miRNA研究思路

Promega Technology——

miRNA/siRNA靶标研究工具

萤光素酶报告基因：

✓检测蛋白：miRNA与靶标mRNA结合后，mRNA可能不被降解，但蛋白翻译受抑制，用PCR法检测mRNA无变化，但萤光素酶报告基因检测萤光素酶蛋白的产生，更加准确反映miRNA作用机制

✓细胞无内源性萤光素酶活性：无细胞内源性酶活性干扰

✓灵敏：最低检测至10-20 mole or ~6000 个萤光素酶分子

✓线性范围宽：108个数量级

✓操作简便：5分钟完成细胞裂解、样品制备和检测，同一样品中可检测萤火虫和海肾萤光素酶双报告基因

✓结果量化：化学发光法检测，发光仪读数直接得到量化结果

Cat.#载体骨架转染方式

萤光素酶启动子萤光素酶启动子

C8021psiCHECK-2pGL3hRluc (海肾)SV40 hluc+ (萤火虫)TK瞬时转染

单报告基因载体：（需共转染萤火虫萤光素酶载体E1741或E6681做内参）

Cat.#载体靶标报告基因启动子转染方式

C8011psiCHECK-1hRluc (海肾萤光素酶) SV40 瞬时转染

研究思路一：（明确miRNA结合位点，研究细胞内源性miRNA活性）

miRNA研究举例一

miRNA研究举例二

miRNA研究举例三

研究思路二:（高通量筛选有效的siRNA）

miRNA研究文献（更多研究文献可用psiCHECK或pmirGlo为关键词在Highware检索得到）：

1.BRCA1 regulates microRNA biogenesis via the DROSHA microprocessor complex. Shinji Kawai et al, 2012, J. Cell Biol

volume 197: 201

2.Sperm-borne microRNA-34c is required for the first cleavage division in mouse. Wei-Min Liu et al., 2012, PNAS, volume

109: 490

siRNA/dsRNA应用文献：

1.Loss of human Greatwall results in G2 arrest and multiple mitotic defects due to deregulation of the cyclin B-Cdc2/PP2A

pgl3balance. Andrew Burgess, et al., 2010, PNAS, 107, 12564–12569

2.The SoxC protein SEM-2 opposes differentiation factors to promote a proliferative blast cell fate in the postembryonic

mesoderm. Chenxi Tian, et al., 2011, Development 138, 1033-1043

shRNA应用文献：

1.RIAM Regulates the Cytoskeletal Distribution and Activation of PLC-1 in T Cells. Nikolaos Patsoukis et al, 2009, Sci.

Signal., volume 2: ra79

2.AS160 Modulates Aldosterone-stimulated Epithelial Sodium Channel Forward Trafficking. Xiubin Liang et al, 2010, Mol.

Biol. Cell., volume 21: 2024