作者：何述辉 陈霞等
来源：《兽医导刊》 2019年第4期
为了研究新鲜中草药对细菌的抑制作用,选取了常见的8 种鲜中草药获取药汁并且运用煮沸和低温超速离心进行处理,采用体外抑菌的打孔法和牛津杯法对大肠杆菌和葡萄球菌的敏感性进行测定。结果显示:新鲜酢浆草对大肠杆菌和葡萄球菌都具有抑制作用,新鲜金银花等7 种中草药对大肠杆菌和葡萄球菌的生长没有抑制作用。 一、材料与方法
1. 主要药品。苦卖菜、酢浆草、车前草、金银花、蒲公英、板蓝根、鱼腥草、苍耳子
2. 主要仪器。BCD-555WKM 华凌电冰箱、GNP-9160 型隔水式恒温培养箱、GZX-9140 MBE 数显鼓风干燥箱、LDZX-50KBS 立式压力蒸汽灭菌器。
4. 试验方法。(1)干品中药提取物的制备。每种中药均采用水煎法制备水提物。苦卖菜、车前草、金银花、板蓝根、苍耳子、酢浆草、鱼腥草、蒲公英各称取50 g,分别置于500 mL 烧杯中,加蒸馏水300 mL 浸泡30 min,加热至沸腾,然后改用文火继续煎煮,30 min后趁热过滤(4 层纱布),收集滤液。药渣中再加蒸馏水200 mL,同法煎煮、过滤。将两次滤液相混,水浴浓缩后凉至室温,用100 mL 容量瓶定容后进行高压灭菌,制得各浓度为0.5 g/mL 的水煎液,4℃保存,备用,并测定其pH 值。
(2)鲜中草药原液的稀释。制备的干品水煎液的浓度为0.5 g/mL,根据每种鲜中草的折干率(酢浆草、金银花和蒲公英的折干率约为5∶1,鱼腥草和车前草的折干率约为4∶1,苦荬菜和板蓝根的折干率约为3∶1,苍耳子的折干率约为2∶1)将鲜中草药物原液用灭菌蒸馏水进行稀释,使终浓度与干品水煎液浓度一致,4℃备用。
(3)试验菌液的制备。将大肠杆菌和葡萄球菌的纯培养物接种于含5.0 mL 的血清肉汤培养基的试管中,37℃培养24 h,用灭菌生理盐水稀释至其浊度0.5 麦氏单位,此时肉汤中细菌数约1.5×l08 CFU/mL。并且将两种细菌接种于pH 为1.7 和4.5 的普通营养肉汤中,培养24 h。
(4) 鲜中草药药敏试验。打孔法:以无菌操作用无菌棉签蘸取稀释好的菌液,在普通琼脂平扳表面涂布均匀。在已涂布细菌的普通琼脂平板培养基表面用打孔,打孔后用酒精灯封底,在孔中加入各药液80μL 勿使其外溢,每种药汁做3 个平行,置恒温箱37℃培养24 h,取出观察,使用游标卡尺用十字交叉法量取抑
菌圈的直径。重复测量三次取平均值。根据药敏试验抑菌圈直径(mm) 标准判断其对药物的敏感性。抑菌圈小于10 mm的为不敏感,11 ~ 15 mm 之间的为中度敏感, 大于15 mm 的为高度敏感。
二、试验结果
1. 中药药敏试验的结果。
(1)鲜中草打孔法药敏试验结果。平皿恒温37℃培养24h 后,通过测量抑菌圈直径可判定,试验所用的葡萄球菌对酢浆草高度敏感,对苦荬菜、车前草、板蓝根、金银花、苍耳子、鱼腥草和蒲公英不敏感;大肠杆菌对酢浆草中度敏感,对苦荬菜、车前草、板蓝根、金银花、苍耳子、鱼腥草和蒲公英均不敏感( 如图1 和图2)。表1显示酢浆草对大肠杆菌抑菌圈直径约为14.16 mm,判定为中度敏感;表2 显示酢浆草对葡萄球菌抑菌圈直径约为20.16 mm,判定为高度敏感。
中药抑菌
(2)干中草打孔法药敏试验结果。平皿恒温37℃培养24h 后,观察发现,试验用葡萄球菌对干品酢浆草、金银花和蒲公英高度敏感,对苦荬菜、车前草、板蓝根、苍耳子和鱼腥草不敏感( 如图3,并且表3 显示,酢浆草对葡萄球菌抑菌圈直径约为18.41 mm,判定为高度敏感;金银花对葡萄球菌抑菌圈直径约为17.12 mm,判定为高度敏感;蒲公英对葡萄球菌抑菌圈直径约为17.50 mm,判定为高度敏感);大肠杆菌对干品酢浆草、苦荬菜、车前草、板蓝根、金银花、苍耳子、鱼腥草和蒲公英不敏感。
三、结论
鲜中草药药敏试验:新鲜酢浆草药物原液对大肠杆菌和葡萄球菌均有较强的抑制作用,但对葡萄球菌的抑制作用更为显著;新鲜苦荬菜、车前草、板蓝根、金银花、苍耳子、鱼腥草和蒲公英的药物原液对葡萄球菌和大肠杆菌均没有抑制作用。
参考文献(略)
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