构建基因表达载体的步骤

构建基因表达载体的步骤
构建基因表达载体的主要步骤包括:表达载体构建
1.目的基因的获得:即使用限制性核酸内切酶切割质粒,露出黏性末端,再用同一种限制性核酸内切酶切割目的基因,使其产生相同的黏性末端。
2.载体和目的基因的限制性酶切:用相同的限制性酶酶切载体和目的基因,使它们产生相同的黏性末端。
3.连接转化:将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处,再使碱基互补配对结合,两个黏性末端吻合在一起,碱基之间形成氢键。
4.加入适量的DNA连接酶,催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键,从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来,形成一个重组DNA分子。

本文发布于:2024-09-20 21:25:04,感谢您对本站的认可!

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标签:基因   载体   黏性   目的   形成   碱基
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