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1促性腺激素释放激素类似物应用简述
促性腺激素释放激素（GnRH）是由下丘脑分泌的一种肽类物质，主要作用于生殖系统。自1971年分离出GnRH以来，到目前GnRH家族至少已有28个类型，其中15种来自脊椎动物，13种来自无脊椎动物，除章鱼外所有的GnRH肽都由10个氨基酸组成，其分子长度和部分氨基酸序列非常保守[1]。但GnRH 的半衰期很短，通过对GnRH化学结构进行改性，置换或者去除部分氨基酸，可得到一些化学结构与GnRH相似，但药效显著提升的化合物，称为GnRH类似物，依据它们对垂体促性腺激素释放激素受体的作用性质而分为GnRH激动剂与GnRH拮抗剂[2]。GnRH受体在体内分布广泛，随着对天然氨基酸修饰技术的进步，GnRH类似物已逐步应用于临床各类性激素相关疾病。其中GnRH类似物应用于前列腺癌的一直受到关注。 前列腺癌是老年男性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，也是世界第四大高发性癌症。2019年统计美国男性恶性肿瘤发病率前三位中前列腺癌居于榜首，占新发癌症的25%左右。最新数据显示我国肿瘤登记地区前列腺癌发病率为21.62/10万，列男性恶性肿瘤发病率的第6位[3-4]。虽然单论发病人数和死亡人
数并不属于我国主要高发癌症，但进行回顾统计发现近年来我国前列腺癌新增病人数、死亡人数、发病率及死亡率具有大
张艺欣1，2，高英3
（1常州大学制药与生命科学学院，江苏常州 213164；2江苏豪森药业股份有限公司，江苏连云港 222000；
3江苏恒瑞医药股份有限公司，江苏连云港 222000）
【摘要】促性腺激素释放激素是由下丘脑分泌的一种肽类物质，主要作用于生殖系统。经过人工合成改性、置换或者去除部分氨基酸得到了药效更优的促性腺激素释放激素类似物。该类化合物依据对垂体促性腺激素释放激素受体的作用被分为激动剂及拮抗剂。目前被广泛用于前列腺癌的临床。本文综述了上市的七种用于前列腺癌的促性腺激素释放激素类似物的化学合成方法，并展望了多肽类药物工业合成的发展前景。
【关键词】促性腺激素释放激素类似物；前列腺癌；化学合成；多肽药物
Progress in the chemical synthesis of gonadotropin releasing hormone analogues ZHANG Yi-xin1，2，Gao Ying. 1.School of Pharmaceutical Engineering and Life Science ， Changzhou University， Jiangsu 213164 ， China；2. HANSOH Pharmaceutdiacl Group Company Limite， Jiangsu，222000， China.
【Abstract】Gonadotropin releasing hormone is a peptide secreted by hypothalamus， which mainly acts on the reproductive system. After modification，replacement or removal of some amino acids， a more effective gonadotropin releasing hormone analogue was obtained. These compounds are classified into agonists and antagonists according to their effects on the pituitary gonadotropin-releasing hormone receptor. At present， it is widely used in the clinical treatment of prostate cancer. In this paper， seven methods of industrial synthesis ofgonadotropin-releasing hormone analogues for the treatment of prostate cancer were reviewed， and the prospect of industrial synthesis of polypeptide drugs was prospected.
【Key words】Gonadotropin releasing hormone analogue；Prostatic cancer；Industrial synthesis；Polypeptide drugs
幅增加。并且由于我国男性人口基数庞大，因此前列腺癌也是影响我国男性健康的主要问题之一，对
泪血症于前列腺癌的发病机制及后续需要不断深入研究。针对前列腺癌的传统方法有等待观察和主动监测、根治性手术、外放射、近距离照射、化学及内分泌等，近年对于免疫亦有深入的研究[5]。但寻安全有效的方法仍是抗肿瘤领域需要解决的问题。多肽类药物相比于化学小分子药物具有很多独特的优势：高活性、高特异性、低毒性、覆盖面广等，所以目前多肽药物已被大量用于各种疾病，如糖尿病、抗肿瘤等[6-7]。多肽类药物抗肿瘤的主要机制有诱导肿瘤细胞凋亡、诱导肿瘤细胞坏死、抑制肿瘤血管生成、激活抗肿瘤免疫应答等[8]。多肽由数个至数十个氨基酸缩合而成，目前生产的多肽类药物主要由化学方法合成。近年随着固相合成技术的改进，高活性缩合剂的发现，大规模制备技术的成熟，使得化学合成多肽愈发容易。商业化的全自动多肽合成仪自经过数十年的发展已发展至第3代。通过全过程程序自动控制、自动加料、在线流量计温度计实时监控等多重保障使合成反应在密闭空间内处于可控状态，大大降低操作者劳动强度及发生偏差的风险。基于多肽合成仪的改进仍在继续进行，CS Bio公司及Intavis公司为多肽合成仪配制UV实时监测功能，在整个合成反应中不间断监测反应液的UV吸收信号，使得对反应进程的监控更加明晰。且药物靶点的不断增多也使得多肽药物有了飞速发展。目前本文就已经上市的七种前列腺癌多肽类药物工业合成方法作一综述，以期对抗前列腺癌多肽工业化合成有进一步了解。 2七种前列腺癌的多肽药物工业合成
2.1阿巴瑞克
阿巴瑞克（abarelix）由美国生物制药公司Praecis制药公司（Praecis Pharmaceuticals）开发。于2003年经FDA批准上市，用于晚期前列腺癌。于2011年经EMA批准上市。阿巴瑞克是GnRH阻滞剂，通过直接抑制LH与FSH分泌减少睾丸内睾酮生成，用于降低无其他可供选择方法的晚期前列腺癌患者的睾丸激素水平。氨基酸序列为Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Asn-Leu-Lys（iPr）-Pro-D-Ala-NH2。由于出现了严重的系统过敏反应，FDA于2005年5月将其撤出美国市场，目前仅欧洲部分国家在使用。成都圣诺生物制药有限公司马中刚等[9]将MOBHA树脂作为载体，偶合剂为DIC或其他高性能偶合剂。依次与Fmoc-D-Ala-OH 、Boc-Lys（ipr，Z）、Fmoc-Leu、Fmoc-D-Asn（Trt）、Fmoc-N-Me-Tyr（tBu）、Fmoc-Ser（tBu）、Fmoc-D-Pal、Fmoc-D-Cpa、Ac-D-Nal偶合反应。反应结束后使用质量百分浓度5%～10%的溴化氢/三氟乙酸溶液作为裂解液裂解反应，后使用无水乙醚析晶，干燥后得到类白阿巴瑞克粗品。
2.2地加瑞克
地加瑞克（degarelix）由瑞士辉凌公司制药（Ferring）开发。于2008年12月经FDA批准上市，2009年EMA批准上市。该药适用于晚期雄性激素依赖型前列腺癌患者皮下给药。地加瑞克是第3代GnRH阻滞剂药物，为十肽类似物。氨基酸序列为Ac-D-2-Nal-D-4-Cpa-D-3-Pal-Ser-4-Aph（L-Hor）-D-4-Aph（Cbm）-Leu-Lys（iPr）-Pro-D-Ala-NH2。结构中包括7个非天然氨基酸（5个为D型）和3个天然氨基酸。相比于阿巴瑞克，地加瑞克在其分子的5，6位并入了P-尿基苯丙氨酸，减少了不良反应并且延
长了药物半衰期。江苏豪森药业闫雪峰等[10]将Rink Amide-AM Resin作为载体，偶合剂未说明。依次与Fmoc-D-Ala-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Lys（Ipr，BOC）-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-4-Aph（Cbm）-OH、Fmoc-Aph （L-Hor）-OH、Fmoc-Ser（tBu）-OH、Fmoc-D-3-Pal-OH、Fmoc-D-4-Cpa-OH、Ac-D-2-Nal-OH发生固相合成反应，裂解液为三氟乙酸∶水∶三异丙基硅烷＝95∶2.5∶2.5，后使用甲基叔丁基醚析晶，干燥后得类白地加瑞克粗品。兰州大学彭雅丽等[11]采用片段偶合的方法合成地加瑞克。用Fmoc固相策略合成侧链被保护的第1～4位氨基酸及第5～8位氨基酸片段序列，液相法合成侧链被保护的第9～10位氨基酸片段序列，将三段片段偶联得到全保护的地加瑞克，在三氟乙酸∶水∶三异丙基硅烷∶1，2-乙二硫醇＝92.5∶2.5∶2.5∶2.5的裂解体系中裂解脱除保护基，后使用乙醚析晶，干燥得到地加瑞克粗品。该法需要先进行两次四肽的偶合脱保护干燥，一次二肽的液相合成。片段合成完毕后进行两次偶合合成全保护肽链，经过裂解干燥得到目标化合物。片段合成法由于合成肽链短，因而杂质控制方面优于逐步偶合法。但值得注意的是片段偶合法由于拥有如下劣势，因此对于工业制备不超过20个氨基酸残基的肽链来说并不适用。首先片段偶合法操作步骤复杂，对于人员要求高。其次片段偶和合成周期长，若要缩短周期必须拥有多台反应设备同时制备片段，增加设备成本。最后片段偶和为确保反应达到收率，偶合时需要有一个片段过量参与反应，增加物料成本。因此对于短肽的工业合成来说，片段偶合法并不是首选方法。 2.3布舍瑞林
布舍瑞林（Buserelin）由德国赫斯特公司（Hoechst AG）开发。1985年EMA批准上市后先后在意大利、英、法分别上市，但FDA未批准上市。布舍瑞林为GnRH激动剂。氨基酸序列为 Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser-Leu-Arg-Pro-NHET。使用初期可促使LH、FSH和性激素分泌增加，经1～2周开始产生相反作用，性激素分泌可降低到去势水平。临床主要用于前列腺癌、乳腺癌等。Ponsati.O.B.I等[12]使用二氯三苯甲基树脂（2-CTC）作为载体，DIC/HOBT作为偶合剂，依次与Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg（HCI）-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Ser（tBu）-OH、Fmoc-Tyr （ClTrt）-OH、Fmoc-Ser （Trt）-OH、Fmoc-Trp-OH、Fmoc-His（Mmt）和Pyr发生固相合成反应。先使用AcOH∶TFE∶DCM＝1∶2∶7的裂解液将合成肽链与树脂切割后用2% TFA/DCM裂解体系脱去肽的侧链保护基，最后对C 端羧基进行乙胺化加入乙醚析晶干燥就得到布舍瑞林粗品。
2.4亮丙瑞林
亮丙瑞林（Lupron）由日本武田药品工业株式会社（takeda chemical industries）开发。于1985年经FDA批准上市。亮丙瑞林为GnRH激动剂，可刺激垂体分泌促性腺激素，诱发生殖器官生成类固醇。长期大量使用会抑制垂体分泌促性腺激素及睾丸或卵巢甾类的生成，可或缓解多种性激素依赖性疾病如前列腺癌、子宫内膜异位症、子宫肌瘤、性早熟等[13]。氨基酸序列为pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHET。与布舍瑞林相比第6位氨基酸残基由D-ser替换为D-Leu。中肽生化有限公司李湘、徐琪[14]以PAM树脂为载体，使用DIC作为偶合剂，依次与Boc-L-Pro-OH、Boc-L-Arg（Mtr）-
压电陶瓷片OH、Boc-L-Leu-OH、Boc-D-Leu-OH 、Fmoc-L-Tyr（tBu）-OH、Fmoc-L-Ser（tBu）-OH、Fmoc-L-Trp（Boc）-OH、 Fmoc-L-His（Trt）-OH及pGlu-OH偶合反应后由EtNH2/THF（1∶1）反应体系胺解切割，用TFA加辅试剂（优选为茴香硫醚、苯甲醚、乙二硫醇）酸处理脱保护，使用乙醚析晶过滤，经干燥后得到亮丙瑞林粗品。原研厂家武田药品工业株式会社Fujino Masahiko等[15]将Boc-Pro-OH通过三乙胺连接到树脂上，采取Boc合成策略依次进行肽链的偶合，随后使用乙胺胺解树脂，用甲醇提取目标肽
链。最后使用氟化氢气体脱除侧链保护基团得到目的产物。原研工艺采用Boc策略需要反复使用具有强腐蚀性的三氟乙酸脱保护，可能导致副反应发生，且裂解树脂时需用到高危试剂氟化氢。整体工艺物料危险系数高、纯度收率较低、对于三废处理提出极高的要求等劣势导致其不适用于工业级别生产。而Fmoc 策略脱保护反应不需要强酸，且只有裂解时才需要用三氟乙酸，因此从安全生产及环保角度来说，Fmoc法具有极大的优势。
2.5戈舍瑞林
lcm液晶显示模块戈舍瑞林（goserelin）由英国帝国化学工业集团（Imperial Chemical Industries）开发。EMA与FDA分别于1987年和1989年批准上市。戈舍瑞林为十肽化合物，是GnRH激动剂，其效力为人体分泌GnRH的100倍，半衰期7 h，适用于可用激素的前列腺癌。氨基酸序列为pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser （But）-Leu-Arg-Pro-AzaGly-NH
2
。苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司夏丹等[16]以2-CTC树脂为载体，先于Fmoc-Pro 偶合后脱去Fmoc保护基，随后在HOBT/DIC与HBTU/DIPEA缩合体系下依次与Fmoc-Arg（NO2）-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Ser（tBu）-OH、Fmoc-Tyr（Bzl）-OH、Fmoc-Ser-OH、Fmoc-Trp-OH、Fmoc-His（Trt）-OH及pGlu缩合，随后先后在三氟乙醇/二氯甲烷1∶4的体系中脱树脂，加入盐酸氨基脲和PyBop 偶合得到保留侧链保护基的前体肽。在20%TFA/DCM体系中裂解，无水乙醚析晶，用甲醇溶解后在甲酸铵及Pa/c下反应脱除部分保护基。过滤后在纯水中析晶得到戈舍瑞林粗品。
2.6组氨瑞林
组氨瑞林（Supprelin）由维勒拉制药公司（alera Pharmaceuticals）开发。FDA与EMA先后于2004年与2010年批准上市。作为晚期前列腺癌的姑息用药。氨基酸序列Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His-Leu-Arg-Pro-NHET。与布舍瑞林相比第六位氨基酸残基由D-ser替换为D-His。上海吉尔多肽有限公司徐红岩、张旭光[17]将二氯三苯甲基树脂（2-CTC）作为载体，TBTU 和 HOBT作为缩合剂，碱性条件下与Fmoc-Pro-OH反应生成Fmoc-Por-CTC树脂后依次与Fmoc-Arg（pbf）-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-His（Bzl）-OH、Fmoc-Tyr（tbu）-OH、Fmoc-Ser（tbu）-OH、Fmoc-Trp（Boc）-OH、Fmoc-His（Trt） 和Pyr发生固相合成反应。用TFA∶DCM 为 1∶99的切割液把肽从树脂上切割下来乙
胺化后，再用TFA∶TIS：H2O为95∶2.5∶2.5溶液脱去多肽的侧链保护基，最后使用乙醚析晶干燥后就得到组氨瑞林粗品。
2.7曲普瑞林
曲普瑞林（triptorelin）由瑞士德彪集团（Debiopharm S.A.）公司开发，于1997年经EMA批准上市，于2010年经FDA批准上市。曲普瑞林为十肽化合物，与天然产物相比，将第六位的甘氨酸变为右旋氨酸取代，延长药物半衰期。其氨基酸序列为pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2。成都天台山制药有限公司赵东明等[18]以Rink Amid MBHA树脂为载体，使用HBTU/HOBT/DIEA组合作为偶合体系，依次与Fmoc-Gly-OH 、Fmoc-Pro-OH、Fmoc -Arg（Pbf）-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Trp （Boc）-OH、Fmoc-Tyr（tBu）-OH、Fmoc-Ser（tBu）-OH、 Fmoc-Trp（Boc）-OH、Fmoc-His（Trt）-OH及pGlu-OH偶合反应。偶合反应结束后由裂解液（95%三氟乙酸/2%TIS/2%EDT/1%纯化水）切割，使用乙醚析晶干燥后得到曲普瑞林粗品。
3多肽药物化学合成中的共性问题
以笔者所接触的多肽类项目而言，多肽工业合成主要需要考虑肽链的组装方式、氨基酸的保护方式及载体树脂的选择、偶合体系的选择、裂解体系的选择以及困难片段及杂质的研究等方面。
3.1 肽链的组装方式
多肽合成按反应体系分为固相合成及液相合成，按反应顺序可分为片段合成及逐步合成。由于工业生产不同于研发小试，需要综合考虑成本收益，操作可执行性。因此绝大多数公司选择固相合成，从C-N端逐步偶合的方式合成多肽类药物。对于十肽化合物来说，从C-N端逐步偶合无论从收率还是纯度来说均在可接受范围内，后期经过分离纯化可以得到理想的目标产物，因此前文各公司技术人员均采用逐步偶合法合成目标产物。对于短肽来说固相逐步合成法优势明显，但对于20个氨基酸残基以上的多肽来说逐步合成收率会偏低，缺失肽及消旋肽杂质会大大增加，因此会综合成本对比考虑片段合成和逐步合成择优而定。
3.2 氨基酸的保护方式及载体树脂的选择
在工业固相合成中，用于α-氨基的保护基团主要有Fmoc 及Boc。虽然Fmoc基团保护的氨基酸价格高于Boc保护的氨基酸，从成本角度考虑应当优选Boc法。但无论是上述公司技术人员或是笔者所接触项目来看，选择Fmoc法合成多肽占据绝大多数比例。究其原因在于Boc法需要反复用酸脱保护，因此可能导肽链与树脂连接断裂，侧链发生副反应，导致合成纯度及收率大大降低。而Fmoc法脱保护时多选用20%六氢吡啶/ DMF处理，避免了强酸处理，合成结束后再用酸脱去侧链的保护基，对于整个合成反应来说更容易控制。且针对Fmoc合成法的配套原料、试剂及合成设备日益成熟，因此可以推测在今后的一段时间内，Fmoc法仍然会是多肽合成的主流方法。与氨基酸C端相连的载体按性质可分为氨基树脂、羟基树脂、氯甲基树脂等，确定反应路线时需根据目标化合物结构选取合适的树脂进行反应。
目前商业化树脂种类繁多，但目前工业生产后树脂均当一次性固废处理，不仅增加了环保压力，而且也是一种资源浪费。因此未来对于合成后树脂如何处理需要进一步研究。
3.3 偶合体系的选择
对于多肽固相合成偶合体系来说，主要有碳二亚胺型、BOP 族、AOP族、磷酸酯型及其他类型。目前工业多用的商业化缩合体系为DIC/HOBT、HBTU/HOBT/DIEA及DEPBT/DIEA等。对于不易偶反合的氨基酸可以两次偶合，每次偶合选用不同的偶合体系。针对短肽合成相对容易，在超过20个氨基酸残基的多肽合成时，往往会遇到困难序列，经过两次不同体系的偶合后仍不能完全应，这是只能采取乙酸酐封闭的方法封闭未反应的基团，生成分子量不同的残缺肽。或者考虑对于困难序列采取片段偶合达到反应目的。对于困难片段的处理要综合后期纯化制备难易程度以及成本等多方面因素选择合适的策略。另外对于更高效的偶合体系的开发仍然具有研究意义。
3.4 裂解体系的选择
多肽合成完毕后需切除固相载体树脂及多余的保护基团才能获得目标产物。因此需要结合载体树脂的种类及保护基种类选取裂解体系。Fmoc合成策略中经典的裂解体系为三氟乙酸体系，究其原因是因为其适用于绝大多数树脂，且能脱下氨基酸残基保护基。优选辅助裂解试剂为TIS、DTT及纯化水等。根据不同反应调整各试剂比例，往往能获得较好的效果。裂解完成后置于醚中经析晶过滤干燥单元操作
后即可得到目标产物。醚类溶剂可选乙醚或甲叔醚。但大批量生产时乙醚的大量应用会有很高的安全隐患，因此目前优选甲叔醚进行析晶。
4总结与展望
针对于多肽药物的工业化生产，逐步固相合成已成为各生产企业的首选方法。由于工业化生产前已经经过小试及中试的开发研究，因此针对前文所述肽链的组装方式、氨基酸的保护方
式及载体树脂的选择、偶合体系的选择、裂解体系的选择以及困难片段及杂质的研究等方面必然已经做过充分的研究论证，应该得到了最优的合成方案。但转移至工业化生产后仍会产生问题，究其原因主要在于固相合成反应为非均相反应，随着反应体系的增大，必然导致反应的不完全。虽然通过增加物料投料量，延长反应时间，适当提高反应温度，增加氮气鼓泡流量等方法能提高反应效率，但伴随而来的副反应的发生及成本的升高往往会使生产企业陷入两难境地。这时需要综合成本收益进行综合判断，出最佳平衡位置。且工业合成中对氨基酸脱保护反应的监控多为茚三酮或二级胺检测，两种检测均为定性检测，是“全”或“无”的判断，并不能定量检测反应。前文描述的带UV实时监测的全自动多肽合成仪均为进口品牌，设备昂贵且后期维护运营成本过高，因此亦不是公司首选方案。针对于上述问题，目前可以考虑针对反应过程控制中增加紫外检测。即进行茚三酮或二级胺检测的同时，取反应液使用紫外分光光度计对吸收值进行跟踪。虽然会增加人力成本，但相比于全自动UV在线监测设备或放弃对吸收值进行监测来说，这种方法无疑是折中的可取之法。
随着药物研究的日渐深入，全新的化学小分子药物的开发已经越来越难，因此学者把目光转向多肽类药物，截至目前，全球多肽药物已经突破千种。2019年全球销售额超过十亿美元的重磅肽类药物有十个，其中本文所述的亮丙瑞林上榜。可以预见随着研究的不断深入，越来越多的多肽类 “重磅”将在医药市场展露手脚。相关行业预测到2025年中国多肽类药物行业市场规模有望突破千亿大关。因此，现阶段对于多肽类药物的工业化生产来说未来有两个方面工作需要去落实。对于成熟产品来说，要不断寻求更加优化的反应条件，降低合成成本，不断提升产品的质量，增强产品核心竞争力。另一方面要加强新产品的研究，通过对反应条件的摸索，反应设备的优化争取早日将只能在实验室合成的困难多肽化合物成功商业化。
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HPLC法测定三黄肠溶胶囊中4种成分的含量及溶出度
江慧 ，常金花，刘翠哲＊
（河北省中药研究与开发重点实验室，承德医学院中药研究所，河北承德 067000）
【摘要】目的 建立HPLC法测定三黄肠溶胶囊中4种有效成分含量的方法，考察三黄肠溶胶囊溶出度。方法 应用HPLC法测定三黄肠溶胶囊中黄芩苷、大黄素、大黄酚和盐酸小檗碱的含量；采用《中国药典》2015版溶出度测定第二法，测定三黄肠溶胶囊中以上4种成分在pH ＝ 1.2和pH ＝ 6.8两种溶出介质中的溶出度，计算并绘制累积溶出度曲线。结果 三黄肠溶胶囊中4种成分含量均符合规定；三黄肠溶胶囊在pH ＝ 1.2盐酸溶液中2 h内形态完整，在pH ＝ 6.8磷酸盐缓冲溶液中1 h内完全崩解，黄芩苷、大黄素、大黄酚和盐酸小檗碱的溶出度分别为96.94%，78.56%，32.29%，17.49%。结论 本实验建立的含量测定方法具有简便，准确、专属性强的特点，可用于三黄肠溶胶囊质量评价和溶出度考察。
【关键词】HPLC；三黄肠溶胶囊；质量评价；溶出度
HPLC method to determine four active ingredients and the dissolution of Sanhuang Enteric-coated Capsules JIANG Hui， CHANG Jin-hua， LIU Cui-zhe. Hebei provincial key laboratory of Traditional Chinese Medicine research and development， Institute of Traditional Chinese Medicine， Chengde medical college， Chengde 067000， China.
【Abstract】Objective To establish an HPLC method for determining four active ingredients in Sanh
uang Enteric-coated Capsules， and study the dissolution of Sanhuang Enteric-coated Capsules. Methods The contents of baicalin， emodin， chrysophanol and berberine hydrochloride in Sanhuang Enteric-coated Capsules were determined by HPLC； meanwhile，the second method of dissolution determination in Chinese Pharmacopoeia 2015 was used to determine its dissolution in the two dissolution media of pH＝1.2 and pH＝6.8， and the cumulative dissolution curve was calculated and drawn. Results The contents of four ingredients in Sanhuang Enteric-coated Capsules are in compliance with the regulations； Sanhuang Enteric-coated
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