维生素的测定
17.2 维生素的测定
17.2.1 概述[2,3]
维生素广泛存在于各种生物体中，其种类繁多，化学结构与生理功能各异。因此无法按照结构或功能分类，按其溶解性可分为脂溶性(VA、VD、VE、VK)和水溶性(VB1、VB2、VB6、VB12 、VP、VPP 、VC)两大类。维生素是人体生命活动不可缺少的营养物质，它们一般在动物和人体内不能合成或合成数量少，满足不了动物和人体的需要，必须依靠从食物中摄取。在食物中缺乏了任何一种维生素，人和动物都会发生特有的缺乏症状，如缺乏维生素A、B和C 时，可分别引起夜盲症、脚气和坏血病等，严重时足以致命。某些维生素含量的高低，是评价农产品品质的重要指标之一。
维生素的分析是一项比较复杂的工作。其样品分析的一般程序是：①用酸、碱或酶分解样品，使其中的维生素游离出来；②用溶剂进行提取；③分离干扰物质，对样液进行分离提纯；④用适当的方法进行定量等。维生素的测定方法，有微生物学测定法、生物学测定法等。 仪器分析的方法有分光光度法、荧光分析法、薄层层析法、高效液相谱法等。维生素的分析方法很多，选用方法时应根据样品的品种、类型、待测维生素的性质、含量以及干扰物质多少等因素来决定。下面重点介绍维生素C、维生素B 1和B2以及作为维生素A原的b-胡萝卜素的测定。
维生素C又称抗坏血酸，其纯品为白无臭结晶，熔点为190~192℃，溶于水或乙醇中，不溶于油剂，在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，在弱酸条件下较稳定。还原型(L-抗坏血酸)可被氧化为氧化型(L-脱氢抗坏血酸)，还有一定的生理作用，如果进一步水解则生成2,3-二酮古乐糖酸，失去生理作用。总抗坏血酸包括还原型、氧化型抗坏血酸和2,3-二酮古乐糖酸。 根据它具有的还原性质可以测定VC的含量。常用的测定方法有2,6-二氯靛酚法、2,4-二硝基苯肼法、铅-硫化氢法、碘酸法以及荧光分光光度法。2,6-二氯靛酚法用于测定还原型VC，其它方法多用于测定总VC的含量。
17.2.2 还原性维生素C的测定
17.2.2.1 方法原理
抗坏血酸(VC)结构中有烯二醇结构存在 ，因此具有还原性，能将蓝染料2,6-二氯靛酚还原为无的化合物，VC则被氧化为脱氢VC，反应式如下： 还原型VC 氧化型2,6-二氯靛酚 脱氢VC 还原型2,6-二氯靛酚（无）
2,6-二氯靛酚具有酸碱指示及氧化还原指示的两种特性，在碱性介质中呈深蓝，而在酸性介质中呈浅红(变范围pH4~5)，其氧化态时呈深蓝(碱介质中)或浅红(酸性介质)，还原态时为无。根据这个特性，用碱性蓝染料的标准溶液滴定植物样品酸性浸出液中VC到刚变浅红为终点，由染料的用量即可计算VC的含量。滴定终点的红是刚过量的未被还原的(氧化型)染料溶液在酸性介质中的颜。 通常测定VC浸提和测定都是在20g·L-1的草酸溶液中进行的，目的是保持反应时一定的酸度，避免VC在pH高时易被空气氧化(注1
)。此染料不致氧化待测液中非VC的还原性物质，所以对VC的测定有一定的选择性。 本法适用于测定一般水果、蔬菜样品的还原型VC，不包括脱氢VC。如样品中含有Fe2+、
Sn2+、Cu2+、SO32-、S2O32-、SO2等还原性杂质，则有干扰。
17.2.2.2 主要仪器
高速组织捣碎机(8000~12000r·min-1)；电动离心机(4000r·min-1)； 半微量滴定管。
17.2.2.3 试剂
1. 20g·L-1草酸溶液：称取草酸(化学纯)20g溶于水中，稀释至1L，贮于避光处(注2)
2. 60g·L-1 KI溶液。
3. 10g·L-1 淀粉指示剂。
4. 0.1000 mol·L-1 (1/6 KIO3)标准液：称取在105℃烘过2h的碘酸钾(KIO3 ，优级纯)1.784g溶于水，定容至500mL 。此为0.1000 mol·L-1 (1/6 KIO3)贮备液。使用时将此贮备液用煮沸并冷却的水稀释100倍，即成0. 0010 mol·L-1 (1/6KIO3)标准溶液。大约每星期应稀释配制一次。
5. VC标准溶液：称取维生素C(C5H8O5，分析纯) 20.0mg溶于20g·L-1草酸溶液，并用20g·L-1草酸稀释至100mL，此液约含VC 0.2mg·mL-1，置于冰箱中保存。临用前当天进行标定。
VC的标定：吸取VC液5.00mL于50mL三角瓶中，加入20g·L-1草酸溶液10mL，60 g·L-1KI溶液0.5mL，10 g·L-1淀粉溶液5滴，用0.1000 mol·L-1 (1/6 KIO3)标准液滴定至溶液突变为浅蓝为止(约需滴定11mL)，计算VC的准确浓度：
VC溶液浓度，mg·mL-1= c V1×88/V2
式中 c —所用(1/6KIO3)标准溶液浓度(mol·L-1)；
V1—所用(1/6KIO3)标准溶液的体积(mL)；
V2—所用VC溶液的量(mL)；
88—维生素C(1/2 C5H8O5)的摩尔质量(注3) (g·mol-1)；
6. 2,6-二氯靛酚溶液：称取2,6-二氯靛酚(分析纯)50mg溶于约200mL含有NaHCO3(分析纯)52mg的温水中(< 40℃)，冷却后用水稀释至250mL。用玻璃滤器或折迭滤纸滤于棕瓶中，保存在冰箱中。使用前，待溶液恢复至室温后，用VC标准溶液标定其准确浓度。在冰箱中保存时，每周标定一次(注4)。
标定方法：吸取已标定的VC标准溶液5.00mL(含VC约1mg)于50mL三角瓶中，加入20 g·L-1草酸溶液10mL，摇匀，用2,6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈浅红，约在15s不褪为止(应用染料溶液约10mL)。计算每毫升染料溶液相当于VC的mg数，即滴定度T(应约为0.1mg·mL-1 Vc)：
T= c×V1/V2
式中 c—所用Vc标准液的浓度(mg·mL-1)；
V1—所用Vc标准液的体积(mL)；
V2—所用染料溶液的体积(mL)。
17.2.2.4 操作步骤
1. 样品处理：
(1) 新鲜果蔬样品：称取鲜样50.0~100.0g，放入组织捣碎机的杯中，加入等重量的20 g·L1草酸浸提剂，快速捣碎1min，将样品打成浆状。样品处理的整个过程应在10min中内完成，以免Vc被空气氧化。用小烧杯称取浆状物10~30.×g(含还原型Vc 1~5mg)，放入100mL容量瓶中，用20 g·L-1草酸溶液定容，若有泡沫可加2滴辛醇除去。过滤，若滤液深，影响滴定终点的判定时，可加1~2勺白陶土脱(注5)不易过滤，可用离心机分离。
(2) 多汁果蔬样品：可用纱布压汁后脱脂棉花快速过滤，量取10~20mL汁液，立即用20 g·l-1草酸溶液定容至100mL。
(3) 干样品：称取1~4.×××g(含还原型Vc 1~5mg)放入研钵中，加入20 g·L-1草酸溶液研磨成浆状液，洗入100mL容量瓶中，用2 0g·L-1草酸定容。
(4) 含有还原性物质的样品：含有较多Fe2+的样品可用80mL ·L-1醋酸代替20 g·L-1抗坏血酸过氧化物酶草酸作
为浸提剂。亚硫化脱水样品，可于稀释至一定容量之前加入20mL丙酮，以除去SO2的干扰。
2. 样品的测定：吸取以上制得的无滤液5.00~10.00mL(使含VC约0.2~1mg范围)放入50mL三角瓶中，用棕半微量滴定管中装的2,6-二氯靛酚标准溶液滴定至浅红，约在15s内不褪为终点(注6)。同时以浸提剂做空白试验(空白值约0.08~0.10mL)。
17.2.2.5 结果计算
还原型Vc含量 (mg·kg-1)=(V-V0)×1000×T / m
式中 V—滴定样品液所用染料溶液量(mL)；
V0—滴定空白所用去染料溶液量(mL)；
T—染料溶液的滴定度；
m—滴定时样品溶液中样品的质量(g)。
两次测定结果允许误差：
样品还原型Vc含量，mg·kg-1 允许误差，mg·kg-1
<100 5.0
100~1000 10.0
17.2.2.6注释
注1. 偏磷酸是Vc的最佳稳定剂，且具有沉淀蛋白质的作用。但其价格较贵，在室温下放置易转化为正磷酸，降低对Vc的稳定性。草酸廉价易得，有与磷酸相近的稳定性。而醋酸适于浸提含有Fe2+的样品。
注2. 草酸不应置于日光下，以免产生过氧化物。当有催化剂(如Cu2+)存在时，过氧化物能破坏Vc。
注3. KIO3与还原Vc的主要反应如下：
IO3- + 5I- + 6H+ ===== 3I2 + 3H2O
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议