设计理念
pgl3
在检测一个报告基因测量结果的变化时，实验的准确性常被一些客观实验因素影响， 如： 细胞数目不均一、细胞代次不统一、转染效率不一致等等。引入一个内参报告基因，
以此来标定检测用报告基因的测量结果，从而达到有效地减少实验误差的目的。
系统工作原理
双荧光素酶报告系统包括两个报告基因，一个检测用报告基因 A 与一个内参用报告
基因 B。一般是将检测用报告基因 A 序列与调控启动子序列偶连在一起， 或将报告基因
A 序列与待检序列串联，报告基因 A 荧光强度的相对改变与偶联的调控启动子的活性或
待检序列的改变相关。内参用报告基因 B 与一个组成型启动子偶联，这个启动子不受各
种实验条件变化的干扰，所以报告基因 B 的荧光为组成型表达，可以作为内参。
检测用报告基因 A、内参用报告基因 B 可以装在不同的载体上，共同转染细胞， 通
过这种方法，把可能削弱实验准确性的内在因素的变化降到最小。有的载体上同时含有检
测用报告基因 A 和内参用报告基因 B，这样使实验操作更加准确、简便、快捷。
常用载体（Promega ）
实验用报告基因：
pGL3 Luciferase Reporter Vectors （pGL3-Control Vector 、 pGL3-Basic Vector 、pGL3-
Promoter Vector、pGL3-Enhancer Vector）；
psiCHECK TM Vector（psiCHECK TM -1 Vector、psiCHECK TM -2 Vector*）；pmirGLO
Vector*。
内参用报告基因（组成型表达海肾荧光素酶）：pRL-TK；pRL-SV40；pRL-CMV；
pRL-Null。
注：psiCHECK TM -2 Vector*、pmirGLO Vector* 同时表达萤火虫荧光素酶（Firefly Lucifera se ）及海肾荧光素酶（Renilla Lucifera s e），故无需准备对照 pRL 系列内参质粒，可直接进行下游双荧光素酶检测实验。
系统检测方法
1. 用适量 Passive Lysis Buffer 裂解；
2. 将一份裂解物与萤火虫检测试剂 II（LAR II）混合，即启动萤火虫荧光素酶报告基
因检测；
3. 萤火虫荧光素酶报告基因检测一旦结束，立刻向样品试管中加入 Stop&GloTM 试剂，这个试剂可即刻淬灭萤火虫荧光素酶荧光并同时激发海肾荧光素荧光。
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