(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202111086281.3
(22)申请日 2021.09.16
(71)申请人 海南三元星生物科技股份有限公司
地址 570206 海南省海口市龙华区疏港二
横路27号中交四航海南大厦二楼
(72)发明人 赵子方 郭红星 周尽学
(74)专利代理机构 北京集佳知识产权代理有限
公司 11227
代理人 赵青朵
(51)Int.Cl.
C12P 21/06(2006.01)
C07K 1/34(2006.01)
A61K 38/01(2006.01)
A61P 17/18(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明涉及活性成分提取技术领域，
尤其涉及鳄鱼肽的制备方法及制备的鳄鱼肽。本发明通
用8％的碱性蛋白酶对鳄鱼肉和鳄鱼皮进行酶
解，灭酶离心后通过超滤膜过滤控制鳄鱼肽的相
对分子量，干燥后制备鳄鱼肉多肽。所获得的鳄
鱼肽对自由基DPPH，OH和超氧阴离子自由基的清
除能力依次是85.4％、83.479％、
75.976％。权利要求书1页 说明书4页 附图1页CN 114426998 A 2022.05.03
C N 114426998
A
1.一种鳄鱼肽的制备方法，其特征在于，包括：
步骤1：鳄鱼的皮和肉碎化后，依次经NaCl溶液清洗、蒸馏水清洗、正丁醇溶液清洗、蒸馏水清洗；
步骤2：清洗后的鳄鱼皮肉与水混合，经匀浆获得匀浆液；
步骤3：所述匀浆液经碱性蛋白酶与47℃，pH值为9.0酶解2h后，经灭酶、离心取上清液；步骤4：所述上清液经超滤后取滤液，获得鳄鱼肽，所述超滤的截留分子量为2200Da。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述NaCl溶液中NaCl的浓度为7.5g/100mL；鳄鱼皮肉与NaCl溶液的质量‑体积比为1g:10mL；所述NaCl溶液清洗的条件为4℃搅拌12h。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述正丁醇溶液中正丁醇的体积分数为10％，鳄鱼皮肉与正丁醇溶液的质量‑体积为1g:10mL；所述NaCl溶液清洗的条件为4℃搅拌24h，期间每8h更换新鲜的正丁醇溶液。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，两个蒸馏水清洗步骤中，清洗的次数皆为3次。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2中，水与鳄鱼皮肉的质量比为2:1。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，所述碱性蛋白酶为0.8wt％的碱性蛋白酶溶液，所述碱性蛋白酶溶液与匀浆液的体积比为1:20。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4中，所述超滤后，还包括对未通过滤膜的部分进行旋转蒸发的步骤；所述旋转蒸发温度为60℃，蒸发时间为25min。
8.权利要求1～7任一项所述制备方法制得的鳄鱼肽。
9.权利要求1～7任一项所述制备方法制得的鳄鱼肽在制备抗氧化产品中的应用。
10.一种抗氧化的产品，其特征在于，包括权利要求1～7任一项所述制备方法制得的鳄鱼肽。
权 利 要 求 书1/1页CN 114426998 A
鳄鱼肽的制备方法及制备的鳄鱼肽
技术领域
[0001]本发明涉及活性成分提取技术领域，尤其涉及鳄鱼肽的制备方法及制备 的鳄鱼肽。
背景技术
[0002]鳄鱼有“活化石”之称，具有寿命最长、免疫力最强、终身不患癌症、 骨头最硬的特征。目前，已有许多学者利用生物酶解技术以沙丁鱼、油菜籽、 鲢鱼等多种原料制备了许多抗氧化活性多肽，鳄鱼肉中含人体8种必需氨基 酸，是优势的蛋白资源，除此之外，抗氧化肽是目前国内外研究较多的一种 生物活性肽，安全、稳定、高效，胶原蛋白是一种细胞外蛋白质，由二个或 二个以上氨基酸组成——蛋白肽，人体的吸收是以肽的方式进行，食用蛋白 肽的吸收利用率可达100％，胶原蛋白是细胞外基质中最重要的组成部分，目 前肽主要由蛋白质水解得到胶原蛋白肽是胶原蛋白或明胶经过酶解，分子链 解体断裂得到的产物，含有胶原蛋白全部的氨基酸，肽是构成蛋白质分子的 结构片段，当肽中的氨基酸结构发生变化时，肽的生物性功能也会改变，因 此肽的种类是成千上万的，功能也有多样性，胶原蛋白肽具有抗氧化活性、 降血压活性、抗菌活性、促进骨健康活性和良好的吸湿保湿性，可修复修复 弹性蛋白纤维和内源性胶原蛋白，减轻因紫外线辐射而引起的损伤，具有重 要作用，充分利用胶原蛋白生产活性肽并提高其附加值既节约了资源，减少 环境污染，还能增加经济效益。
[0003]就目前对胶原蛋白肽的提取制备工艺在实际使用时，大都采用酶解，酸 解，碱解等单一方法进行胶原蛋白的提取，采用多种方式酶解时，无法针对 提取原料的分子量进行对应的方法选择，同时现有的提取方法对提取原料的 分子量不进行控制，从而使胶原蛋白肽的提取率低和提取后胶原蛋白活性低 下。
发明内容
[0004]有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种高活性的鳄鱼肽的制 备方法及制备的鳄鱼肽。
[0005]本发明提供的鳄鱼肽的制备方法包括：
[0006]步骤1：鳄鱼的皮和肉碎化后，依次经NaCl溶液清洗、蒸馏水清洗、正 丁醇溶液清洗、蒸馏水清洗；
[0007]步骤2：清洗后的鳄鱼皮肉与水混合，经匀浆获得匀浆液；
[0008]步骤3：所述匀浆液经碱性蛋白酶与47℃，pH值为9.0酶解2h后，经灭 酶、离心取上清液；
[0009]步骤4：所述上清液经超滤后取滤液，获得鳄鱼肽，所述超滤的截留分子 量为2200Da。
[0010]所述鳄鱼皮肉碎化前，采用MDF‑U71V超低温冰箱进行鳄鱼皮和鳄鱼肉 的冷藏。所述碎化包括采用XFB‑200粉碎机进行鳄鱼皮和鳄鱼肉的剪碎处理。
[0011]步骤1中，所述NaCl溶液中NaCl的浓度为7.5g/100mL；鳄鱼皮肉与NaCl 溶液的质量‑体积为1g:10mL；所述NaCl溶液清洗的条件为4℃搅拌12h。
[0012]步骤1中，所述正丁醇溶液中正丁醇的体积分数为10％，鳄鱼皮肉与正 丁醇溶液的质量‑体积为1g:10mL；所述NaCl溶液清洗的条件为4℃搅拌24h， 期间每8h更换新鲜的正丁醇溶液。
[0013]步骤1中，两个蒸馏水清洗步骤中，清洗的次数皆为3次。
[0014]步骤2中，水与鳄鱼皮肉的质量比为2:1。
[0015]步骤3中，所述碱性蛋白酶为0.8wt％的碱性蛋白酶溶液，所述碱性蛋白 酶溶液与
调节pH至9.0。 所述灭酶的条件为95℃保匀浆液的体积比为1:20。所述酶解时加入NaHCO
3
持10min。所述灭酶使采用HH‑6型数显恒温水浴锅 进行灭酶时温度控制。所述灭酶后，将溶液冷却至5℃。进行离心时采用X‑12R 型高速冷冻离心机进行离心，离心速度为10000r/ min，离心时间20min。
[0016]步骤4中，所述超滤后，还包括对未通过滤膜的部分进行旋转蒸发的步 骤；所述旋转蒸发温度为60℃，蒸发时间为25min。
[0017]本发明所述制备方法制得的鳄鱼肽。
[0018]本发明所述制备方法制得的鳄鱼肽在制备抗氧化产品中的应用。
[0019]本发明还提供了一种抗氧化的产品，其包括本发明所述制备方法制得的 鳄鱼肽。[0020]本发明所述的抗氧化产品包括化妆品、食品、保健品或药品。
[0021]本发明还提供了一种抗氧化的方法，其为给予本发明所述的抗氧化产品。[0022]本发明提供了一种高活性鳄鱼肽的制作工艺，具备以下有益效果：本发 明通过对鳄鱼皮和鳄鱼肉进行脱脂和脱杂蛋白后，采用8％的碱性蛋白酶对鳄 鱼肉和鳄鱼皮进行酶解，灭酶离心后通过超滤膜过滤控制鳄鱼肽的相对分子 量，干燥后制备鳄鱼肉多肽，通过调节pH至9.0，控制 鳄鱼肽相对分子质量为2200Da时，鳄鱼肽对自由基酶解2h，加入NaHCO
3
DPPH，OH和超氧阴离 子自由基的清除能力依次是85.4％、83.479％、75.976％，与其他条件下提取 物获得的多肽的抗氧化性存在显著优势p<0.05，具备作为天然抗氧化剂的潜 力，对相对分子质量的范围和酶解时间的有效控制，不仅提高了鳄鱼肉多肽 的抗氧化性，还有效保持鳄鱼肉多肽的生物活性和功能性成分。
附图说明
[0023]图1为本发明的工艺流程图。
具体实施方式
[0024]本发明提供了鳄鱼肽的制备方法及制备的鳄鱼肽，本领域技术人员可以 借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替 换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。 本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不 脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与 组合，来实现和应用本发明技术。
[0025]需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来 将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示 这些实体或操作之间
存在任何这种实际的关系或者顺序。而，术语“包括”、 “包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系 列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而还包括没有明确 列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的 要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个引用结构”限定的要素， 并不排除在包括要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
[0026]在进行酶解的过程中，每隔0.5h取样，高温灭酶，过滤，得到不同酶解 时间0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4h和4.5h的酶解鳄鱼多肽液进行酶解实 验梯度，其他环境温度，pH均保持相同，反应物底物量保持相同，加入酶量 保持相同，进行酶解时间的观察，进行清除自由基DPPH的能力的对比实验， 发现在碱性蛋白酶酶解2h时，鳄鱼肽清除自由基DPPH的能力最强，达到 85.4％，远远高于鳄鱼肉浆清除自由基能力46.68％，且显著优于其他时间点 取样的鳄鱼肽。说明在适宜条件下，酶解蛋白成小分子肽有利于对自由基 DPPH清除能力的提高，有助于鳄鱼功效性提升。
[0027]但继续酶解鳄鱼蛋白，鳄鱼蛋白继续水解成更小分子，其清除自由基 DPPH能力降低。这一趋势说明鳄鱼肽在一定分子量范围内，多肽链具有较强 的清除自由基DPPH能力，酶解时间越长，鳄鱼肉多肽液相对分子质量逐渐 减小，其超氧阴离子自由基清除能力逐渐增加，考虑到鳄鱼肉多肽液的活性， 发现酶解时间在2h时，超氧阴离子自由基的清除能力高达75.976％，但是都 低于DPPH和OH自由基的清除能力，高于其他鱼肉自由基清除能力，与其 DPPH自由基、羟基自由基清除能力相呼应，说明相对分子质量过低，酶解时 间过长，其鳄鱼肉多肽液的生物活性反而不是最高，因此选用酶解时间为2h。
[0028]通过对鳄鱼皮和鳄鱼肉进行脱脂和脱杂蛋白后，采用8％的碱性蛋白酶对 鳄鱼肉和鳄鱼皮进行酶解，灭酶离心后通过超滤膜过滤控制鳄鱼肽的相对分 子量，冷冻干燥后制备鳄鱼肉多肽，通过酶解2h，加入NaHCO3调节pH至9.0， 控制鳄鱼肽相对分子质量为2200Da 时，鳄鱼肽对自由基DPPH，O
H和超氧 阴离子自由基的清除能力最强分别是85.4％、83.479％、75.976％，表现出较 好的抗氧化性，具备作为天然抗氧化剂的潜力，对相对分子质量的范围和酶 解时间的有效控制，不仅提高了鳄鱼肉多肽的抗氧化性，还有效保持鳄鱼肉 多肽的生物活性和功能性成分。
[0029]脱脂时鳄鱼皮和鳄鱼肉与10％正丁醇体积比1:10，脱脂环境温度为4℃时 搅拌24h脱脂，8h更换一次溶液，进行脱脂，在进行酶解时胶原蛋白肽提取 率随着温度的升高呈先升高后下降的趋势，在47℃达到最大值34.29％，当温 度超过47℃后，提取率开始下降，因为升高温度可以加快酶促反应速度，而 温度过高导致酶活性降低，因此选择酶解温度在47℃，除杂蛋白时鳄鱼皮与NaCl溶液比为1:10m/V，4℃环境温度中搅拌12h进行除杂蛋白处理，原料预 处理时采用MDF‑U71V超低温冰箱进行鳄鱼皮和鳄鱼肉的冷藏，除杂蛋白采 用XFB‑200粉碎机进行鳄鱼皮和鳄鱼肉的剪碎处理，灭酶离心时采用X‑12R 型告诉冷冻洗心剂进行离心，灭酶使采用HH‑6型数显恒温水浴锅进行灭酶时 温度控制，脱杂蛋白和脱脂时蒸馏水清洗时均采用蒸馏水清洗三遍，冷冻干 燥采用Scientz‑12N型冷冻干燥剂，保障脱杂蛋白和脱脂时加入的NaCl溶液 和正丁醇溶液的清洗干净，防止料液残留。
[0030]本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
[0031]下面结合实施例，进一步阐述本发明：
[0032]实施例：
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议