四个阶段：
一、以导致遗传病的基因突变位点为靶标，以DNA分子杂交为核心 三、以生物芯片为核心
四、以DNA测序技术为核心
广义：分子标志物包括基因组DNA、各种RNA、蛋白质和各种代谢物
基因组DNA是临床分子生物学检验中最常用的分子靶标
病原生物基因1。菌种鉴定：PCR—测序和PCR—DNA探针杂交;缩短检测时间 2。确定病毒感染和病毒载量:明确感染源,判断病情,监测疗效
3.病毒分析:基因型变异产生不同临床症状
4。细菌耐药监测和分子流行病学调查 :随机扩增多态性DNA；指导选择方案，控制病原菌的感染传播
基因变异1。致病基因的分子缺陷 2.线粒体基因突 3。肿瘤相关基因
单基因病1。致病基因结构发生了改变，影响了编码产物量和质的改变，如血红蛋白病、血友病、Duchenne肌营养不良等。
2。致病基因中核苷酸三联体重复序列发生高度扩展，如脆性X综合征、亨廷顿病、强直性肌营养不良等。
基因多态性用于：1.基因定位和疾病相关性分析2。疾病诊断和遗传咨询3。多基因病的研究4。器官移植配型和个体识别
循环游离核酸检测（包括游离DNA和游离RNA）用于：产前诊断、恶性肿瘤早期诊断、病例检测
临床分子生物学检验技术以分子杂交技术、PCR技术和DNA测序技术、芯片技术、双向电泳技术、生物信息学技术为主要技术
分子生物学检验技术可用于微生物感染的确诊、感染性病原体的分型、耐药监测。
分子生物学检验技术有利于临床上对遗传性疾病的早期预防、早期诊断、早期。
重要国际生物信息中心：1.美国国立生物技术信息中心（NCBI）2.欧洲生物信息学研究所(EBI） 3。日本国立遗传研究所(DDBJ）
一级核酸数据库有GenBank、EMBL和DDBJ；
蛋白质序列数据库有SWISS-PROT、PIR、UNIPROT等。蛋白质X射线晶体三维结构数据库有PDB等.
蛋白质数据库常用的有SWISS—PROT、 PIR、 PDB数据库。
二级数据库非常多，如人类基因组图谱库GDB、转录因子和结合位点库TRANSFAC、蛋白质结构家族库SCOP等。
＊*乙型肝炎病毒核酸的检测常用技术：1.普通PCR技术2.荧光定量PCR技术3. 支链DNA技术4. 核酸杂交技术5.杂交捕获系统6。基因芯片技术
**HBV基因分型的方法： 1，PCR—RFLP 2.PCR—RBD 3.ELISA 4。基因芯片
人乳头瘤病毒基因组结构 ： HPV DNA 为一双链闭环分子，基因组可分三个区段：早期区（E）、晚期区（L)、长控制区或上游调节区或非编码区。
＊＊＊HPV DNA检测及基因分型： 1.核酸杂交技术（主要包括核酸印迹、原位杂交、杂交捕获等技术.目前常采用HCⅡ 技术、核酸分子杂交与PCR相结合的方法。具有较强的特异性，并可分型） 2.PCR技术＊＊ (采用型特异性引物进行HPV快速分型,现已成为HPV感染最常用的检测方法之一。目前常用通用引物—PCR（GP—PCR）和实时定量PCR。1. GP—PCR，依据不同HPV亚型有共同保守序列的特点来设计通用引物,可广谱扩增HPV DNA，具有较高的敏感性，可检测出10—400拷贝的HPV病毒含量。在GP-PCR的基础上，建立了巢式PCR和巢式多重PCR检测HPVDNA。提高了检测敏感性和多重感染率。2。实时定量PCR法,该法可实现HPV DNA定量和快速检测。 现在市售产品可以检测E6和E7的mRNA;进行HPV16、18、31、33与45分型。检测灵敏度高，但设备昂贵,操作繁琐,不适于宫颈癌的大规模筛查。） 3.基因芯片技术(基因芯片可对HP
V进行分型和多重感染诊断,适于高通量HPV筛查 )4.流式荧光液芯技术 5。飞行时间质谱技术 临床意义：（一）宫颈疾病风险预测(二)疗效评估及术后跟踪（三）预防控制和疫苗研发
＊*HIV—1基因组中,gag、pol、env为结构基因,编码病毒核心蛋白(gag）、多聚酶(pol）、和外膜蛋白(env)。vpr、rev、vif、tat、vpu／vpx、nef等6个基因为调控基因,编码调控蛋白和辅助蛋白.
核酸序列依赖扩增（NASBA)是一种等温扩增RNA的技术， 能直接扩增单链RNA特异序列,通过合成cDNA，在等温条件下进行体外序列特异性核酸扩增。
NASBA需要AMV逆转录酶、核糖核酸酶H、噬菌体T7RNA聚合酶共同作用完成。NASBA分非循环相（模板RNA 与引物Ⅰ互补）和循环相（转录的反义RNA 与引物Ⅱ 互补)两个阶段
流行性感冒病毒核酸检测：主要有RT—PCR、实时荧光定量RT-PCR、基因芯片、逆转录-环介导等温扩增（RT-LAMP）等。
结核分枝杆菌核酸的检测： 1.PCR 2.Real-time PCR 3。 PCR—RFLP 4。 线性探针杂交
法（LPA) 5。链替代扩增技术（SDA） 6。扩增结核分枝杆菌直接试验(AMTDT） 7。基因芯片技术 8。GeneXpert全自动结合检测平台
结核分枝杆菌的耐药性检测：(1）DNA测序 (2)PCR—SSCP (3）PCR—RFLP (4)PCR—RDB （5）基因芯片技术 细胞芯片
淋病奈瑟菌核酸的检测: 1.PCR 2.实时荧光定量 PCR技术 3. 连接酶链反应 4.连替代扩增技术（SDA）
淋病奈瑟菌的主要耐药基因：(1）gyrA和parC基因 （2）pen A、ponA基因 （3）porB基因 （4）Mtr系统调控基因 （5）erm基因
淋病奈瑟菌耐药检测的分子生物学技术: （1)DNA测序 （2）PCR-SSCP （3）PCR-RFLP （4）基因芯片技术
＊医院细菌感染的常用分子生物学检验技术： 1.脉冲场凝胶电泳（PFGE)被认为是菌株分子分型的“金标准” 2。 PCR-RFLP 3.扩增限制性片段长度多态性分析 （AFLP) 4。 重复序列PCR 5. 随机扩增多态性DNA技术 6。 多位点测序分型
白假丝酵母菌的分子生物学检验： 1。PCR 普通PCR、实时PCR、巢式PCR和多重PCR等 2。 PCR—斑点杂交 3。 DNA指纹技术，包括RFLP、随即扩增多态性分析（RADP）、电泳核型分析等 4。 AP-PCR 5。DNA序列分析 6。基因芯片技术
新型隐球菌的分子生物学检验：1.PCR 2。 斑点杂交 3. PCR-RFLP
沙眼衣原体的分子生物学检验：1。PCR 2。 连接酶链反应 3。 DNA序列分析
肺炎衣原体的分子生物学检验：PCR、实时荧光定量PCR技术、巢式PCR和竞争性PCR
肺炎支原体的分子生物学检验：1。PCR 2。 核酸杂交,探针有特异性DNA片段探针、人工合成的寡核苷酸探针、全DNA探针。常用斑点杂交。3. PCR-RFLP
梅毒螺旋体的分子生物学检验：1。PCR 2. 核酸杂交 3. PCR—RFLP 分子生物学检验可早期诊断患者的梅毒感染，及时,防止病情恶化与蔓延。另外是耐药基因分析和流行病学研究的首选方法。
弓形虫DNA主要有三种形式:染体DNA、线粒体DNA、和胞质DNA 利用分子生物
学技术已检出弓形虫的主要基因有B1基因、P22基因(SAG2）、P30基因(SAG1）、 P43（SAG3）和棒状体蛋白1（ROP1）等。 分生检测：1.PCR 主要侧重检测B1基因和P30基因。 2。 斑点杂交
α珠蛋白合成障碍性贫血的分子生物学检验 1.PCR 2.Southern印迹杂交 3。AS-PCR 4. SSCP 5。gap-PCR
β珠蛋白生成障碍性贫血的分子生物学检验：PCR-RDB、PCR-RFLP、基因芯片、PCR—ASO、AS-PCR
血友病B的分子生物学检验： 直接检测法有Southern印迹杂交、DNA测序、基因芯片和毛细管电泳; 间接检测方法有RFLP、SSCP、变性梯度凝胶电泳(DGGE） 、双脱氧指纹图谱、变性高效液相谱(DHPLC)。
脆性X综合征的分子生物学检验： （一）Southern印迹杂交 （二）PCR （三）微卫星序列分析 通过分子诊断FMR—1基因突变开展患者判定、携带者筛查、产前诊断和体筛查等。
肿瘤相关的基因： 原癌基因、抑癌基因、细胞周期调节基因、细胞凋亡基因以及维持细胞基因组稳定性基因等。
细胞周期调节基因： 周期蛋白（cyclins）、周期蛋白依赖性激酶（CDKs)、CDK抑制因子（CKIs）及细胞周期检查点等其他蛋白
细胞凋亡相关基因可分三类：促细胞凋亡基因、抑制细胞凋亡基因、细胞凋亡过程中表达的基因。 p53是研究的较为充分的与肿瘤发生、发展关系明确的抑癌基因，绝大多数肿瘤都伴有p53基因的突变。
乳腺癌（17号染体长臂上）的发生、发展紧密联系的基因有BRCA1、BRCA2、TP53、c—erbB2、c-Myc、P53、Bcl—2、BAX、iASPP、ATM、MDM—2以及PTEN等
乳腺癌的分子生物学检验： 1.雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR)检测（免疫组织化学） 2。c—erbB—2/HER2检测 （免疫组化、荧光原位杂交） 3。 PS2检测 4。 Ki67检测 5。 乳腺癌复发基因检测
（DNA微集阵列技术、多基因RT-PCR定量检测技术)（70基因检测方法、21基因检测方法）
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