一、填空题
1. 基因突变可导致____的改变，从而引起____。
2. 基因变异包括____和____。
3. 内源性基因变异包括____、____、____和____等。
4. 外源性基因变异是指____疾病。
5. 基因诊断常用技术方法有____、____、____和____。 6. 核酸分子杂交技术是依据____、____和____原理设计的技术方法。 7. 常用固相核酸杂交方法有____、____、____、____、____和____等。
8. PCR是____的缩写，译为____。
9. PCR过程由____、____和____步骤组成。
10. 生物芯片技术包括____、____、____、____、____和____。
11. 基因测序是将有关基因进行____，测出____，从中出____所在。
12. 基因在概念上分为____和____。目前普遍接受的是____。
13. 基因的总体策略主要有____、____、____、____、____、____和____等。
14. 基因的基本程序包括____、____、____、和____。
15. 获得性基因的方法包括____、____、____、和____。
16. 常被用于基因的基因转移载体有____、____和____。
17. 基因中的靶细胞也称为____细胞，靶细胞有____和____两大类。
18. 基因转移方法概括地讲有____、____和____等。
二、名词解释
19. 基因诊断
20. 基因
21. 核酸分子杂交
22. Southern blotting
23. 生物芯片
24. 免疫基因
25. 基因矫正
26. 基因置换
27. 基因增补
28. 基因失活
29. 细胞芯片自杀基因
30. 夹心杂交
31. 引物
32. Northern blotting
33. PCR
三、问答题
34. 简述基因诊断的特点。
35. 简述分子杂交程序。
36. 简述PCR技术原理。
37. 简述基因诊断的临床应用概况。
38. 基因要符合哪些要求？
答案
一、填空题
1. 相应表型；疾病。
2. 内源性基因变异；外源性基因变异。
3. 点突变；缺失或插入性突变；染体移位；基因重排和基因扩增。
4. 病原体感染性。
5. 核酸杂交；PCR；基因芯片；基因测序。
6. DNA双链碱基互补；变性；复性。
7. Southern印迹杂交法；Northern印迹杂交法；斑点或狭缝杂交法；菌落杂交法；夹心杂交法；原位杂交法。
8. Polymerase chain reaction；聚合酶链反应。
9. DNA模板的变性；模板与引物结合；引物延伸。
10. 芯片制作(配体点阵及固定化)；样品处理(扩增和标记)；分子间反应或杂交；检测；数
据处理；综合分析。
11. 分离；其碱基序列；其变异。
12. 广义基因；狭义基因；广义基因。
13. 基因矫正；基因置换；基因增补；基因失活；“自杀基因”的应用；免疫基因；耐药基因。
14. 性基因的获得；基因载体的选择；靶细胞的选择；基因转移方法的选择。
15. 真核基因组文库；cDNA文库；PCR扩增；人工合成。
16. 逆转录病毒；腺病毒；腺相关病毒。
17. 受体；生殖细胞；体细胞。
18. 化学法；物理法；生物(病毒)法。
二、名词解释
19. 是利用分子生物学和分子遗传学的技术方法，直接检测基因分子结构及表达水平是否异常，从而对疾病做出诊断的方法。
20. 为达到目的，采用正常基因置换或增补患者体内变异基因的方法。
21. 是依据DNA双链碱基互补、变性和复性原理，用已知碱基序列的单链核苷酸片段作为探针，检测样本中是否存在与其互补的同源核苷酸序列的一种实验技术，是分子生物学领域及基因诊断最常用的基本技术之一。
22. DNA分子经限制性内切酶酶切和凝胶电泳后，可按分子量大小分离，再进行变性处理，将单链DNA从凝胶中吸附转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上，然后在该滤膜上进行杂交反应，称为Southern印记杂交法。
23. 主要用于DNA测序、基因表达谱的鉴定和基因突变体的检测与分析，故又称为DNA芯片或基因芯片。生物芯片技术包括芯片制作、样品处理、分子间反应或杂交、检测、数据处理和综合信息分析。
24. 是把产生抗病毒或肿瘤免疫力的相应的抗原决定族基因导入机体细胞，以达到目的
的基因技术。
25. 是指将致病基因中的异常碱基进行纠正，而正常部分予以保留的基因技术。
26. 是指用正常基因通过基因同源重组技术，原位替换致病基因，使细胞内的DNA完全恢复正常的基因技术。
27. 即把正常基因导入体细胞，通过基因的非定点整合进入体细胞DNA，并使其表达，以弥补缺陷基因的功能，或使原有基因的功能得到增强，但致病基因本身并未除去。
28. 是将特定的反义核酸(反义RNA、反义DNA和核酶)导入细胞，在转录和翻译水平阻遏某些基因的异常表达，从而达到目的的基因技术。
29. 在某些病毒或细菌中的某基因可产生一种酶，它可将原本无细胞毒或低细胞毒药物前体转化为细胞毒性物质，将细胞本身杀死，此种基因称为“自杀基因”。
30. 用位于待测靶基因序列上两个相邻但不重叠的DNA片段(A、B)，分别制作捕捉探针(不标记的、与A序列互补的片段)和检测探针(标记的、与B序列互补的片段)，先后与靶基因杂交。
31. 进行PCR扩增时需先设计一对序列与已知序列的DNA待测区两个3'-端的碱基互补的寡核苷酸，称为引物。
32. 是经典的RNA分析法，用于组织细胞中总RNA或mRNA的定性和定量分析，可确定其加工、剪接的缺陷及外显子的变异等。
33. 即聚合酶链反应，是由Kary B.M.在1985年创建的，是一种在体外进行的由引物介导的DNA序列酶促合成反应，又称为基因扩增技术。
三、问答题
34. 基因诊断的对象是基因，它具有一般诊断所不具备的以下特点：①特异性高。基因诊断是以特定的基因为探查靶点，所采用的分子杂交技术是用特定基因序列作为探针，故病因针对性很强。②灵敏度和精确性高。分子杂交技术和PCR技术具有放大效应。其中PCR可检出pg水平靶基因。③实用性强，诊断范围广。可用于内源性基因和外源性基因的检测。此外被检测基因样品几乎可以是任何状态的组织细胞，包括分化阶段的特异性表达及异常表达，也可对血斑、精斑中的DNA等进行鉴定。
35. 分子杂交程序主要包括下列内容：①待测核酸样本的制备。②特异性探针的制备与标记：制备的探针包括基因组探针、cDNA探针、寡核苷酸探针、RNA探针。核酸探针必须标记。③待测核酸样本的电泳分离、变性、转移和固定。④非特异性DNA分子的预杂交，标记探针的杂交、漂洗。⑤杂交信号的检测：放射性核素标记的核酸探针杂交信号，一般用放射自显影法检测。非放射性标记的核酸探针杂交信号，是通过酶促反应显或发光来显示的。
36. 采用PCR方法进行的基因扩增过程类似于体内DNA的复制过程。不同之处是使用耐热的Taq酶取代DNA聚合酶，用合成的DNA引物替代RNA引物。PCR全过程由DNA模板变性、模板与引物结合和引物延伸三个步骤组成，具体过程如下：①DNA模板的变性：将待扩增的DNA高温变性，使双链解开变成单链。②模板与引物的结合：预先加入反应体系中的两种引物在降温退火过程中将分别同待扩增的DNA片段两条链3'-端对应的核苷酸互补结合，配对复性。③引物延伸：将反应体系调节到所选用的Taq酶的最适温度，在有四种dNTP底物存在的条件下，聚合酶以待扩增DNA为模板，从引物的3′-端合成新的DNA链。
37. 基因诊断临床应用概况：①遗传病的基因诊断：如镰刀形红细胞贫血病的β珠蛋白基因
的第六个密码子发生单碱基突变。这一突变改变了该基因内部的一个内切酶Mst Ⅱ作用位点。当把正常人和带有基因突变者的基因组DNA用Mst Ⅱ酶解后，用β珠蛋白基因探针杂交，结果会出现不同的DNA条带，依此对其进行基因诊断。②肿瘤的基因诊断：从分子生物学角度来看，肿瘤的发生是由某些因素的作用所致的多个癌基因的激活或抑癌基因的缺失。所以有人认为肿瘤是一种多基因异常性疾病。依其基因突变事实，可采用相应的技术对肿瘤进行基因诊断。诊断结果对了解癌变机制，肿瘤分类分型及预后均有指导意义。③感染性疾病的基因诊断：采用分子杂交技术和PCR技术等对感染性疾病进行基因诊断，可以快速准确地诊断出致病微生物的种类；检测出带菌者和潜在感染性；检测病原微生物耐药性，及进行病原流行病学调查等。
38. 基因要符合：①属于为已明确的单基因缺陷性疾病；②仅限于体细胞；③靶细胞有亲缘性和可操作性等；④有明显疗效和无或低危害性等；⑤表达水平稳定，时程长；⑥必须有动物实验基础。
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