一、目的要求
1、熟悉普通光学显微镜的构造及其使用方法。
2、了解油镜的原理，并掌握其使用方法。
3、观察各种染标本，认识微生物的基本形态和特殊结构。 二、基本原理
显微镜包括普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。微生物个体微小，难于用肉眼观察形态结构，只有借助显微镜，才能对其进行研究和利用。普通光学显微镜是一种精密的光学仪器，是观察微生物最常用的工具。
细菌等原核细胞型微生物个体微小，一般需要使用油镜观察其形态结构。而油镜头晶片极小，投入光线少，从载玻片透过光线，又被空气折射（空气折光广率1.00、玻璃折光率为1.52），更不易射入镜头内，致使光线较弱物像不清。当在镜头和载玻片之间滴加香柏油后，由于香柏油折光率为1.515，与玻璃相近，可消除光线通过玻璃与物镜间空气时发生折射现象，避免光线损失，使亮度和清晰度都得到了提高，几乎可以看清所有细菌。 三、实验材料及仪器
加香（1）标本及试剂：微生物标本片、香柏油、二甲苯。
（2）仪器及其他用具：普通光学显微镜、擦镜纸等。
四、实验步骤
1.普通光学显微镜的构造及使用方法。
1）普通光学显微镜的构造。普通光学显微镜有机械部分和光学部分组成。
A．显微镜的机械部分。包括镜座、镜臂、镜筒、转换器、载物台、推动器、粗调节器（粗调螺旋）和细调节器（微调螺旋）等部件（图1-1）
普通光学显微镜机械部分各部件的构造与功能见表1-1
B．显微镜的光学系统。
由反光镜、聚光镜、物镜、目镜、虹彩光圈等组成，光学系统使标本物像放大，形成倒立的放大物像。
表1-2普通光学显微镜光学系统的构造与功能
2）普通显微镜的使用
①取镜。从镜箱中取镜时，一手握镜臂，一手托镜座，保持镜体直立，以防反光镜及目镜脱落被摔坏，将显微镜放置于平稳的实验台上。端正坐姿，镜检时两眼同时睁开，单目显微镜一般用左眼观察，用右眼帮助绘图或做记录。双目显微镜用双眼观察。
②使低倍镜与镜筒呈一直线，调节反光镜，让光线均匀照射在反光镜上，电光源显微镜打开照明光源，并使整个视野都有均匀的照明。调节亮度然后升降聚光器，开启虹彩光圈，将光线调至合适的亮度。
③将要观察的标本放在载物台上，调节待检部位位于物镜正下方。
④观察从低倍镜开始，低倍镜下视野范围大，易到待观察的物像。用粗调节器下降镜筒，使物镜接近盖玻片。为了防止物镜压在标本玻片上而受到损伤，可在侧面观察，然后从目镜中观察视野，旋动粗调节器，使镜筒徐徐上升，直至出现物像，再用细调节器调至物像清晰为止。
⑤使用移动架移动标本，认真观察标本各部分，寻要观察的目标。
⑥转动转换器，用高倍镜观察。显微镜、载玻片和盖玻片都符合标准时，可作等高转换，即显微镜的所有物镜一般是共焦点的。但一般情况下，转换物镜时，也要从侧面观察，避免镜头和玻片相撞。然
后用细调节器稍加调节，就可获得清晰的图像。转动转换器时，不要用手指直接搬动物镜的镜头。
⑦升高镜筒，将油镜转到光路轴上来。在载玻片目标物上滴加一滴香柏油。从侧面注视，下降镜筒，使油镜前端浸入香柏油。调节光照，然后一边观察一边用细调节器缓缓升高镜筒，直至视野中出用现清晰的物像。
⑧观察完毕，应及时把镜头上的香柏由擦去。擦拭时先用擦镜纸擦1~2次，然后用二甲苯润湿擦镜纸，再擦1~2次，最后用干净的擦镜纸擦2次。用柔软的绸布擦拭显微镜的机械部分。
将物镜镜头转呈八字形，下降镜筒和聚光器。将显微镜放回镜箱。将显微镜至干燥通风处，并避免阳光直射，避免和挥发性化学试剂放在一起。
2．微生物标本片的观察
观察青霉、曲霉、酵母菌、放线菌、大肠杆菌等常见的微生物标本片，认识微生物的基本形态和结构。同时记录注明物镜放大倍数。
3.显微镜用毕后的处理
（1）以粗调节器调开油镜，移去标本片；
（2）清洁油镜镜头；
（3）清洁标本片：先用擦镜纸擦1~2次，然后加少许二甲苯于滴过油的标本上，以擦镜纸向一个方向轻轻拖拉，除去标本上的油。一次不行可以重复，但不可来会擦抹，以免擦掉标本；
（4）将显微镜各部分还原：聚光器下降，反光镜垂直于镜座，物镜镜头离开通光孔上方转呈八字形。放入镜箱。
五、结果报告
分别绘出低倍镜、高倍镜和油镜下观察到的细菌、青霉、曲霉、酵母菌、放线菌、大肠杆菌等的形态，包括在三种情况下视野中的变化。同时注明物镜放大倍数和总放大率。
六、思考题
1．用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油？起什么作用？
2.试列表比较低倍镜、高倍镜及油镜各方面的差异。为什么在要使用高倍镜及油镜之前要先用低倍镜进行观察？
3.根据你的实验体会，谈谈应如何根据所观察微生物的大小，选择不同的物镜进行有效观察。
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