蛋白芯片是一种用来检测蛋白分子之间相互作用的高通量检测系统。与传统的基因芯片相比，蛋白芯片是以蛋白质代替核酸作为检测对象，它直接在蛋白质水平上检测表达模式，在基因表达研究中有着更加直接的应用前景。 它的基本原理是将各种蛋白质有序地固定于载玻片等各种介质载体上成为检测芯片，然后，用标记了有特定发光物质的抗体与芯片作用，与芯片上的蛋白质相匹配的抗体将与其对应的蛋白质结合，抗体上的发光物质将指示对应的蛋白质及其表达数量。在将未与芯片上的蛋白质互补结合的抗体洗去之后利用检测仪测定芯片上各点的光强度，通过光强度分析蛋白质与蛋白之间相互作用的关系，由此达到测定各种基因表达功能的目的。由于生物细胞中蛋白质的多样性和功能的复杂性，开发和建立具有多功能样品处理能力、能够进行快速分析的高通量蛋白芯片技术将有利于简化和加快蛋白质功能研究的进展。 广义的蛋白芯片产品分为固相和液相两类，目前市场上液相蛋白芯片的产品主要有：BD公司的CBA平台，MEK、R&D和Affymetrix等公司的Luminex xMAP平台，这两个平台的相关信息在本期其他几篇文章中有详细介绍。固相蛋白芯片产品主要有：R&D的Proteome Profiler 抗体阵列和Mosaic™ ELISA试剂盒，CST的PathScan®抗体芯片。
一．R&D Proteome Profiler TM蛋白芯片
Proteome Profiler蛋白芯片作为一种快速、灵敏而又经济的工具，在不需要任何特殊仪器的情况下，能同时检测单个样品中多种蛋白的相对水平。试剂盒中点在硝酸纤维素膜上或96孔板上的所有捕获抗体均经过精心选择，具有高度特异性。R&D公司的蛋白芯片能广泛地应用于信号转导、血管再生、细胞凋亡、肿瘤、肥胖、以及干细胞、药物筛选等的研究。
Proteome Profiler TM 蛋白芯片的特点：
适用范围广——可用于细胞上清、细胞溶解产物、血清、血浆等样本
省时省力——避免重复进行多次免疫沉淀或Western Blot实验，6小时内完成多指标检测
高通量——在单一样本中可同时检测最多达119种待测物
高灵敏度——比Western Blot灵敏度高20倍
简便——不需要任何特殊的仪器，使用化学发光检测
其检测原理是：将高度特异的捕获抗体点样在NC膜或96孔板上，形成抗体芯片阵列。捕获抗体识别样本中的目的蛋白，随后HRP结合的检测抗体特异检测被捕获的蛋白。之后，利用化学发光检测试剂来检测蛋白，产生的信号与结合的分析物呈正比（图1
细胞芯片
）。
图1 Proteome Profiler TM 蛋白芯片检测原理
二．R&D Mosaic™ ELISA试剂盒
Mosaic™ ELISA试剂盒在96孔板的每个孔中可同时对8个不同指标进行检测，同时在试剂盒中包含了纯化的标准品，可对检测指标进行绝对定量。
相较于传统的ELISA试剂盒，Mosaic™ ELISA有明显的优势：
•多因子定量分析，每孔同时检测8个指标
•节约时间，完成1个试剂盒的时间得到8个试剂盒的数据
•节约了样品，每孔只需50μl样本
•数码成像系统读取结果，保证其准确性和重复性
规格预点样的96孔板，每个孔8个捕获抗体
点以及一个定位参考点，
每板反应数80
样本类型细胞培养上清、血清、血浆
样本体积25μL 实验耗时 4.5h 检测方法化学发光自动化
可以
表1 Mosaic ™
ELISA试剂盒概况
三．CST PathScan ® ELISA抗体芯片
CST PathScan ® 抗体芯片技术是基于夹心法ELISA 原理的多元分析检测技术，主要用以检测信号转导通路中的关键因子。每个试剂盒提供两张芯片，每张芯片上含有8个抗体阵列，可同时检测多达40个不同的目的蛋白。
PathScan ® ELISA 试剂盒提供化学发光检测和荧光检测两种形式。化学发光可使用传统的胶片检测，不需要任何额外的设备；荧光可用荧光成像仪检测。
PathScan ® ELISA 抗体芯片的优势：
·使用CST 生产的最优质的抗体，提供最大限度的特异性和灵敏度
·可在150μL 的细胞裂解中同时检测多个指标，省时
Simultaneous detection of multiple analytes in PHA-treated PBMCs. Human peripheral blood mononuclear cells were treated with 10 µg/mL PHA for 0 - 72 hours. Following treatment, analytes were detected using R&D Systems Mosaic ELISA Human Cytokine Panel 1 (Catalog # MEA001). A. Upper panel shows the well map for Mosaic ELISA Human Cytokine Panel 1 and representative images of individual wells for the standard curve and data shown in the histograms below. In addition
to the 8 spotted capture antibodies, well images show a Reference Spot (lower rightmost spot in each well). PBMC supernatants were diluted 1:64 to ensure that the values for all of the analytes fell within the standard curve. Reference Spots provide a strong positive signal to allow easy visualization of well location for template alignment during data analysis. B. Lower panel shows
examples of analyte concentration quantification.
图2 Mosaic ™ ELISA试剂盒数据示例
省力、
·同时检测细胞表面和细胞内的蛋白质，精确反映信号通路情况
·化学发光检测不需要任何特殊的仪器，也有荧光检测方式供选择
图3 CST PathScan ®
ELISA抗体芯片图示
四．产品订购信息
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
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