冰浴方法——KAc冰浴法
生化试验中，由于需要对样本进行保护，防止样本变质，通常需要低温处理，冰浴是常用方法之一，这里以KAc冰浴法为例，说明冰浴的操作。 （1）从标本中取合适样本，成虫腿或胸部，样本取出后置于装有无菌水的1.5ml离心管或小烧杯中，浸泡10min； （2）标本从无菌水中取出后用吸水纸吸干；
（3）将标本置于另一个1.5ml离心管中，加入100ul提取缓冲液，置于- 20 ℃冰箱中5min后取出，用研磨棒捣碎匀浆，研磨棒用400μL提取缓冲液冲洗； （4）将匀浆置于65℃水浴60min(其间取出混匀2- 3次) ；
（5）向匀浆中加入低温水浴100ul（1/5倍体积）冷的8M NaAc（KAc），将离心管- 20 ℃冰浴45min以上；
（6）取出后以11000r/min离心15min，取上清液于1.5ml离心管中，加入 2倍体积预冷无水乙
醇，混匀，置于 - 20℃冰箱中 1～2 h，沉淀 DNA；
（7）后11 000 r /min，离心15min，小心倒弃上清液，收集沉淀；
（8）在留有沉淀的管中加入100ul已预冷的70%乙醇漂洗，11000r/min离心5min，弃上清液；
（9）重复8；
（9）此时可以看到DNA沉淀在管底，然后将管口朝下放在滤纸上让DNA自然干燥；
（10）每管加入适量的 ddH2O，于 4 ℃充分溶解，-20℃保存。
所需试剂：
提取缓冲液；无菌水；8M NaAC（KAc）；无水乙醇；70%乙醇；
100ml 8M NaAc（分子量 82.03）：取65.62g NaAc，溶于100ml双蒸水；
100ml 8MKAc（分子量 98.14）：取78.51g KAc，溶于100ml双蒸水；
提取缓冲液配制100ml
0.2M蔗糖 6.84g
0.1M Tris 1.2g
0.1M NaCl 0.58g
0.05M EDTA 1.46g
SDS 5g
dd H2O定容至100ml
用NaOH调节pH至9.2
提取缓冲液需灭菌处理
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