用于预测帕金森病患者认知下降的标记物及其用途

1.本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于预测帕金森病患者认知下降的标记物及其用途。

背景技术：

2.帕金森病(parkinson's disease，pd)是常见的中老年神经系统退行性疾病，以静止性震颤、四肢肌肉强直或僵硬、动作迟缓、姿势平衡障碍这四大症状为显著特征。
3.帕金森病的症状主要包括影响运动的症状(运动症状)和与运动无关的症状(非运动症状)。帕金森病的运动症状主要包括：静止性震颤(即静止时发生的振动或颤抖)、肌强直、运动迟缓、姿势步态障碍等。认知下降及痴呆是帕金森病患者常见的非运动症状，其可严重影响患者的生活质量，增加照料者负担。
4.目前国内外研究发现了一些可能预测帕金森病患者痴呆风险的脑脊液生物标志物，其中阿尔兹海默症相关的病理蛋白，包括脑脊液磷酸化tau蛋白(p-tau181)、脑脊液β淀粉样蛋白(aβ42)及二者的比值均被证实具有预测帕金森病认知下降的潜力。但由于腰椎穿刺是一种有创性检查，导致脑脊液获取困难。因此寻便于获取的血液学生物标志物迫切而重要。
5.鉴于此，申请此专利。

技术实现要素：

6.为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种用于预测帕金森病患者认知下降的标记物及其用途，解决腰椎穿刺带来的诸多问题，到一种快捷且有效的预测帕金森病认知下降的血液学生物标志物及制成的试剂盒。
7.本发明的目的是提供一种用于预测帕金森病患者认知下降的标记物及用途。
8.本发明的再一目的是提供一种用于预测帕金森病患者认知下降的试剂盒。
9.根据本发明的具体实施方式的用于预测帕金森病患者认知下降的血液学生物标志物，所述血液学生物标志物为血浆p-tau181。
10.进一步的，将血液学生物标志物的血浆p-tau181用于制备预测帕金森病患者认知下降情况的试剂盒。
11.根据本发明的具体实施方式的用于预测帕金森病患者认知下降的组合物，所述组合物包含用于检测血浆p-tau181表达水平的物质。
12.组合物包括生物素(biotin)修饰的p-tau181检测抗体(detector)，链酶亲和素修饰的酶(sbg,streptavidin-galactosidase)、带荧光标签的底物(rgp,resorufin-d-galactopyranoside)，以及样本稀释液(sample diluent)。
13.本发明采用simoa技术检验的血浆里的p-tau181的浓度。
14.更进一步的，血浆样本中的p-tau181蛋白检测使用杭州晶佰生物技术有限公司的全自动simoa hd-x平台(美国quanterix公司)完成，检测流程均参照仪器使用说明进行。
15.根据本发明的具体实施方式的用于预测帕金森病患者认知下降的试剂盒，所述试剂盒能够测定血浆p-tau181的表达水平。
16.进一步的，试剂盒包括包括表面已经包被p-tau181特异性捕获抗体的磁珠，生物素修饰的p-tau181检测抗体，链酶亲和素修饰的酶、带荧光标签的底物。
17.进一步的，所述用于预测帕金森病患者认知下降的试剂盒包含血浆p-tau181的引物和探针。
18.根据本发明的具体实施方式的预测抗帕金森症药物疗效的生物标记物检测试剂盒，所述试剂盒能够测定血浆p-tau181的表达水平。
19.进一步的，所述预测抗帕金森症药物疗效的生物标记物检测试剂盒包含血浆p-tau181的引物和探针。
20.根据本发明的具体实施方式的用于预测帕金森病患者认知下降的评估系统，所述评估系统包括检测模块和计算模块，所述计算模块的计算公式为血浆p-tau181；所述评估系统用于预测帕金森病患者认知下降情况。
21.本发明致力于寻可代替脑脊液的可预测帕金森病患者认知下降的血液学生物标志物，发明人收集了大样本的帕金森病患者及年龄性别等相匹配的健康对照者外周血，使用超敏单分子阵列(simoa)技术检测了所有参与者的血浆p-tau181、aβ40和aβ42水平，以及apoe基因型，并对患者进行了一年一次的长期随访(最长随访时间5年)，每次随访对患者的认知功能进行评分。使用线性混合模型进行统计分析，结果显示，基线的血浆p-tau181水平能预测帕金森病患者的长期认知功能下降。
22.本发明与现有技术相比，有益效果为：
23.(1)本发明通过184例帕金森病患者及年龄性别等相匹配的100例健康对照者进行监测，发现预测帕金森病患者的认知功能下降情况，可以采用血浆p-tau181这个标记物，可以较好的预测帕金森病患者的认知功能下降情况；相比于此前的脑脊液p-tau181，获取更加容易，创伤性更小。
24.(2)本发明的试剂盒可以预测帕金森病患者的认知功能下降情况。
25.(3)通过后续验证试验结果显示：基线高p-tau181水平(》1.472pg/ml)患者相较于基线低p-tau181水平(《1.472pg/ml)患者认知分数下降更快(β-0.274[-0.395
–‑
0.153],p＝0.023)，说明：基线血浆p-tau181水平可作为预测帕金森病患者认知下降的血液学生物标志物。
附图说明
[0026]
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0027]
图1比较血浆p-tau181、aβ40、aβ42水平；
[0028]
图2为基线p-tau181水平的高低对认知下降速度的预测。
具体实施方式
[0029]
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
[0030]
在一些较为具体的实施例中，用于预测帕金森病患者认知下降的血液学生物标志物为血浆p-tau181水平。
[0031]
进一步的，将血液学生物标志物的血浆p-tau181和用于制备预测帕金森病患者认知下降情况的试剂盒。
[0032]
用于预测帕金森病患者认知下降的组合物，所述组合物包含用于检测血浆p-tau181表达水平的物质。
[0033]
所述组合物包括生物素(biotin)修饰的p-tau181检测抗体(detector)，链酶亲和素修饰的酶(sbg,streptavidin-galactosidase)、带荧光标签的底物(rgp,resorufin-d-galactopyranoside)，以及样本稀释液(sample diluent)。
[0034]
用于预测帕金森病患者认知下降的试剂盒，所述试剂盒能够测定血浆p-tau181的表达水平。
[0035]
进一步的，所述试剂盒包括表面已经包被p-tau181特异性捕获抗体的磁珠(capture bead)，生物素(biotin)修饰的p-tau181检测抗体(detector)，链酶亲和素修饰的酶(sbg,streptavidin-galactosidase)、带荧光标签的底物(rgp,resorufin-d-galactopyranoside)，以及样本稀释液(sample diluent)。
[0036]
预测抗帕金森症药物疗效的生物标记物检测试剂盒，所述试剂盒能够测定血浆p-tau181的表达水平。
[0037]
实施例1
[0038]
本实施例提供了一种用于预测帕金森病患者认知下降的标记物，筛选方法如下：
[0039]
1)基线纳入184例帕金森病患者及年龄性别等相匹配的100例健康对照者，采集患者性别、年龄、受教育年限等人口学特征及病程等临床特征，使用蒙特利尔认知评估量表(moca)评估患者的认知功能。并使用simoa技术检测患者及健康对照的血浆p-tau181、aβ40和aβ42水平。
[0040]
2)对纳入的帕金森病患者进行每年一次的随访，每次随访时重新评估患者的moca分数，监测患者认知功能变化情况。并于第一年和第二年随访时再次测量患者的血浆p-tau181、aβ40和aβ42水平。纳入患者最长随访时间5年。
[0041]
3)使用friedman检验比较血浆p-tau181、aβ40和aβ42水平以及aβ42/aβ40和p-tau181/aβ42比值在两年随访期间(共三次重复测量)的变化趋势，结果显示：帕金森病患者p-tau181水平及p-tau181/aβ42比值随病程进展逐年增加，而aβ40和aβ42水平逐年下降(图1)；
[0042]
4)使用线性混合模型分析基线各指标是否能预测之后的认知下降：以重复测量的moca分数作为因变量，自变量中的固定效应包括基线的各指标水平(转化为二分类变量：以中位数作为截断值)、随访时间、基线各指标水平*随访时间的交互项、以及校正的协变量(包括性别、基线年龄、受教育年限、基线病程、基线moca分数)。自变量中的随机效应包括个
体的截距。以基线各指标水平*随访时间的交互项反映基线p-tau181/aβ42比值对moca分数变化率的影响，即对认知下降速度的预测。
[0043]
结果显示：基线高p-tau181水平(》1.472pg/ml)患者相较于基线低p-tau181水平(《1.472pg/ml)患者认知分数下降更快(β-0.274[-0.395
–‑
0.153],p＝0.023)(如图2所示)，即基线血浆p-tau181水平可作为预测帕金森病患者认知下降的血液学生物标志物。
[0044]
实施例2
[0045]
将血液学生物标志物的血浆p-tau181用于制备预测帕金森病患者认知下降情况的试剂盒。检测血浆p-tau181，基线高p-tau181水平(》1.472pg/ml)患者相较于基线低p-tau181水平(《1.472pg/ml)患者认知分数下降更快。
[0046]
用于预测帕金森病患者认知下降的组合物，所述组合物包含用于检测血浆p-tau181表达水平的物质。
[0047]
本实施例中血浆样本中的p-tau181蛋白检测使用杭州晶佰生物技术有限公司的全自动simoa hd-x平台(美国quanterix公司)以及来源于quanterix公司的商品化nfl检测试剂盒(simoa p-tau181 advantage v2 kit,#103714)完成，检测流程均参照仪器以及试剂盒使用说明进行。
[0048]
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

技术特征：

1.一种用于预测帕金森病患者认知下降的血液学生物标志物，其特征在于，所述血液学生物标志物为血浆p-tau181。2.一种用于预测帕金森病患者认知下降的血液学生物标志物的用途，其特征在于，将血液学生物标志物的血浆p-tau181用于制备预测帕金森病患者认知下降情况的试剂盒。3.一种用于预测帕金森病患者认知下降的组合物，其特征在于，所述组合物包含用于检测血浆p-tau181表达水平的物质。4.一种用于预测帕金森病患者认知下降的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒能够测定血浆p-tau181的表达水平。5.一种预测抗帕金森症药物疗效的生物标记物检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒能够测定血浆p-tau181的表达水平。6.一种用于预测帕金森病患者认知下降的评估系统，其特征在于，所述评估系统包括检测模块，所述检测模块为测定血浆p-tau181的表达水平；所述评估系统用于预测帕金森病患者认知下降情况。

技术总结

本发明涉及一种用于预测帕金森病患者认知下降的标记物及其用途，用于预测帕金森病患者认知下降的血液学生物标志物为血浆p-tau181。用于预测帕金森病患者认知下降的试剂盒，能够测定血浆p-tau181的表达水平。本发明通过184例帕金森病患者及年龄性别等相匹配的100例健康对照者进行监测，发现预测帕金森病患者的认知功能下降情况，可以采用血浆p-tau181，可以很好的预测帕金森病患者的认知功能下降情况；相比于此前的脑脊液p-tau181，获取更加容易，创伤性更小。创伤性更小。创伤性更小。