(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011528345.6
(22)申请日 2020.12.22
(71)申请人 苏州大学
地址 215006 江苏省苏州市十梓街1号
(72)发明人 沈碧玉 徐广银 许宇成 陈昊洋
李惠玲 宋绍永 田原青
(74)专利代理机构 杭州伟知新盛专利代理事务
所(特殊普通合伙) 33275
代理人 陈千楷
(51)Int.Cl.
A01K 67/02(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开一种CIA大鼠造模技术，其造模
述选取标本步骤如下：首先，从培养仓内部选取
合适大小的SD大鼠，其大小为六周龄；将选取的
六周领SD大鼠放置在实验室内部的工作箱中，让
其在试验箱内部适应性生活2‑3天；本发明中采
用的造模技术，充分缓解了实验对象大鼠对于环
境的应激性，且采用此种技术的注射造模，使得
大鼠的造模可以快速准确的得到成功，实验得到
的造模结果HE染病理结果显示，单核巨噬细
胞、淋巴细胞浸润增生，滑膜组织增生形成绒毛
状。随时间进展主要表现为滑膜细胞纤维化，纤
维组织渗出，并且有关节和软骨组织的破坏，可
以清楚直观的看到。权利要求书1页 说明书3页CN 112493208 A 2021.03.16
C N 112493208
A
1.一种CIA大鼠造模技术，其造模技术由选取标本、实验操作和结果观察构成，其特征在于：
所述选取标本步骤如下：
步骤一：首先，从培养仓内部选取合适大小的SD大鼠，其大小为六周龄；
步骤二：将选取的六周领SD大鼠放置在实验室内部的工作箱中，让其在试验箱内部适应性生活2‑3天；
所述实验操作步骤如下：
步骤一：SD大鼠适应性生活2‑3天之后，将其取出，放在无菌条件下，备用；
步骤二：取10mg牛II型胶原溶于25U的17.5M冰醋酸中，加入4925u的DD水中，用振荡器中避光震荡；
步骤三：将上述避光震荡之后的液体中加入完全弗氏佐剂，其完全弗氏佐剂按照容积比1：1，避光，在冰水混合物中使用超声混合充分混和乳化，混合物以滴加水中不扩散为度；
步骤四：取乳化后的混合物，按O.2ml/只，于大鼠尾根部2cm皮下注射，注射后用无菌棉球按压两分钟；
步骤五：一周后将完全弗氏佐剂换成不完全弗氏佐剂，各取相同容积的药物放入EP管中，进行混合，同上，取0.1ml注射在大鼠根部对侧；
所述结果观察步骤如下：
步骤一：4周后，观察大鼠双下肢肿胀程度，处理大鼠，取大鼠下肢滑膜，做HE染观察；步骤二：观察结果显示HE染病理结果显示，单核巨噬细胞、淋巴细胞浸润增生，滑膜组织增生形成绒毛状。随时间进展主要表现为滑膜细胞纤维化，纤维组织渗出，并且有关节和软骨组织的破坏，实验结束；
步骤三：如无上述显示，则需重复上述实验操作步骤。
权 利 要 求 书1/1页CN 112493208 A
一种CIA大鼠造模技术
技术领域
[0001]本发明属于造模相关技术领域，具体涉及一种CIA大鼠造模技术。
背景技术
[0002]生物工程，是20世纪70年代初开始兴起的一门新兴的综合性应用学科，90年代诞生了基于系统论的生物工程，即系统生物工程的概念。所谓生物工程，一般认为是以生物学(特别是其中的分子生物学、微生物学、遗传学、生物化学和细胞学)的理论和技术为基础，结合化工、机械、电子计算机等现代工程技术，充分运用分子生物学的最新成就，自觉地操纵遗传物质，定向地改造生物或其功能，短期内创造出具有超远缘性状的新物种，再通过合适的生物反应器对这类“工程菌”或“工程细胞株”进行大规模的培养，以生产大量有用代谢产物或发挥它们独特生理功能一门新兴技术。生物工程是分子遗传学、微生物学、细胞生物学、生物化学、化学工程和能源学等各学科的结合，其应用范围十分广泛，包括医药、食品、农林、园艺、化工、冶金、采油、发酵罐新技术和新底物的环保等方面。许多现有的以微生物学为基础的工业，依靠基因工程、利用而得以改进，同时还缓解了环境污染等社会问题。不久的将来，光生物反应器和生物燃料将会变为实现，像木质素纤维素这类结构复杂但能再生的底物会变成为发酵工业的原料，也很可能会为塑料工业和聚合物工业提供起始成分。可以说，基因工程和
细胞工程是生物工程的基础，重组DNA技术和酶固定化技术是生物工程的两个最富有特和潜力的技术，而发酵工程与细胞和组织培养技术是较为成熟和广泛应用的技术。其中动物造模就是生物工程研究中比较常用的技术手段，一般多采用大鼠进行造模操作。
[0003]现有大鼠造模技术存在以下问题：造模技术成功率太低，且会造成大量的实验大鼠的死亡，影响实验的效率，造成一定的实验损失。
发明内容
[0004]本发明的目的在于提供一种CIA大鼠造模技术，以解决上述背景技术中提出的造模技术成功率太低，且会造成大量的实验大鼠的死亡，影响实验的效率，造成一定的实验损失问题。
[0005]为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
[0006]一种CIA大鼠造模技术，其造模技术由选取标本、实验操作和结果观察构成，所述选取标本步骤如下：
[0007]步骤一：首先，从培养仓内部选取合适大小的SD大鼠，其大小为六周龄；
[0008]步骤二：将选取的6周龄SD大鼠放置在实验室内部的工作箱中，让其在试验箱内部适应性生活2‑3天；
[0009]所述实验操作步骤如下：
[0010]步骤一：SD大鼠适应性生活2‑3天之后，将其取出，放在无菌条件下，备用；[0011]步骤二：取10mg牛II型胶原溶于25U的17.5M冰醋酸中，加入4925u的DD水中，用振
荡器中避光震荡；
[0012]步骤三：将上述避光震荡之后的液体中加入完全弗氏佐剂，其完全弗氏佐剂按照容积比1：1，避光，在冰水混合物中使用超声混合充分混和乳化，混合物以滴加水中不扩散为度；
[0013]步骤四：取乳化后的混合物，按O.2ml/只，于大鼠尾根部2cm皮下注射，注射后用无菌棉球按压两分钟；
[0014]步骤五：一周后将完全弗氏佐剂换成不完全弗氏佐剂，各取相同容积的药物放入EP管中，进行混合，同上，取0.1ml注射在大鼠根部对侧；
[0015]所述结果观察步骤如下：
[0016]步骤一：4周后，观察大鼠双下肢肿胀程度，处理大鼠，取大鼠下肢滑膜，做HE染观察；
[0017]步骤二：观察结果显示HE染病理结果显示，单核巨噬细胞、淋巴细胞浸润增生，滑膜组织增生形成绒毛状。随时间进展主要表现为滑膜细胞纤维化，纤维组织渗出，并且有关节和软骨组织的破坏，实验结束；
[0018]步骤三：如无上述显示，则需重复上述实验操作步骤。
[0019]与现有技术相比，本发明提供了一种CIA大鼠造模技术，具备以下有益效果：[0020]本发明中采用的造模技术，充分缓解了实验对象大鼠对于环境的应激性，且采用此种技术的注射造模，使得大鼠的造模可以快速准确的得到成功，实验得到的造模结果HE 染病理结果显示，单核巨噬细胞、淋巴细胞浸润增生，滑膜组织增生形成绒毛状。随时间进展主要表现为滑膜细胞纤维化，纤维组织渗出，并且有关节和软骨组织的破坏，可以清楚直观的看到。
具体实施方式
[0021]下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0022]本发明提供一种技术方案：
[0023]一种CIA大鼠造模技术，其造模技术由选取标本、实验操作和结果观察构成，选取标本步骤如下：
[0024]步骤一：首先，从培养仓内部选取合适大小的SD大鼠，其大小为六周龄；
[0025]步骤二：将选取的六周龄SD大鼠放置在实验室内部的工作箱中，让其在试验箱内部适应性生活2‑3天；
[0026]实验操作步骤如下：
[0027]步骤一：SD大鼠适应性生活2‑3天之后，将其取出，放在无菌条件下，备用；[0028]步骤二：取10mg牛II型胶原溶于25U的17.5M冰醋酸中，加入4925u的DD水中，用振荡器中避光震荡；
[0029]步骤三：将上述避光震荡之后的液体中加入完全弗氏佐剂，其完全弗氏佐剂按照容积比1：1，避光，在冰水混合物中使用超声避光混合充分混和乳化，超声震荡以5000转/分
钟转动，混合物以滴加水中不扩散为度；
[0030]步骤四：将大鼠气体麻醉后固定，尾部用酒精消毒，用1ml注射器抽取0.2ml乳化后的混合物以10‑20度注射于大鼠尾根部2cm，注拔针后用无菌棉球按压两分钟，每次注射更换针头，防止感染同时
节省造模剂。麻醉苏醒后，将动物送回动物房，保证食水供应。[0031]步骤五：一周后将完全弗氏佐剂换成不完全弗氏佐剂，各取相同容积的药物放入EP管中，进行混合，同上，取0.1ml注射在大鼠根部对侧；
[0032]结果观察步骤如下：
[0033]步骤一：4周后，观察大鼠双下肢肿胀程度，处理大鼠，取大鼠下肢滑膜，做HE染观察；
[0034]步骤二：观察结果显示HE染病理结果显示，单核巨噬细胞、淋巴细胞浸润增生，滑膜组织增生形成绒毛状。随时间进展主要表现为滑膜细胞纤维化，纤维组织渗出，并且有关节和软骨组织的破坏，实验结束；
[0035]步骤三：如无上述显示，则需重复上述实验操作步骤。
[0036]造模成功率约为85‑90％，尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
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