HNO3-H2O2微波消煮－ICP测定植物样品微量元素含量的操作方法及注意事项 （中国农业大学植物微量元素营养与人体健康研究小组）
一、 植物样品的前处理
1. 植物样品的洗涤
从田间或是其它地方取回的实验材料，首先要进行清洗，目的是去掉材料本身所带的泥土等杂质，保证试验结果的真实性。洗涤步骤：用自来水快速洗2-3次后，用去离子水快速冲洗2-3次至干净。
注意事项：（1）快速冲洗，避免长时间浸泡在水中；（2）样品尽量完整，避免过多切口而造成污染和养分流失；（3）所有样品清洗的时间和步骤尽量一致；（4）对于籽粒样品，应放在塑料网筛中直接快速用去离子水冲洗；（5）特别注意去掉杂质（非样品物质）。
2. 植物样品的烘干
清洗完毕后，甩干水后将实验材料装进信封内，放入烘箱进行烘干。温度为65－70℃，连续烘48小时。如果是鲜样，应在105℃下杀青30min，然后再按上面的条件进行烘干。经检查样品烘干后，关掉烘箱，待温度降到室温后，再称取干重，并将样品保持干燥状态。
注意事项：（1）信封上应用铅笔注明样品编号、取样时间、取样地点、学生姓名等；（2）烘箱要开排风设置；（3）湿样和干样应分开烘；（4）如果要杀青，应事先将烘箱温度调到105℃；（5）烘箱中样品不要放得太满。 (6)样品烘干过程中应注意防止金属粉末等的污染,使用不锈钢烘箱。
3. 植物样品的粉碎
称取干重后，进行样品粉粹。原则上应将采取的所有样品进行粉碎，混匀后放在事先写好编号的小封口袋中。
注意事项：（1）如果样品较大，应先用剪刀剪粹后再进行粉粹；（2）如果样品较多，应剪粹后混匀用四分法取适量样品进行粉粹；（3）用于微量元素测定的样品应用不锈钢或玛瑙粉碎机粉样，避免用铁制品；（4）样品一定要磨细，保证样品的均一性；（5）避免交
叉污染，及在两个样品之间用喷清洗所有磨样用具；（6）磨好的样品放在封口袋中，应保持干燥状态。（7）样品必需烘干后再粉。最好及时测定，如果要重新测定以前的样品，最好再烘干一下。
4. 植物样品的消煮－HNO3-H2O2－微波消煮
4.1 实验前药品及仪器准备
4.1.1 实验材料
（1）主要试剂：
用于消煮样品的试剂：优级纯的浓HNO3和30% H2O2
用于清洗容器的试剂：化学纯的HNO3或HCl
（2）其它用品：高纯水、烧杯、25 ml容量瓶、加样或5ml移液管（2个）、天平（精确至0.0001g）、10ml离心管（一次性使用，用于存放消煮后的溶液）、吸水纸、洗瓶、小漏斗、称量纸、牛角匙、记号笔、塑料滴管、乳胶手套（无化石粉）etc…
4.1.2 实验用具处理
容量瓶、小漏斗、移液管等需洗涤的仪器在使用前需用1：10硝酸（化学纯即可）或1：8盐酸（化学纯即可）浸泡3小时以上，然后用自来水冲洗2－3次后再用去离子水清洗干净，放在干净的密闭容器中。
注意事项：用于清洗的稀酸用一个固定的容器，最多洗两次后更换
4.2 样品消煮
4.2.1称样
在分析天平（精确至0.0001g）上用牛角勺称取待测样品～0.5g，各个样品之间称量控制在0.001g以内，记录数据。将样品小心转移至干净且干燥的消煮管内，放在管架上，按顺序放好。编号可以按此进行编号：如CK1（1）、CK2（2）、标样1（3）、标样2（4）、待测样品（5—40）。
注意事项：（1）称样时混匀样品；（2）称样时一定要避免交叉污染；（3）编号一定要与
管号对应。（4）称量纸应折成槽状，样品应放到消煮管底部，避免沾在壁上；（5）每次（40个样）都要称取1个标样和2个空白。
4.2.2 加HNO3
用移液管向消煮管内加入5ml优级纯的浓HNO3，摇匀后盖上盖子后过夜。
注意事项：（1）样品不要挂壁；（2）加完酸后一定要摇匀；（3）加完酸后一定要过夜，且盖好盖子。
4.2.3 加H2O2
第二天消煮前，每个消煮管中加4ml优级纯的H2O2， 摇匀后，拧紧管盖。
注意事项：（1）加完H2O2后要注意摇匀，然后拧紧盖子；（2）各个消煮管的盖子拧紧的程度要一致。
4.2.4 消煮
将消煮管按顺序对称摆放在消煮炉转盘上，确保无误！开始进行消煮。消煮完毕后，取出消煮管并放在管架上，冷却30min，轻轻拧开管盖放出内部气体。
程序介绍：GEN 1200FE1—Xpress
stage | power | RAMP | control | HOLD |
1 | 1200w | 06:00 | 120℃ | 02:00 |
2 | 1200w | 04:00 | 150℃ | 05:00 |
3 | 1200w | 04:00 | 185℃ | 20:00 |
| | | | |
整个过程包括4个阶段，除上述3个stage以外，之后还有一个冷却过程，大约需要25min。因此，一次消煮共需时间大约70min。
4.2.5定容
将消煮液转移至25ml洗净的容量瓶（已编号）中，先用高纯水清洗盖子，再少量多次用高纯水清洗消煮管2次并转移入容量瓶中，最后用高纯水洗小漏斗后再定容摇匀。静置1小时以上后转移上清液至10ml离心管内保存。
注意事项：（1）离心管的管号一定与消煮管号一致；（2）容量瓶上放干净的小漏斗；（3）注意不要撒漏，保证全部转移：（3）检查离心管的盖子是否盖紧；（4）不能随便中途停机。（5）容量瓶一定要摇匀，至少10次以上。（6）转移到离心管是可先用定容液润洗离心管
5．消煮管和容量瓶、小漏斗的清洗
（1）容量瓶和小漏斗的清洗：转移并检查无误后立即将容量瓶中溶液倒掉，并用自来水冲洗2次以上后，再浸泡在10%的稀酸（1：10的硝酸或盐酸）中至少3个小时，然后再用自来水冲洗3次，最后再用去离子水清洗3－4次。
注意事项： （1）用完后立即清洗；（2）洗净后放在干净的容器中，备下次用。
（2） 消煮管的清洗：消煮管中的溶液转移完后，立即用自来水冲洗，控干水分后加10ml HNO3，拧紧管盖，然后按清洗管子的程序进行。程序如下：
使用程序：XI—Xpress
stage | power | RAMP | control | HOLD |
1 | 1200w | 10:00 | 180℃ | 10:00 |
| | | | |
之后是25min的冷却阶段，一次消煮共需时间大约45min。消煮程序完毕后，取出消煮管，倒掉其中的溶液，再用去离子水清洗管子3－4次，倒扣晾干备用。
注意事项：（1）加酸之前要先用自来水洗；（2）加完酸后，一定要拧紧管盖，按洗涤程序进行；（3）洗涤程序完后，立即用去离子水洗涤；（4）不能将消煮管放在烘箱烘干，应倒扣后让其自然晾干。
6. 样品测定
用该方法消煮的样品可以直接测定Fe、Zn、Mn、Cu微波杀青、P、K、Ca、Mg等元素含量。可以用ICP，有些元素的测定也可以用AAS。
6.1 配制标准曲线溶液：最好自行配制，标准溶液酸的浓度与消煮液中酸的浓度接近最好，标准溶液平时应放置在冰箱中（保鲜温度），但不宜放置时间过长；
6.2 测定方法的选择：与负责ICP仪器的老师共同确定测定方法，包括测定条件
6.3 样品测定：具体操作方法：
（1） 机器预热约2h；
（2） 测定water（F5）和标准溶液（F6）；确定标准曲线（Calib）
（3） 样品测定（F7）；包括空白、标样和待测样品
（4） 打印结果：定结果会按照样品顺序自动地打印出来，在打印结果中，可以得到如下信息：测定方法、测定时间、所测元素种类、强度、元素含量、标准偏差等。
（5） 结果计算
X（mg/kg）=（D—B）×25 (ml) / m
其中，X: 样品中养分含量（mg/kg）;D：样品测定值 （mg/L）；B：空白值(mg/L)；m：样品质量(g)
注意事项：(1）样品消煮完后尽快进行测定，不宜放置时间太长；（2）测定时首先要先空白和标样，确定没有问题后再开始样品的测定；（3）每测定20个样品后需要校准一次标准曲线；（4）必需做清楚和详尽的记录，包括文字记录和文件记录，切记在打印结果上注明
日期、测定样品性质、样品编号等，并做备份；（5）测定完成后尽快整理结果，并与导师讨论；（6）如果空白和标样结果不可靠，则与此相关的所有样品的测定结果无效；（7）测定样品时同时测定样品中Al的含量，用以判断样品是否有土壤污染。
7. 注意事项
1． 在不清楚的时候一定问清楚后再进行；
2． 实验过程中的每一步都要小心可能存在的污染。实验操作需要规范、认真仔细。
3． 标样应放置在密闭容器中，防止吸潮。并且每次用完后应立即盖好盖子。
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