胡慧廉;丁乃立;吴莲珍
【摘 要】建立了项空气相谱法测定硫酸软骨素中有机溶剂残留量的方法.采用旋涡混合器以水为溶剂制备供试品溶液,以大口径HP-快速GC残留溶剂柱为分离柱,FID为检测器,用外标法进行定量.甲醇在1.34～283.50μg/mL、乙醇在48.27～1 206.75μg/mL内线性关系良好,相关系数分别为0.999 9、0.9998,测定结果的相对标准偏差(n=6)分别为3.39%、1.36%,加标平均回收率分别为95.64%、97.28%,检出限分别为0.08、0.05μg/mL.
【期刊名称】《化学分析计量》
【年(卷),期】2006(015)001
【总页数】3页(P21-23)
【关键词】顶空气相谱法;硫酸软骨素;残留有机溶剂
【作 者】胡慧廉;丁乃立;吴莲珍
【作者单位】华东理工大学分析测试中心,上海,200237;华东理工大学分析测试中心,上海,200237;华东理工大学分析测试中心,上海,200237
【正文语种】中 文
【中图分类】O6
硫酸软骨素是从动物的软骨组织中提取的酸性粘多糖，具有降血脂、抗肿瘤、抗衰老、关节炎及神经痛等多种功能，在临床上有广泛的应用[1～4]，在国外已成为流行的保健品添加剂[5]。近年来，我国硫酸软骨素已出口到美国和许多欧洲国家，是我国出口量最大的生化药品之一。随着硫酸软骨素应用范围的不断扩大，对高纯度、高质量硫酸软骨素的需求也越来越大，因此有必要对硫酸软骨素生产中使用的有机溶剂甲醇和乙醇的残留量进行检测。根据ICH[6]及中国药典[7]规定，药品中残留有机溶剂的最大允许量：甲醇为3 mg/g，乙醇为5 mg/g。目前尚未见硫酸软骨素中残留有机溶剂检测方法的报道。笔者根据硫酸软骨素的物理化学性质和产品质量的技术要求，建立了用顶空气相谱方法检测硫酸软骨素中甲醇和乙醇残留量的方法。
1 实验部分
1.1 主要仪器与试剂
气相谱仪:Agilent 6890型,配有FID检测器和化学工作站,美国Agilent公司;
自动顶空进样器: Agilent 7694E型,美国Agilent公司;
XW-80A旋涡混合器:上海医科大学仪器厂;
硫酸软骨素:市售；
甲醇、乙醇: 分析纯,上海振兴化工一厂；
实验用水: 超纯水。
1.2 谱条件
谱柱：HP-快速GC残留溶剂柱，内涂6%氰丙基苯基和94%二甲基聚硅氧烷，规格为30 m×0.53 mm i.d.，1.0 μm；柱温：40℃保持3 min，然后以40℃/min升至200℃并保持6 min；气化室温度：200℃；检测器(FID)温度：250℃；载气：N2；柱前压：1.42×104 Pa；
柱内载气压力控制：1.42×104 Pa保持4 min，然后以1.03×104 Pa/min升至3.45×104 Pa，再保持7 min；分流比：2∶1；顶空瓶加热温度：70℃；定量管温度：110℃；传输线温度：110℃；顶空瓶平衡时间：30 min；进样体积：1 mL。
1.3 混合标准溶液的制备
精密称取甲醇0.116 0 g、乙醇0.482 7 g，用超纯水稀释并定容至100 mL，作为混合标准贮备液。分别将混合标准贮备液用超纯水稀释成甲醇质量浓度为11.34、28.35、56.70、113.40、283.50 μg/mL，乙醇质量浓度为48.27、120.675、241.35、482.70、1 206.75 μg/mL的系列混合标准溶液，备用。
2 结果与讨论
2.1 进样方式
有机溶剂残留的分析，一般采用气相谱法，包括经典的溶液直接进样法和顶空进样法。硫酸软骨素的相对分子质量为10 000～30 000，难以气化，故本实验采用顶空进样法。与经典溶液直接进样法相比，顶空进样法在测定挥发性物质方面有显著的优势，由于只取气
气体混合器
相部分分析，避免了样品溶液对谱柱的污染及样品基质的干扰；另外气体进样量大，可提高对痕量有机溶剂的检测能力。 2.2 供试品溶液的制备方法
水是顶空进样法较为理想的溶剂，因产生的干扰小而经常被使用。用水作为溶剂制备供试品溶液时，发现供试品粉末在水中渗透性不强，供试品很易结块，即使超声处理，效果也不很明显。若供试品不能完全溶于水，则包溶在粉末中的溶剂不能释放出来，就会产生偏低的测定结果。本实验采用旋涡混合器，很好地解决了样品的溶解问题。具体的制备方法如下：精密称取供试品0.2 g，置于10 mL顶空瓶中，加入超纯水5 mL，加盖密封，用旋涡混合器振荡，至固体粉末完全溶解成粘稠液体。
2.3 样品谱图
按1.2谱条件自动顶空进样分析。硫酸软骨素样品谱图如图1所示。
t/min1—甲醇； 2—乙醇图1 硫酸软骨素样品的顶空气相谱图
2.4 线性方程及检出限
精密量取系列标准溶液各5 mL，分别置于10 mL顶空瓶中，按1.2谱条件自动顶空进样分析，以溶液中各组分浓度c与其对应谱峰面积Y进行线性回归，甲醇、乙醇分别在11.34～283.50 μg/mL、48.27～1 206.75 μg/mL内有良好的线性关系，回归方程和线性相关系数分别为：Y=1.403 5c+1.179 5，r=0.999 9；Y=2.212 4c+12.136 1，r=0.999 8。
当信噪比为3时，甲醇、乙醇的检出限分别为0.08、0.05 μg/mL。
2.5 精密度试验
精密量取甲醇、乙醇质量浓度分别为56.70、241.35 μg/mL的混合标准溶液5 mL共6份，分别置于10 mL顶空瓶中, 按1.2谱条件自动顶空进样测定,测定结果列于表1。由表 1可知，本方法的测量精密度良好。
表1 精密度试验结果溶剂谱峰面积测定值平均值RSD/%甲醇81．73 78．21 83．3077．92 84．56 82．8381．433．39乙醇544．39 540．27 547．32556．73 534．76 543．08544．431．36
2.6 回收试验
用已测得甲醇、乙醇残留量的样品5份，精密添加甲醇、乙醇质量浓度分别为28.35、120.68μg/mL混合标准溶液5 mL，按1.2谱条件自动顶空进样分析，计算加标回收率，计算结果列于表2。由表2可知，添加的甲醇和乙醇回收完全，测量准确度较为理想。
表2 回收试验结果(n=5)溶剂本底值/μg·mL-1加标量/μg·mL-1测得值/μg·mL-1回收率/%甲醇93．6428．35120．7595．64乙醇263．99120．68381．3897．28
2.7 样品分析
精密称取2个批号的硫酸软骨素样品(批号分别为050503、 050606)，制备样品溶液并进样分析，以峰面积外标法定量，测定结果列于表3。由表3可知，批号050503样品中的乙醇含量超出了ICH及中国药典规定的允许量。
表3 样品测定结果(n=3)样品批号甲醇/μg·g-1乙醇/μg·g-1050503050606324．96936．3811229．492639．87
3 结语
顶空气相谱法简单、灵敏、重现性好、准确度高，适用于硫酸软骨素产品的出厂、出口质量检测。
参 考 文 献
1 Mourao PAS, Pereira MS, Pavao MSG, et al. Structure and anticoagulant activity of a fucosylated chondroitin sulfate from echinoderm. J Biol Chem, 1996,271(39): 23 973
2 Timar J, Diczhai C, Bartha I, et al. Modulation of heparan sulfate and chondroitin sulfate ratio by glycosaminoglycan biosynthesis inhibitors affects liver metabotic potential of tumor cells. Int J Cancer, 1995,62(6):755
3 Japan Pharmaceutical Information Center.Drugs in Japan (Ethical Drugs). 9th ed. Tokyo:YaKugyo Jiho, 1985.344
4 《中国药物大全》编委会.中国药物大全(西药卷).第2版．北京：人民卫生出版社，1997.126
5 荣晓花.硫酸软骨素在药品和保健食品中的应用.山东食品科技, 2004 (1):18
6 ICH 指导委员会.药品注册的国际技术要求(质量部分).周海钧，等译.北京：人民卫生出版社，2000.82
7 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部). 北京：化学工业出版社，2000.附录64
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