大便标本：采用一次性无菌杯，杯盖严密，无明显灰尘、泥土或纸屑者为合格标本。
1.2、标本预处理：
1.2.3、大便标本：取绿豆大小的粪便标本加入生理盐水制成匀浆，用接种环取一环涂片， 观察有无脓细胞，真菌孢子及菌丝，有真菌的须接种CHROMagar念珠菌培养基，脓细胞++以上的接种粪便选择性培养基，已经经验应用抗生素的采用改良TTC增菌液或Na2S2O3肉汤增菌液先进行增菌。留下涂片干燥后Gram染，观察菌情况，注意有无菌失调。对于无脓细胞的标本无须进行接种。 1.3、读片：
根据人体对细菌/真菌感染在早期主要以非特异性免疫的细胞免疫为主的特点，结合标本来源部位系统器官生理病理特点，收寻20~30个视野中脓细胞聚集处的脓细胞胞浆中有无吞噬的细菌及细菌的染排列特征，菌体特征（如粗细、长短、扭曲）并作记录。粪便标本：在观察吞噬现象的同时，作好菌比例计算，并记录（菌比例分析参照相关文件）。
1.4、 标本接种：
1.4.3、大便标本：一般感染性腹泻的粪便标本直接接种或增菌后接种：SS、SMC、TCBS； 怀疑为金黄葡萄球菌性食物中毒或伪膜肠炎的加HSM（高盐甘露醇培养基），怀疑为真菌性肠炎的加CHROMagar，怀疑为伪膜性肠炎的应作厌氧菌培养分离艰难梭菌。
1.5、读板：
1.5.2、大便：
①沙门菌：SS:中心黑之乳糖阴性菌落（亚利桑拉可以为阳性）,SMC: 红菌落
②志贺菌：SS、SMC均为无透明之乳糖阴性菌落
③O-157大肠埃希菌：SS：为红乳糖阳性菌落，SMC为无透明之山梨醇阴性菌落
▲其他致病性大肠埃希菌多数为：SS、SMC均为红
▲其中A-D大肠埃希菌在SS上可能为无菌落 ④弧菌：SS：无菌落，TCBS：黄大菌落
▲其他弧菌：SS、TCBS均为无或淡绿菌落 ⑤小肠结肠耶尔森菌：SS为无小菌落，SMC为红牛眼状小菌落 ⑥气单胞菌：所有气单胞菌转种血琼脂均呈现β溶血 ▲嗜水气单胞菌，SS红菌落，TCBS为黄，SMC无之大菌落
▲其他气单胞菌：SS无菌落，TCBS为黄，SMC无之大菌落
⑦邻单胞菌：SS、TCBS及SMC均为无菌落。
1.6、鉴定（在读碟的基础上进行）
① G+co：
▲ 触酶阳性、易乳化——葡萄球菌：鸟氨酸、尿素、ONPG、硝还采用酶法4-6h观察记录 结果；试管法凝固酶，分别于1h、4h、24h观察一次；蕈糖、甘露醇、甘露糖、麦芽糖、 蔗糖、木糖；
▲ 触酶阳性、不易乳化——微球菌：葡OF、七叶苷、精氨酸、硝还、枸橼酸盐、动力、7.5%高盐肉汤；
▲ β溶血性链球菌——触酶阴性——6.5%高盐肉汤、CAMP试验、杆菌肽、胆七、蕈糖、 乳糖、棉子糖、甘露醇、山梨醇、七叶苷、菊糖（所有糖类均需加入血清）； ▲ 肺炎链球菌——Optochin——如果R，需加6.5%高盐肉汤、胆七、乳糖、棉子糖、甘露醇、山梨醇、菊糖（所有糖类均需加入血清），必要时作胆汁溶菌试验和乳胶凝集试验；
▲ D链球菌及肠球菌——触酶阴性——6.5%高盐肉汤、胆七、精氨酸双水解、棉子糖、甘露醇、山梨醇、阿拉伯糖、蔗糖、动力；
▲ 口腔球菌——触酶阴性/弱阳——葡OF；
▲ 草绿链球菌—Optochin（R）—6.5%高盐肉汤、胆七、棉子糖、甘露醇、山梨醇、乳 糖、七叶苷、尿素；
G+ b：
—
触酶（+）—棒状杆菌：硝还、尿素、七叶苷、明胶、动力、葡、麦、蔗、甘醇、木
—触酶（+）—芽孢杆菌：动力、卵磷脂水解、甘露醇、木糖、青霉素酶
—触酶（+）—李斯特菌：20℃动力、CAMP、甘露醇、木糖、鼠李糖、七叶苷
—触酶（—）——红斑丹毒丝菌：H2S、精氨酸水解、七叶苷、动力、蕈糖、阿拉伯糖
② 肠杆菌科：——氧化酶（—）、KIA——GYZ15e、API 20E等鉴定系统；——沙门菌、 志贺菌、致病性大肠埃希菌需作血清学试验；
③ 弧菌科：—氧化酶（+）、KIA、GYZ9v、API 20E、或按操作规程上的经典双歧图表法 鉴定；
④ 非发酵菌：—氧化酶（±）、KIA、GYZ11n、15n、API 20N、或按操作规程上的经典 双歧图表法鉴定；
⑤ G-co:——氧化酶（+）、触酶（+）、DNase、硝还、酶法葡、麦、蔗、甘醇、木糖；
⑥ 嗜血杆菌：—触酶、Ⅴ、Ⅹ因子需求、酶法鸟氨酸、尿素、靛基质、ONPG、硝还、葡、 蔗、乳、甘糖、木糖；
⑦ 军团菌：—氧化酶（±）、触酶（+）、硝还（—）、尿素（—）、糖类（—）、动力（+）/ 橡树岭军团菌（—）—血清学试验定种；
⑧ 念珠菌：CHROMagar显培养基——不显的——玉米-土温80、TH-15c、API 20c、YBC卡等鉴定系统；
⑨ 其他罕见细菌按经典书籍提供的方法鉴定。
1.7、抗菌药物敏感试验： 按CLSI2008版方案有关规定执行，其中链球菌采用5%BloodMHA，嗜血杆菌用HTM，淋病奈瑟菌用GC培养基（不加选择剂），其他非苛养菌用MHA； 所选用药物根据CLSI选药规则结合我院工作实践发展了以下几种组合：
▲ 肠杆菌科/弧菌科：AM、(AMC) 、GM、CIP、SXT、TE、AN、CZ、CTX/CA、CTX、
CRO、FOX、FEP、AZT、(CXM)、 (CAZ)、(IPM)、 FT（尿路用）；
▲ 非发酵菌（含盖假单胞菌、不动杆菌、窄食单胞菌、伯克菌在内）：PIP、GM、TM、AN、CIP、SXT（假单胞菌不选）、TE（假单胞菌不选）、CFP/SB(即SCF)、CTX、CAZ、IPM、AZT 、FEP、(PIP/TZ)、FOX（假单胞菌不选）、LVF（窄食单胞菌、伯克菌选用）；
▲ 葡萄球菌： OX、FOX、CM、VA、E、TE、OFL、SXT、(RA)、FT（尿路用）；
▲ 肠球菌：GM120、AM/P、VA、OFL/LEV、RA、TE、E、FT（尿路用）； ▲ 肺链：OX、CM、VA、E、TE、OFL、SXT、RA、C；
▲ β-链/草链：P（草链用）、FEP、CRO、CM、VA、E、TE、OFL
▲ 淋病奈瑟菌：P、CIP、TE、SPT、CRO、CXM、AZI；
▲ 脑膜炎奈瑟菌：不作常规测试：P、CRO、MEM、TE/MIN，常规测试：CIP、SXT、 C、RA；
▲ 嗜血杆菌：AM、CIP、SXT、TE、AMX/CA、CXM、CRO、AZI。
抑菌环测量后，根据相应breakpoint标准解释，得出S、I、R定性结果； 肺链除OX外，所有β-内酰胺类抗生素均须采用稀释法得出确切得MIC值，才能由此得出S、I、R结果，K-B法不可用。
二、各科病原菌接种微量生化管及所帖K-B药敏纸片
1、肠杆菌科： G Y Z15：硫化氢、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐；靛基质、甲基红、枸橼酸；尿素、动力、 产气；赖氨酸、鸟氨酸、棉子糖；山梨醇、侧金盏花醇、木糖；可视情况补种 DNA酶，丙二酸盐
2、弧菌科： G Y Z9：1%NaCl赖氨酸精氨酸鸟氨酸、甘露醇、水杨素、6%高盐、枸缘酸
肠杆菌科/弧菌科药敏：
氨苄西林（AM）、庆大霉素(GM)、复方新诺明(SXT)；四环素(TE)、环丙沙星(CIP)、阿米卡星(AN)、头孢唑啉(CZ)、头孢曲松(CRO)、头孢噻肟(CTX)、头孢他定(CAZ)、 头孢西丁(FOX)、头孢吡肟(FEP)、氨曲南(AZM)、亚胺培南(IPM,)、头孢噻肟/克拉维酸(CTX/CA)、
头孢他啶/克拉维酸(CAZ/CA) （若病原菌来自小便或肠道则加贴呋喃妥因）
3、非发酵菌
GYZ11:FO(厌、需)、氧化酶、枸缘酸、麦芽糖（非）、精氨酸双水解、甘露醇（非）、木 糖（非）、硝酸盐还原实验、DNA酶、乙酰胺
GYZ15:精氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、枸缘酸、硝酸盐还原实验、尿素、七叶苷、靛基质、 β-半乳糖苷酶(ONPG)、蔗糖（非）、麦芽糖（非）、木糖（非）、硫化氢、葡萄糖（非）、氧化酶
非发酵菌药敏： 哌拉西林（PIP）、庆大霉素(GM)、妥布霉素(TM)、阿米卡星(AN)、环丙沙星(CIP)、氨曲南(ATM)，四环素(TE)、复方新诺明(SXT)、头孢西丁(FOX)、舒普深(SCF)、头孢噻肟(CTX)、头孢他定(CAZ)、左氧氟沙星(LVF,嗜麦芽和窄食假单胞菌贴)、头孢吡肟(FEP)、亚胺培南(IPM)
4、革兰氏阴性双球菌： OE(+)、H2O2(+)、硝酸盐还原实验、DNA酶、葡萄糖（非）、木糖（非）、麦芽糖（非）、甘露醇（非）、蔗糖（非）
革兰氏阴性双球菌（主要用于淋球菌）药敏： 四环素（TE）、环丙沙星(CIP)、青霉素G(PG)，壮观霉素(SPT)、阿奇霉素(AZI)、头孢曲松(CRO)、头孢呋辛(CXM)；（可用阿奇霉素经验性）
5、嗜血杆菌科： H2O2(+)、OE（+）、V、X因子需求试验（卫星试验）、酶法硝酸盐还原实验、鸟氨酸、 尿素、靛基质、β-半乳糖苷酶(ONPG)、葡萄糖（非）、乳糖（非）、木糖（非）、甘露糖（非）、蔗糖（非） 所有氨基酸,糖类生化管均要封石蜡（防CO2挥发，厌氧也能生）
嗜血杆菌科药敏： 复方新诺明（SXT）、氨卞西林(AM)、环丙沙星(CIP)，头孢曲松(CRO)、头孢呋辛(CXM)，阿奇霉素(AZI)、四环素(TE)、阿莫西林/克拉维酸(AMC)
6、葡萄球菌： 硝酸盐还原试验、鸟氨酸、尿素、β-半乳糖苷酶(ONPG)、覃糖、甘露醇、甘露糖、麦芽糖、蔗糖、木糖
氧氟沙星甘露醇葡萄药敏： 红霉素（E）、克林霉素(CM)、苯唑西林(OX)、头孢西丁(FOX)、青霉素G(PG)、四环素(TE)、万古霉素(VA)、左氧氟沙星(LVF)、复方新诺明(SXT)、利福平(RA)、米诺四环素(MIN)、氯霉素（CL）
7、肠球菌： H2O2(-)、胆汁七叶苷、七叶苷、6.5%高盐、蔗糖、动力、甘露醇、山梨醇、精氨酸双水解、棉子糖、阿拉伯糖、山梨糖
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