓；(2)清洗；(3)磨浆；
(4)离心，用高速离心机经高速离心将盐析后的
浆液的杂质去除，收集上清液，沉淀用盐溶液洗涤
两次，再离心，再收集上清液，并把收集的上清液
合并到一起；(5)超滤，将合并后的上清液进行第
一次超滤，滤除不溶于水的大分子；将超滤后的
上清液再次进行超滤，浓缩有效成分，当浓缩液达
5%-10%浓度后，进入真空冷冻干燥机；(6)真空冷
冻干燥；(7)包装。本发明可以从蚯蚓均浆液中一
步获得全部蚓激酶组分，且具有简单易行，提取物
有效成分高等特点，适合大规模生产。
(51)Int.Cl.
权利要求书1页 说明书3页
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书3页(10)申请公布号CN 104342422 A
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1.一种从蚯蚓中提取高活性蚓激酶的方法，其特征是，包括以下步骤:
(1)选择蚯蚓
选择品质优良的蚯蚓品种，体内不能含有重金属；
(2)清洗
取一定量的活蚯蚓，水洗数次，使其内脏中的污物排除，筛除漂洗各种杂质并沥干污水；
(3)磨浆
清洗干净的蚯蚓加入一定浓度的盐水，在组织均浆器中高速均浆5-15分钟后，低温静置盐析沉淀；
(4)离心
用高速离心机经高速离心将盐析后的浆液的杂质去除，收集上清液，沉淀用盐溶液洗涤两次，再离心，再收集上清液，并把收集的上清液合并到一起；
(5)超滤
将合并后的上清液进行第一次超滤，滤除不溶于水的大分子；将超滤后的上清液再次进行超滤，去除杂质，脱盐脱水，浓缩有效成分，当浓缩液达5%-10%浓度后，进入真空冷冻干燥机；
(6)真空冷冻干燥
在10-30°C 的条件下，干燥5-20小时制成干粉；
(7)包装用铝塑膜密封包装并低温保存。权 利 要 求 书CN 104342422 A
一种从蚯蚓中提取高活性蚓激酶的方法
[0001] 本发明属生物化学制药技术领域，具体为一种从蚯蚓中提取高活性蚓激酶的方法。
背景技术
[0002] 血栓性疾病的高发病率、高死亡率及高致残率严重威胁人类的生存，溶栓物是该病的首选用药。目前临床上使用的溶栓物中普遍存在易引起出血的副作用；有的价格昂贵，一般百姓难以承受；有的稳定性较差，保存条件要求较高，给用药者带来很多不便；有的品种给药方式单一，只有口服、或只有静脉或肌肉注射，使用药范围受到很大限制。蚓激酶是从蚯蚓体内提取的一种活性物质，已被证明有较好的临床应用价值，它是一种多分子重组口服制剂，与血栓（纤维蛋白）有特殊的亲和力，能够跟踪溶栓，有效溶解微栓，改善微循环，加强心、脑血管侧支循环，开放性修复血管受损内皮细胞，增加血管弹性，改善血管供氧功能，降低血液粘度，降低血小板聚集率，抑制血栓再次形成。修复血栓发生后周边坏死脑细胞，挽救半暗区。目前已广泛用于临床，并越来越多地用在心、脑血管、内分泌，呼吸系统等疾病的预防和中心。近20多年来，不少的研究人员都在力求将蚓激酶的研究推向实际应用，先后有各种各样的分离纯化技术问世。但先有的提取方法蚓激酶的收率很低，且蚓激酶的制备成本很高，产生需处理的废液多，蚓激酶的生产能力也相对较低。
发明内容
[0003] 本发明所解决的技术问题在于提供一种从蚯蚓中提取高活性蚓激酶的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
[0004] 本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：
一种从蚯蚓中提取高活性蚓激酶的方法，包括以下步骤:
(1)选择蚯蚓
选择品质优良的蚯蚓品种，体内不能含有重金属；
(2)清洗
取一定量的活蚯蚓，水洗数次，使其内脏中的污物排除，筛除漂洗各种杂质并沥干污水；
(3)磨浆
清洗干净的蚯蚓加入一定浓度的盐水，在组织均浆器中高速均浆5-15分钟后，低温静置盐析沉淀；
(4)离心
用高速离心机经高速离心将盐析后的浆液的杂质去除，收集上清液，沉淀用盐溶液洗涤两次，再离心，再收集上清液，并把收集的上清液合并到一起；
(5)超滤
将合并后的上清液进行第一次超滤，滤除不溶于水的大分子；将超滤后的上清液再次进行超滤，去除杂质，脱盐脱水，浓缩有效成分，当浓缩液达5%-10%浓度后，进入真空冷冻干燥机；
(6)真空冷冻干燥
在10-30°C的条件下，干燥5-20小时制成干粉；
(7)包装
用铝塑膜密封包装并低温保存。
[0005] 有益效果
本发明可以从蚯蚓均浆液中一步获得全部蚓激酶组分，且具有简单易行，提取物有效成分高等特点，适合大规模生产。
[0006] 下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0007] 一种从蚯蚓中提取高活性蚓激酶的方法，包括以下步骤:
(1)选择蚯蚓
选择品质优良的蚯蚓品种，体内不能含有重金属；
(2)清洗
取一定量的活蚯蚓，水洗数次，使其内脏中的污物排除，筛除漂洗各种杂质并沥干污水；
(3)磨浆
清洗干净的蚯蚓加入一定浓度的盐水，在组织均浆器中高速均浆5-15分钟后，低温静置盐析沉淀；
(4)离心
用高速离心机经高速离心将盐析后的浆液的杂质去除，收集上清液，沉淀用盐溶液洗涤两次，再离心，再收集上清液，并把收集的上清液合并到一起；
(5)超滤
将合并后的上清液进行第一次超滤，滤除不溶于水的大分子；将超滤后的上清液再次进行超滤，去除杂质，脱盐脱水，浓缩有效成分，当浓缩液达5%-10%浓度后，进入真空冷冻干燥机；
(6)真空冷冻干燥
在10-30°C的条件下，干燥5-20小时制成干粉；
(7)包装
用铝塑膜密封包装并低温保存。
[0008] 对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权
利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
[0009] 此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
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