大多数微生物可用超低温保存，超低温保存法是适用范围最广的微生物保存法。需要简单养分的微生物种，如用其他的贮存方法不能保持其活力（ 如植物的病原性真菌），通常可用超低温的方法保存（ATCC 1983；Halliday，Baker 1985）。此法是将冻存在小管或安瓿里的细胞以较慢的冷冻速率（1℃／分钟）冷冻，直至150℃，再将这些小管贮存在150～－196℃的液氮中。
超低温的冷冻爱护剂不同于冻干法所用的冷冻剂。ATCC 常用一种由甘油（10％）、二甲
低温水浴
亚砜（5％）和培育液制成的混合剂保存多数的细胞株。这些化学试剂进入细胞内可避开内
膜的冷冻损伤。
贮存在低温容器内的细胞复苏时必需当心操作。当小管被加热时，所形成的冰晶会将细
胞杀死，正确操作就可避开这种事故。只要快速将样品解冻就能削减活力的丢失，做法是：
将封口的小管快速放入37℃的水中，直至全部的冰溶化，然后打开管口，将内容物移入培育基。
超低温保藏的微生物必需始终贮存在温度特别低的环境中，因此需要液氮罐。在长期贮存的过程中必需常常留意补充液氮。这种贮存方式比冻干法需要更多的经费，包括为了维持贮存温度所必要的劳动力和液氮等。
2.2 材料
病毒超低温保存所需材料有：热收缩塑料管（Nunc Cryoflex），液氮罐，防护手套和面罩，永久性记号笔，气体喷灯，装液氮的保温瓶。
2.3 方法
（1）剪一段两端各超出冷冻管长度2cm 的热收缩塑料管。 （2）将含有澄清病毒悬液（组织培育的上清培育基，或组织培育基内的细胞溶解产物均
可）冰浴几分钟，用灭菌移液管将0.2ml 冰浴过的上清悬液分装到冷冻管内，并将盖子拧紧。
（3）将有病毒的冷冻管放入热收缩塑料管中部，插入正确的标签。
（4）用喷灯当心加热热收缩塑料管，并使之包住冷冻管。留意不要用太高的温度加热热收缩塑料管。
（5）再当心加热热收缩塑料管的两端，用大号镊子夹紧管的端口至完全密封。
（6）将密封好的冷冻管快速在装有液氮的保温瓶中冷冻（操作时要求戴面罩和手套）。
（7）将冷冻过的冷冻管放入液氮罐中的格子内，同时记录样品的具体的存放位置、试验编号和存放日期等。
（8）需要用时，快速从液氮罐内取出所需样品，并投入37℃水浴箱中解冻后，用解剖刀片在冷冻管的硅化垫圈处切开热收缩塑料管。拧开冷冻管的盖子时不需要除去热收缩塑料
管。
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议