朱全刚;张迪;周芷筠;潘勇华;尤本明;刘继勇;高申
【摘 要】目的 制备盐酸罗哌卡因温敏凝胶注射剂,并建立其含量测定方法.方法 采用泊洛沙姆作为温敏材料,以冷法制备,利用反相高效液相谱法测定其中药物的含量.结果 温敏凝胶注射剂中辅料泊洛沙姆P407与P188的质量比为28∶1,盐酸罗哌卡因含量为2％,相变温度为37℃.盐酸罗哌卡因在2.03 ～ 48.72 μg/ml范围内线性关系良好(r=0.999 8),精密度和重复性良好,低、中、高浓度盐酸罗哌卡因的回收率分别为(99.58±0.20)％、(97.80±0.35)％、(103.60±0.63)％,n=3,3批样品中盐酸罗哌卡因的平均含量分别为标示量的(98.92±0.35)％、(99.18±0.38)％、(98.72±0.62)％,n=3.结论 采用泊洛沙姆为基质制备的盐酸罗哌卡因温敏凝胶注射剂质量可控,是一种很有开发前景的新型止痛剂.
【期刊名称】《药学实践杂志》
【年(卷),期】2013(031)005
【总页数】3页(P366-367,383)
卡因是什么制成的【关键词】盐酸罗哌卡因;泊洛沙姆;温敏凝胶;含量测定
【作 者】朱全刚;张迪;周芷筠;潘勇华;尤本明;刘继勇;高申
【作者单位】上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院药剂科,上海200437;第二军医大学长海医院药学部,上海200433;第二军医大学长海医院药学部,上海200433;第二军医大学长海医院药学部,上海200433;第二军医大学长海医院药学部,上海200433;第二军医大学长海医院药学部,上海200433;第二军医大学长海医院药学部,上海200433;第二军医大学长海医院药学部,上海200433 【正文语种】中 文
【中图分类】R971+.2
盐酸罗哌卡因(ropivacaine hydrochloride)是一种新型酰胺类长效局麻药，具有作用持续时间长、心脏毒性低微、感觉-运动阻滞分离等优点，特别适用于心脏外科手术及术后镇痛，能够避免布比卡因等常用局麻药诱发的心脏聚停现象[1]，因此研制盐酸罗哌卡因的缓释长效注射剂对于心脏外科手术镇痛具有重要的临床意义。温敏凝胶注射剂(thermosensitive g
el injection)是一种环境敏感型智能凝胶注射剂，在室温下为溶液状态，而在体温环境下能发生相转变形成半固体凝胶，具有良好的缓、控释性能及用药顺应性。泊洛沙姆(poloxamer)为聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物，是目前最常用的一类温敏凝胶材料[2]。笔者采用泊洛沙姆作为温敏材料，以冷法制备温敏凝胶注射剂，并建立了盐酸罗哌卡因含量测定的反相高效液相谱方法。
1.1 仪器 LC-10ADVP高效液相谱仪，包括LC-10AT泵、SPD-10A紫外检测器、CLASS vp谱工作站和SCL-10Avp系统控制器(日本岛津制作所)；DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市英峪予华仪器厂)；HANGPING FA2004电子天平(上海天平仪器厂)；DL-720A超声波清洗器(上海之信仪器有限公司)；PHS-3TC精密酸度计(上海天达仪器有限公司)；TGL-16B型高速离心机(上海安亭科学仪器厂)。
1.2 药品和试剂 盐酸罗哌卡因(含量99.5%，山东铂源化学有限公司)；盐酸利多卡因(含量99.7%，江苏济川制药有限公司)；泊洛沙姆(poloxamer,P188、P407，德国BASF公司)；乙腈(谱纯，美国Tedia公司)；蒸馏水(长海医院制剂室自制)；其他试剂均为分析纯。
2.1 处方和制备工艺 采用转子法测定胶凝温度[3] 。通过预实验确定本研究中盐酸罗哌卡因
温敏凝胶的处方为：盐酸罗哌卡因2%，泊洛沙姆(P407) 14%，泊洛沙姆(P188)0.5%。按处方比例将泊洛沙姆P407、P188及盐酸罗哌卡因溶于适量蒸馏水中，搅拌均匀，置于4 ℃冰箱中保存直至完全溶解成澄明溶液，取出，加水至全量，分装，121 ℃热压灭菌20 min[4]，即得胶凝温度为37 ℃的盐酸罗哌卡因温敏凝胶注射剂。
2.2 含量测定
2.2.1 溶液的配制 ①储备液的配制：精密称取盐酸利多卡因50.00 mg、盐酸罗哌卡因20.30 mg分别置于100 ml容量瓶中，加适量蒸馏水超声溶解，定容，分别制得500 μg/ml的盐酸利多卡因储备液及203 μg/ml的盐酸罗哌卡因储备液。②样品溶液的配制：取凝胶样品1 g置于100 ml容量瓶中，加适量蒸馏水超声溶解，定容；取1 ml置于10 ml容量瓶中，加入1 ml盐酸利多卡因储备液，再加蒸馏水定容，即得。③阴性对照溶液的配制：按处方比例和制备工艺制备不含盐酸罗哌卡因的空白凝胶，按样品溶液的配制方法制得阴性对照溶液。
2.2.2 谱条件与系统适应性试验 谱柱：Athena C18-WP谱柱(4.6 mm×200 mm，5 μm，上海安普科学仪器有限公司)；流动相：乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钠-三乙胺(48:52:0.15)，内含0.015 mol/ L十二烷基硫酸钠(SDS)，用磷酸调节pH值至3.15；检测波
长220 nm；流速1.0 ml/min；进样量：20 μl；柱温：室温。在该谱条件下，内标盐酸利多卡因与盐酸罗哌卡因能够完全分离，保留时间分别为盐酸利多卡因6.5 min、盐酸罗哌卡因10.0 min，辅料对二种成分测定均不产生干扰，且峰形好，无拖尾(见图1)。
2.2.3 标准曲线的制备 分别精密量取“2.2.1”项下的盐酸罗哌卡因储备液0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、2.0、2.4 ml至于10 ml容量瓶中，再分别加入“2.2.1”项下的盐酸利多卡因储备液1.0 ml，用蒸馏水稀释定容，得到系列浓度分别为2.03、4.06、8.12、16.24、32.48、40.60、48.72 μg/ml 的标准溶液。按“2.2.2”项下谱条件依次进样，测定峰面积。以盐酸罗哌卡因峰面积与内标盐酸利多卡因峰面积的比值Y与盐酸罗哌卡因浓度C作线性回归，得标准曲线方程：Y=0.019 2C+0.021 3(r=0.999 8)，线性范围为2.03～48.72 μg/ml。
2.2.4 精密度试验 ①日内精密度：分别配制低、中、高3种浓度(16.24、24.36、32.48 μg/ml)的盐酸罗哌卡因标准溶液，按“2.2.2”项下谱条件各重复进样3次，进样间隔时间4 h，记录峰面积，计算得到低、中、高3种浓度盐酸罗哌卡因的日内RSD分别为0.62%、1.35%和1.03%，n=3。②日间精密度：取低、中、高3种浓度(16.24、24.36、32.48 μg/ml)的盐酸罗哌卡因标准溶液各20 μl，每天测定1次，连续测定3 d，记录峰面积，计算
得到低、中、高3种浓度盐酸罗哌卡因的日间RSD分别为1.82%、1.25%和2.04%，n=3。结果表明，日内精密度与日间精密度均良好。
2.2.5 回收率试验 按照“2.1”项下的方法制备空白凝胶，精密称取空白凝胶1 g置于100 ml容量瓶，分别精密加入15.98、20.01、24.01 mg盐酸罗哌卡因，加水定容制成低、中、高3种浓度(159.8、200.1、240.1 μg/ml)的溶液；取1 ml溶液置于10 ml容量瓶，再分别加入“2.2.1”项下的盐酸利多卡因储备液1.0 ml，用蒸馏水稀释定容；按“2.2.2”项下谱条件进样测定峰面积，计算得低、中、高3种浓度盐酸罗哌卡因的加样回收率分别为(99.58±0.20)%、(97.80±0.35)%、(103.60±0.63)%，n=3。结果表明，该方法准确度高。
2.2.6 重复性实验 取盐酸罗哌卡因温敏凝胶注射剂6份，按“2.2.1”项下(2)制备样品溶液，测定峰面积，计算得到RSD为0.36%，n=6，表明该方法重复性良好。
2.2.7 含量测定 取3批盐酸罗哌卡因温敏凝胶注射剂样品(规格20 mg/g，批号分别为120601、120602、120603)，按“2.2.1”项下(2)的处理方法制备成样品溶液，按“2.2.2”项下谱条件测定峰面积。根据内标法标准曲线方程计算得3批样品中盐酸罗哌卡因的平均含量分别为标示量的(98.92±0.35)%、(99.18±0.38)%、(98.72±0.62)%，n=3，均在标示量的95
%～105%之间，符合含量测定要求。
温敏凝胶在室温下是流动性液体，易于保存，使用方便；在达到人体正常温度时发生相变形成半固体凝胶，从而实现缓慢释药的目的。因此，相变温度是温敏凝胶最重要的指标之一，若相变温度过低，则保存不易，且注射时不方便；若相变温度过高，则在人体中无法形成半固体凝胶，就没有足够的缓释作用，还会造成局部药物浓度过大。盐酸罗哌卡因能溶于水，但其在温敏凝胶中的含量受凝胶的辅料用量影响较大，本法制备的温敏凝胶中盐酸罗哌卡因含量已接近其最大溶解量，而盐酸罗哌卡因的加入对该温敏凝胶的相变温度影响不大。盐酸罗哌卡因温敏凝胶注射剂能够在体温37 ℃情况下形成半固体凝胶，从而维持较长时间的有效药物浓度，但其在体内的具体缓释时间有待进一步验证，可望给心脏外科手术的术后止痛等提供一种新的缓释注射剂。
HPLC流动相对于内标物质和待测物质的出峰时间、峰形和分离度等有很大的影响。本实验参考陆松伟等[5]研究采用乙腈-0.02 mol/ L磷酸二氢钠-三乙胺(48:52:0.15)为流动相，用磷酸调节pH至3.15，内含0.015 mol/L十二烷基硫酸钠(SDS)作为离子对试剂，不仅延长了药物在非极性固定相中的保留时间，而且减少了谱峰的拖尾现象，改善了谱分离的效果。
盐酸罗哌卡因在pH 6.0以上难溶，在碱性溶液中会产生沉淀，因此利用磷酸调节合适的pH非常重要。笔者所建立的HPLC法，专属性高，线性关系良好，回收率、精密度、重复性均符合要求，可用于盐酸罗哌卡因温敏凝胶注射剂的质量控制。
【相关文献】
[1] Akoglu E, Akkurt BC，Inanoglu K，et al． Ropivacaine compared to bupivacaine for post-tonsillectomy pain relief in children: A randomized controlled study[J].In J Pediatr Otorhinolaryngol，2006，70(7)：1169．
[2] 顼佳音, 杨洪军, 熊 欣, 等. 常见温度敏感型原位凝胶载体的研究进展[J]. 中国实验方剂学杂志, 2011，17(2) :252.
[3] Seo HJ，Kim JC．Effects of additives on phase transitions of Poloxamer 407/Poloxamer 188 mixture and release property of monoolein cubic phase containing the poloxamers[J].J Ind Eng Chem，2012，18(1)：88.
[4] 陈 钢，侯世祥，秦凌浩. 动态流变实验评价温敏凝胶的方法研究[J].中国药学杂志，200
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