(整理)多酚氧化酶活性测定.

安全预评价方法可分为定性评价方法和定量评价方法。
(1)非煤矿矿山的建设项目(注:对煤矿建设项目有单独特别规定);多酚氧化酶活性测定
一、引言
食品的褐变主要分为酶促褐变和非酶褐变,多酚氧化酶是引起果蔬褐变的主要酶之一,学习它的活性测定对于果蔬加工采取合理的护措施具有指导意义。多酚氧化酶的活性测定有多种方法,出于一般实验室的条件相对不是很先进,本试验选用了一种较简单的方法,但这种方法仍然可以训练学生掌握测定酶活性的基本要点和技能。
二、原理
邻苯二酚在多酚氧化酶催化下受O2作用生成邻苯二醌,邻苯二醌能够被抗坏血酸还原,如抗坏血酸充足,少量邻苯二酚可反复不断地发生氧化还原。由于该酶最适pH为6,因此这一过程在pH6时最快。
    把分析对象配成pH6左右的样液,在抗坏血酸和邻苯二酚存在时,于20℃下振荡2min,这时抗坏血酸被氧化。精确的经过2min后加入偏磷酸以终止反应。用碘量法(以碘酸钾为基准试剂)进行滴定,测得剩余的抗坏血酸。由得到的数据求出被氧化的抗坏血酸量,并计算出酶活性,并以1g分析物质1min内氧化抗坏血酸的微克分子数表示之。
所有上述过程的主要反应式如下:
          酶
邻苯二酚        邻苯二醌
邻苯二醌+抗坏血酸        邻苯二酚+脱氢抗坏血酸
KIO3+5KI+6HCl→6KCl+3H2O+3I2
3I2+3Vc→3-脱氢Vc+6HI
三、材料和设备
苹果;马铃薯。
研钵;烧杯;50毫升量瓶;250毫升三角瓶;秒表;滴定管;温度计。
四、试剂
1.0.2邻苯二酚溶液:用粗天平称0.2克邻苯二酚,溶解于蒸馏水,稀释到100
毫升,(准备用的前1-2天配制)。贮于棕玻璃瓶中,放在冷凉处。
2.0.01N碘酸钾溶液:用分析天平精确称取0.3566克KIO2(预先在102℃烘2
小时,在干燥皿中冷却备用),用蒸馏水溶解于1升的容量瓶中,加5毫升1N
的NaOH溶液(此时加碱是为了使KIO3和KI在该试剂中暂不反应)和2克KI,
溶解,用蒸馏水稀释到刻度,混匀,保存于棕瓶中。
3.pH6.4的磷酸缓冲液,称取KH2PO4盐5.44克溶解到无碳酸的水中,加10毫
升1N的NaOH溶液,用无碳酸的水稀释至200毫升,保存于磨口玻璃瓶中。
4.0.04N抗坏血酸溶液:用粗天平称取0.35克抗坏血酸溶解到蒸馏水中,用水
稀释至100毫升,混匀。溶液只能用一天。
5.5%的偏磷酸溶液:50克偏磷酸(经验式HPO3)溶解到蒸馏水中,稀释至1升后混匀,保存于磨口玻璃瓶中。
6.0.5%可溶性淀粉。
五、操作程序
称1克新鲜的植物材料,加蒸馏水于瓷研钵中研细,转移到50毫升容量瓶,混匀。充分振荡勿使沉淀下沉,吸10毫升这种悬浮液,倒入250毫升三角瓶中。加入1毫升pH6.4的磷酸缓冲液,再加入5毫升0.4N的抗坏血酸溶液,混匀。加入5毫升0.2%的邻苯二酚溶液,同时开始计时并充分振荡。为使空气中的氧气不断进入溶液一直要均匀地振荡2分钟。经精确作用2分钟后,加入5毫升5%的偏磷酸溶液以停止反应。(整个实验都应在20℃进行。即反各种试剂样液都予先放到20℃环境中,做时也在20℃环境下做,加入偏磷酸量还可根据自己的模索而定)。加入1毫升0.5%的淀粉溶液,用0.01N碘酸钾溶液滴定坑坏血酸的剩余物,直至兰不消失为止。
除了房地产市场外,在不同职业和地点的工资差别中也可以发现类似的情形。同时进行对照滴定。为此吸取10毫升悬浮液注入另一只三角瓶中,加5毫升偏磷酸,再加入1毫升pH6.4磷酸缓冲液,5毫升0.4N抗坏血酸,再加淀粉液,也用0.01NKIO3溶液滴定。
1.环境的概念
同建设项目安全评价相关但又有不同的还有:《地质灾害防治管理办法》规定的地质灾害危险性评估,《地震安全性评价管理条例》中规定的地震安全性评价,《中华人民共和国职业病防治法》中规定的职业病危害预评价等。六、计算多酚氧化酶活性
专项规划    工业、农业、畜牧业、林业、能源、水利、交通、城市建设、旅游、自然资源开发有关的专项规划。    环境影响报告书           
抗坏血酸过氧化物酶3.规划环境影响报告书的审查效力式中:A——多酚氧化酶活性(1克分析物质,20℃下,1min氧化抗坏血酸的微克分子数);50——分析材料悬浮液的总体积;(ml);
一、环境影响评价的发展与管理体系、相关法律法规体系和技术导则的应用n——分析材料的重量(g);
10——测定酶活性所取的悬浮液体积(ml);
(1)前期准备工作。包括明确评价对象和评价范围,组建评价组,收集国内外相关法律、法规、规章、标准、规范,收集并分析评价对象的基础资料、相关事故案例,对类比工程进行实地调查等内容。2——反应时间(min);
a——用于滴定对照的0.01KIO3溶液体积(ml);
第二节 安全预评价b——用于样品滴定的0.01NKIO3溶液体积(ml);
5——0.01N抗坏血酸溶液每ml换算为微克分子数抗坏血酸的系数()。

本文发布于:2024-09-20 21:34:38,感谢您对本站的认可!

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