杜凤华; 闵旭红; 孔维博; 孔祥舟; 梅晓冬
【期刊名称】《《重庆医学》》
【年(卷),期】网络电视直播系统2019(048)014
【总页数】7页(P2386-2392)
【关键词】MutT同源物1; 癌;非小细胞肺; 氧化性应激; 预后; 无病生存
【作 者】杜凤华; 闵旭红; 孔维博; 孔祥舟; 梅晓冬
【作者单位】安徽医科大学附属省立医院呼吸内科 合肥233001; 安徽省胸科医院放射介入科 合肥233003
【正文语种】薄膜制备中 文
【中图分类】n-苯基咔唑R734.2
肺癌是全球癌症相关死亡的主要原因，发病率高且严重危及人类的健康[1]。随着现代分子肿瘤学的进步，各种分子靶向取得了较大进步，但肺癌的预后仍然很差[2]，亟须寻新的肺癌预后分子标志物和靶点。有学者认为癌症的发生是细胞在各种内外环境刺激下导致原癌基因和抑癌基因平衡失调、细胞增殖失控的过程[3]。氧化应激、缺氧和表观遗传障碍在癌症的发生、发展中起到重要的作用。呼吸、正常代谢和炎性反应过程均产生活性氧(ROS)[4]，ROS可氧化核苷酸和蛋白质，诱导基因突变和导致细胞衰老[5]。ROS可氧化核苷酸库中的dGTP或直接氧化DNA中的鸟嘌呤碱基而产生8-氧代-鸟嘌呤(8-氧-G)。在DNA复制过程中，DNA聚合酶通常在模板DNA中插入8-氧代-dGTP，从而导致A到C或G到T的颠换突变[6]。
MutT同系物1(MutT homolog 1，MTH1)是一种氧化型嘌呤核苷三磷酸酶，将8-氧代-dGTP水解成其单磷酸形式，从而阻止DNA聚合酶将8-氧代-dGTP插入基因组[8]，对细胞基因组的稳态起到保护作用。暴露于烟草烟雾或电离辐射，会增加正常细胞中的ROS水平[7]，这可能导致核苷酸库中的8-氧-G积累。DNA中8-氧-G的过度积累可诱导细胞凋亡，因此癌细胞可能获得防止DNA中8-氧-G积累机制。事实上，MTH1在脑癌、乳腺癌和胃癌中表现丰富[8-9]。动物实验提示：MTH1是癌细胞增殖必需的酶，靶向MTH1可抑制由肿瘤细胞系发
展而来的肿瘤的增殖[10-11]。这些发现提示MTH1在癌症发展中起重要作用。尽管如此，MTH1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况和临床意义尚不清楚。本研究通过免疫组织化学方法检测197例NSCLC患者中MTH1蛋白的表达，探讨MTH1表达与患者临床病理因素和生存期之间的关系，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2011年3月至2013年3月安徽医科大学附属省立医院收治的可手术切除的NSCLC患者205例，均接受外科手术。纳入标准：(1)年龄大于18岁，病理诊断为NSCLC；(2)术前未接受放化疗。排除标准：(1)患者缺乏足够的肿瘤组织；(2)术后诊断为小细胞肺癌；(3)术后的随访资料不完整。最终纳入研究197例，对全部病理标准重新评估，TNM分类第8版用于病理分期[12]。
1.2 方法
1.2.1 临床资料收集 从患者的病历资料中提取年龄、性别、吸烟史、BMI、辅助、病理诊断、间质性肺炎和表皮生长因子受体(EGFR)突变等临床病理信息。
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1.2.2 随访 患者手术后即开始随访，术后的前3年每隔6个月行1次胸部CT和血液肿瘤标志物检查，以后每年进行1次胸部CT检查，对怀疑复发的患者，采用PET检查或病理活检确诊。
1.2.3 病理组织MTH1的免疫组织化学 病理组织切片脱蜡后，用过氧化物酶封闭剂(080-01186 Wako，日本)和蛋白封闭剂(19-2410-3 Sigma-Aldrich，美国)处理标本。将组织切片与抗MTH1抗体(1∶100的稀释度，兔抗人MTH1抗体，Sigma-Aldrich，美国)温育。然后与DAKO ENVISION+聚合物/辣根过氧化物酶(HRP，抗兔;K4003 Dako，Tokyo，日本)温育。液体DAB+发团(049-22831，Wako，Osaka，日本)用于显现抗原。用苏木素对组织标本进行复染以区分细胞核和细胞质。
1.2.4 MTH1免疫组织化学评分和患者分组 两位独立的病理学家评估免疫组织化学的结果，根据MTH1染细胞占总癌细胞比例确定评分[18]：1分，0～<20%；2分，20%～<40%；3分，40%～<60%；4分，60%～<80%；5分，80%～100%。同时，本研究根据MTH1染评分进行受试者工作曲线分析其预测患者总生存率和无瘤生存率，ROC曲线提示最佳截断值为3.234和3.443，将MTH1表达截止值设定为3分。<60%的肿瘤细胞染评定为MTH1高表达组；≥60%的肿瘤细胞染评定为MTH1低表达组。 1.3 统计学处理 采用SPSS17.0软件进行数据分析，计量资料以表示，比较采用Fisher′s精确检验；计数资料以频数或百分率表示，比较采用χ2检验；使用Kaplan-Meier方法估计存活率，使用对数秩检验比较MTH1高低表达患者的生存期的区别，采用Cox比例风险模型分析患者总生存率和无瘤生存率的影响因素，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 全部患者的临床特征和MTH1表达情况 全组患者197例，其中男120例(60.9%)，女77例(39.1%)，中位年龄54(38，83)岁。104例(52.8%)患者吸烟史大于20包/年。腺癌140例(71.1%)，鳞癌42例(21.3%)，其他类型15例(7.6%)。在74例肿瘤中评估EGFR突变状态，24例(32.4%)患者存在EGFR突变，见表1。MTH1主要在肺癌细胞的细胞核中表达，细胞质中无表达，正常的肺组织细胞存在少许表达，见图1。其中MTH1高表达组111例(56.3%)，低表达组86例(43.7%)。
2.2 MTH1表达与临床病理参数之间的关系 MTH1高表达和男性、吸烟大于20包/年、鳞癌、病理分期大于Ⅰ期、肿瘤直径大于3 cm、淋巴结转移、胸膜浸润阳性、淋巴管浸润和血管浸润显著性相关(P<0.05)。在评估EGFR突变状态的74例患者中，野生型EGFR倾向于与
MTH1高表达相关(P<0.05),见表1。
A:MTH1高表达组；B:MTH1低表达组
图1 NSCLC癌组织免疫组织化学染(100×)
表1 MTH1高表达和低表达组与临床病理参数之间的关系[n(%)]项目例数(n=197)MTH1低表达组(n=86)MTH1高表达组(n=111)P性别0.029 7 男120(60.91)45(52.33)75(67.57) 女77(39.09)41(47.67)36(32.43)年龄(岁) 0.643 3 <75148(75.13)66(76.74)82(74.77) ≥7549(24.87)20(23.26)29(26.13)吸烟(包/年)<0.000 1 <2093(47.21)55(63.95)38(34.23) ≥20104(52.79)31(36.05)73(65.77)组织学0.006 4 腺癌140(71.07)73(84.88)67(60.36)(腺癌 vs. 鳞癌) 鳞癌42(21.32)12(13.96)30(27.03) 其他15(7.61)1(1.16)14(12.61)病理分期<0.000 1 Ⅰ期118(59.90)68(79.07)50(45.05) ≥Ⅱ期79(40.10)18(20.93)61(54.95)肿瘤直径(cm)0.001 2 <30105(53.30)57(66.28)48(43.24) ≥3092(46.70)29(33.72)63(56.76)淋巴结转移0.000 3 阴性139(70.56)72(83.72)67(60.36) 阳性58(29.44)14(16.28)44(39.64)胸膜浸润0.006 3 阴性121(61.42)62(72.09)59(53.15) 阳性76(38.58)24(27.91)52(46.85)淋巴管浸润0.017 1 阴性165(83.76)78(90.70)87(78.38) 阳性32(16.24)8(9.30)24(21.62)血管浸润0.000 2 阴性120
(60.91)65(75.58)55(49.55) 阳性77(39.09)21(24.42)56(50.45)EGFR突变a0.066 0 阴性50(25.38)14(16.28)36(32.43) 阳性24(12.18)12(13.95)12(10.81)
a：n=74
2.3 MTH1高、低表达组总生存率及无瘤生存率之间关系 Kaplan-Meier曲线的生存分析显示，MTH1高表达组预后显著性低于MTH1低表达组。MTH1高表达组和MTH1低表达组5年总生存率分别为81.6%和92.3%(P=0.001 1)，5年无瘤生存率分别为55.0%和83.7%(P=0.000 2)，见图2。
图2 MTH1高低表达患者的总生存率和无瘤生存率的比较
燃烧炉图3 肺腺癌MTH1高、低表达组的总生存率和无瘤生存率比较
2.4 肺腺癌和肺鳞癌MTH1表达与总生存率及无瘤生存率的关系 肺腺癌患者MTH1高、低表达组5年总生存率分别为76.5%和95.4%(P=0.003 1)，无瘤生存率分别为55.3%和85.3%(P=0.000 7)。MTH1表达对肺鳞癌患者的总生存率及无瘤生存率无显著影响,见图3、4。
图4 肺鳞癌MTH1高、低表达组的总生存率和无瘤生存率比较
2.5 患者总存率的单因素和多因素分析 单因素分析显示：MTH1与病理分期、肿瘤直径、淋巴结转移、胸膜浸润、淋巴管浸润和血管浸润一起构成总生存率的显著性危险因素；而多因素分析提示：MTH1表达(HR=1.713,95%CI:1.865～4.118,P=0.047 0)和淋巴结转移(HR=9.190,95%CI:2.824～39.457,P<0.01)是患者总生存率的独立危险因素，见表2。
2.6 患者无瘤生存率的单因素和多因素分析 单因素分析显示：MTH1与性别、吸烟程度、病理分期、肿瘤直径、淋巴结转移、胸膜浸润、淋巴管浸润和血管浸润一起构成总生存率的显著性危险因素；而多因素分析提示：MTH1表达(HR=1.605，95%CI：1.627～3.248,P=0.039 0)和淋巴结转移(HR=4.502，95%CI：1.942～11.546,P=0.000 3)是患者无瘤生存率的独立危险因素，见表3。
表2 总体生存率的单因素和多因素分析(n=197)项目单因素分析HR(95%CI)P多因素分析HR(95%CI)P性别0.077 90.539 2 男性1 女性0.552(0.269,1.067)0.764(0.320,1.118)年龄(岁)0.612 80.086 6 <751 ≥751.207(0.559,2.397)2.093(0.895,4.681)吸烟(包/年)0.050 00.867 5 <201 ≥201.890(1.000,3.688)1.079(0.454,2.715)组织学0.031 90.847 0 腺癌1 鳞癌2.251(1.077,4.479)0.924(0.404,2.052) 其他2.212(0.741,5.396)0.141 51.336(0.415,3.588)0.600 7
续表2 总体生存率的单因素和多因素分析(n=197)项目单因素分析HR(95%CI)P多因素分析HR(95%CI)P病理分期<0.000 10.700 8 Ⅰ期1 ≥Ⅱ期7.632(3.759,17.124)0.760(0.167,2.907)肿瘤直径(cm)0.000 50.135 0 <301 ≥303.141(1.627,6.439)1.794(0.835,3.988)淋巴结转移<0.000 1<0.000 1 阴性1 阳性9.945(5.066,20.950)9.190(2.824,39.457)胸膜浸润<0.000 10.038 8 阴性1 阳性4.468(2.332,8.993)2.216(1.041,4.910)淋巴管浸润0.000 20.911 0 阴性1 阳性3.920(1.980,7.455)0.956(0.428,2.066)血管浸润<0.000 10.121 5 阴性1 阳性4.729(2.448,9.698)1.846(0.851,4.155)MTH1表达0.000 80.047 0 低表达1 高表达3.247(1.604,7.271)1.713(1.865,4.118)
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