山东农业科学 2009,1:55~57Shandong Agricu ltural Sc iences
收稿日期:2008-09-18
基金项目：山东省三0工程项目(2003-108)部分研究内容。
作者简介：孙 静(1972-)，女，讲师，山东农业大学在读硕士研究生，研究方向：生物化学与分子生物学;E-m ai:l l w sj 683@1631co m
及蛋白质含量的影响
孙 静
(莱芜职业技术学院生物化学教研室，山东莱芜 271100)
摘 要：试验结果表明，离体小麦叶片在暗处过氧化物酶活性升高,2d 达到最大值，以后缓慢下降。而经N aC l 处理后小麦离体叶片中过氧化物酶活性降低。对过氧化物酶同工酶谱的分析结果显示,N aC l 处理1d 时，出现一条弱带(POD 2)，随后即消失;POD 1带随时间延长着变浅，也逐渐消失。总趋势与其活性变化一致。对蛋白质含量的分析结果表明，盐胁迫处理导致离体叶片中的蛋白质含量降低。
关键词:N aC ;l 过氧化物酶；小麦离体叶片；蛋白质
中图分类号:S51211+10133 文献标识号:A 文章编号:1001-4942(2009)01-0055-03
Effects of NaCl on Peroxi dase Activity and Protei n Conte nt of
DetachedW heat Leaves
SUN Jing
(B ioche m istry S t aff Room,Lai wu Vocati onal T echnology Institute ,Lai wu 271000,China)
Abst ract The experi m ental resu lts sho w ed that the perox idase acti v ity increased firstly and ca m e to the m ax i m um on the second day and then decli n ed stead il y i n t h e detached w heat leaves in dar kness .The perox-i dase acti v ity of the detached leaves decreased after treated by N a C.l The ana l y sis on the perox i d ase isozy m e patterns sho w ed that one w eak band (POD2)appeared after treated by N a C l for one day ,but then d isap -peared ;the i n tensity of POD1band decreased and it d isappeared at last w ith the pr o long ing o f ti m e .The changes of bands w ere i n accord w it h the perox idase activ ity .N a C l treat m ent a lso decreased the prote i n con -tent i n the detached wheat leaves .
K ey w ords N a C ;l Perox i d ase ;Detached w heat leaves ;Prote i n 小麦是山东省的重要农作物，东营、滨洲一带的小麦生产常年遭受盐害。盐害是影响世界农作物产量的主要因素
[1]
。过氧化物酶(P OD )是一
种对环境条件十分敏感的氧化酶类，其活性和同功酶谱的变化能在一定程度上反映植物抗盐性的强弱。植物受到盐胁迫时，植物组织中的蛋白质也发生变化
[2]
。各国科学家对植物抗盐机理进
行了许多研究[3,4]
，但关于盐胁迫后小麦离体叶
片中过氧化物酶活性和蛋白质含量变化的研究尚
未见报道。
本试验对盐处理小麦离体叶中过氧化物酶
(POD )活性以及蛋白质含量进行分析，以期为研究植物耐盐机理提供参考。
1 材料与方法
111 材料处理
小麦(Triticum aestivum L 1)品种P H 82-2-2，由山东农业大学生化与分子生物学实验室提供。选取成熟饱满种子，在25e 条件下以蒸馏水浸至露白后播种于具纱网的搪瓷盘中水培，置于温度(25?1)e ，光照
12h ，光强
150L E /(m 2
#s)，相对湿度80%的光照培养箱
中。培养10d后，取叶片中部2/3段切成015c m 的小段，准确称取012g若干份，分别悬浮于012 m o l/L的N a C l溶液中，对照为蒸馏水,25e暗培养，每24h取样测定一次。
112样品的制备
分别取对照和处理加入提取液(011m o l/L Tris-HC,l p H810)112m l，冰浴研磨成匀浆后, 4e、10000r/m i n离心15m i n，取上清,4e冰箱放置备用。
113POD活性测定
参照陈炜等[5]方法，稍有改动，于420nm测其吸光值。
114POD同工酶分析
采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法[6]。分离胶的浓度为715%，浓缩胶为3%，稳压，电流10mA左右，进入分离胶后，加大电流至20~30 mA，电泳5~6h，待溴酚蓝离底板115c m时，关闭电源，用抗坏血酸-联苯胺染，所得结果用Tannon凝胶成像系统进行拍照。
115蛋白质分析
采用SDS-PAGE法,5%的浓缩胶,1215%分离胶,pH813的电极缓冲系统(0103m o l/L Tris -甘氨酸,1%SDS)，考马斯亮蓝R250染(40%甲醇,10%乙酸,015%考马斯亮蓝)，染2h, 7%冰醋酸脱至条带清晰，所得结果用Tannon 凝胶成像系统进行拍照。
2结果与分析
211盐胁迫小麦离体叶片POD活性的变化由图1可见，对照叶片过氧化物酶活性随时间延长而迅速上升,2d时，上升到最大(为开始的115%)。以后略有下降，这种下降可能是因为衰老至一定时间后，植物体内蛋白质合成能力丧失[7]，过氧化物酶失活或降解加快。而N a C l处理
叶片1d时过氧化物酶活性明显高于对照(
为对
图1盐胁迫对小麦离体叶片POD活性的影响照的118%)，以后随时间延长，过氧化物酶活性逐渐降低，而且低于对照,3d时为开始的8719%。这说明长期NaC l胁迫能抑制小麦离体叶内过氧化物酶的活性，或者阻止过氧化物酶的合成。212盐胁迫处理后小麦离体叶片POD同工酶的变化
从同工酶图谱(图2)中可看出，对照的整个过氧化物酶同工酶谱带数无变化，共有3条带(POD1、POD3、POD4)，但谱带强弱有变化,2d时POD3条带变宽，着加深，表明此时酶活性最大，以后随时间延长条带着变浅。与对照相比，盐胁迫处理1d后出现一条弱带(POD2)，但随时间延长这条弱带消失，并且POD1带着变浅直至消失。这一结果与过氧化物酶总活性变化一
致。
W：水对照;N:NaC l处理;1、2、3、4分别代表1、2、3、4d 图2离体小麦叶片过氧化物酶电泳图谱
213盐胁迫处理后小麦离体叶片蛋白质含量的变化
小麦离体叶片经盐胁迫处理后蛋白质含量的变化与POD同工酶变化趋势基本一致，表现为对照2d时蛋白质含量增加，即相同分子量谱带着变深,2d后相同分子量谱带着明显变浅。盐胁迫后蛋白质含量减少，即相同分子量谱带变窄，着明显变浅(图3)
。
W：水对照;N:NaC l处理;1、2、4分别代表1、2、4d 图3离体小麦叶片蛋白质SDS-PAGE电泳图谱
3结论与讨论
本试验结果表明,N a C l处理可提高小麦离体叶片的POD活性，但随处理时间的延长,POD活性迅速下降。
56山东农业科学2009年
POD 同工酶是一种对外界不良环境条件反应十分敏感的酶。对其酶谱的分析结果表明,N a C l 处理后，小麦离体叶片中先诱导出一条POD2带，后POD2、POD1均消失，这说明N a C l 胁迫初期，小麦离体叶片可通过诱导POD 同工酶达到抵抗盐害的目的；但随胁迫时间的延长,POD 同工酶被抑制，酶活性降低。
蛋白质(包括酶蛋白)是基因表达的直接产物，是生物机体中参与一系列生理生化活动所必需的物质，而植物在受到盐胁迫时会产生各种不同的响应，因而会从代谢的不同层次和水平上作出相应的应答。本实验中盐处理后离体叶片中蛋白质含量减少，表明盐胁迫破坏了活性氧的产生与清除系统之间的平衡，导致植物细胞中积累大量的活性氧，从而对蛋白质等许多重要的细胞组分造成氧化损伤。参 考 文 献:
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5山东农业科学6征稿简则
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第1期 孙 静:N a C l 对小麦离体叶片过氧化物酶活性及蛋白质含量的影响
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