过硫酸氢钾复合盐消毒作用实验研究

过硫酸氢钾复合消毒作用实验研究
过硫酸氢钾复合盐是国内新近生产的一种非氯氧化消毒剂,其水溶液接近中性,溶解水后产生各种高能量、高活性的小分子的自由基、活性氧衍生物等过氧化氢的衍生物,能破坏微生物细胞膜的通透性屏障,使细胞内容物流失,丧失能量依赖性膜运输系统的功能,并且可与核酸中金属离子如钙、铁等结合,产生自由· OH 基,作用于DNA 的磷酸二酯键而导致其断裂[1]。对RNA 亦有类似的破坏作用[2]。过硫酸氢钾复合盐作为水处理消毒剂具有很强的氧化能力,可以杀灭水中微生物,去除污水中的有机物,其代谢产物仅使水中的K+ 、SO24+有少许增加,不会对人类和环境带来影响[3]。为观察验证其消毒效果,对过硫酸氢钾复合盐的消毒作用进行了实验研究。
1  材料与方法
1.1 材料
1.1.1过硫酸氢钾复合盐 白颗粒结晶,以三合盐的形式组合,分子式为:2KHSO5-KHSO5-K5SO4,分子量为614.7,为一种无机化合物,浙江省上虞洁华化工有限公司产品,其有效成分含量约为70%-75%。消毒时浓度为10-160mg/L。
1.1.2供试菌种 金黄葡萄球菌(ATCC6538)、绿脓杆菌(ATCC2027 )、枯草杆菌黑变种(ATCC9372)、大肠杆菌(ATCC8040)。以上菌种均购自中国菌种保藏中心,由黑龙江省佳木斯大学基础医学院微生物教研室保藏。
1.1.3 HBsAg阳性血清用ELISA法检测,滴度为1:4096,由黑龙江省佳木斯大学第一附属医院检验科提供。
1.1.4 培养基普通肉汤培养基 配方为[4]] 牛肉膏3.0g,蛋白胨10.0g,NaCl5.0g,水1000ml,PH=7.4~7.6。改良沙氏肉汤培养基,参照文献[4]自配。
1.1.5  实验动物 黑龙江省佳木斯大学实验动物中心提供。
1.2 试验方法
1.2.1中和剂选择试验[5] 试验菌为大肠杆菌与金黄葡萄球菌。中和试验设6个试验组: 消毒剂+ 菌悬液;消毒剂+菌悬液)+中和剂;中和剂+菌悬液;( 消毒剂+ 中和剂)+ 菌悬液;磷酸盐缓冲液(PBS)+菌悬液;未接种菌的培养基对照。试验结果,当第6组不长菌,第3、4、5组组间菌数相差不超过10%,第1组不长菌或长菌数远少
于第2组,第2组长菌数超过100cfu/ml 时,为所选中和剂浓度。
1.2.2  悬液定量杀菌试验 试验菌为大肠杆菌、金黄葡萄球菌、白念珠菌与枯草杆菌黑变种芽孢将0.5ml菌悬液与45ml消毒液混匀,作用至预定时间,取0.5ml菌药混合液,加入45ml中和剂中,混匀。中和作用5min,取该液0.5ml接种平皿,倾注普通营养琼脂并混匀。于37培养48h,计数菌落数,计算杀灭率。
1.2.3 乙肝病毒表面抗原破坏试验 用含5%小牛血清的ABS将纯化乙肝病毒表面抗原稀释成其含量为试剂灵敏度50000 倍,50ul 加入反应孔中,加入50ul消毒液使其终浓度分别达到40,80,160ml/L,作用不同时间。阴性对照为含5%小牛血清PBS。用ELISA法检测HBsAg抗原性,以试验组OD值(S)与阴性对照OD 值(N)的比值(S/N)>2.1判为HBsSg灭活有效。
2  结果
2.1 中和剂试验
以含40mg/L过硫酸氢钾复合盐加大肠杆菌、金黄葡萄球菌后作用5min后,加中和剂作用
5min观察中和作用。所选中和剂为1%硫代硫酸钠。结果见表1。
表1 消毒剂中和试验结果
 
组 别
试验菌
金黄葡萄球菌
(cfu/ml)
大肠杆菌
(cfu/ml)
(消毒剂+中和剂)+菌悬液
3 100 000
1 112 000
中和剂+菌悬液
3 100 000
1 120 000
(消毒剂+菌悬液)+中和剂
139
260
消毒剂+菌悬液
0
0
对照
3 160 000
1 200 000
注:试验温度为20毛刷制作,结果为3次平均值。
2.2  悬液定量消毒试验
10~40mg/L过硫酸氢钾复合盐对大肠杆菌、金黄葡萄球菌的杀灭率均为100%,对白念珠菌的杀灭率均大于99.50%。但未观察到对枯草杆菌黑变种芽孢的杀灭作用。结果表2。
表2 过硫酸氢钾对悬液中细菌的杀灭效果
水分子团
试验菌株
过硫酸氢钾浓度(mg/L)
对照组平均菌数(cfu/ml)
试验组
家庭智能控制
残留菌落数(cfu/ml)
平均杀灭率 (%)
大肠杆菌
40
4.5×107
0
100.00
20
0
100.00
10
0
100.00
金黄葡萄球菌
40
2.2×107
0
100.00
20
20
99.999
10
30
99.998
白念珠菌
40
2.2×107
55
99.90
20
93
99.97
10
2000
99.58
枯草芽孢杆菌变种
40
5.3×107
5.3×107
0
20
5.3×10前锁后塞7
0
10
5.3×107
0
2.3        过硫酸氢钾复合盐对HBsAg表面抗原灭活试验 结果见表3。
表 3 过硫酸氢钾复合盐对乙肝病毒表面抗原灭活试验
过硫酸氢钾复合盐浓度(ml/L)
不同时间作用结果(min)                                     
      5            10          15            20
160
电火花切割机床
1.273
1.091
1.091
水冷器…
80
1.813
1.364
1.636
40
1.454
019
3 讨论
自20世纪70年代始,、一溴二氯甲烷、二溴一氯甲烷和溴仿等氯化消毒副产物相继在饮用水中被检出,这些副产物有许多是“三致”物质[m],氯化消毒工艺的地位受到了挑战和质疑,控制和减少饮用水消毒副产物成为人们特别关注的课题。
近年来随着工业研制方法的改进,过硫酸氢钾复合盐的应用逐渐受到人们的关注。过硫酸
氢钾复合盐用于水消毒时,几乎不产生及其它有机卤代物。与氯相比,对PH有较宽的适应范围,当PH≥6.5时,杀菌效率高于氯系列消毒剂[6]。过硫酸氢钾复合盐性质稳定,储存、运输方便,水溶液氧化能力强,作用温和,可以去除水中度、臭味、锰等;在水中保持的残留量时间较长[6]。过硫酸氢钾复合盐不仅可以通过其氧化作用杀灭微生物,而且可以清除水中的有机物[N]。
本项目试验结果表明,过硫酸氢钾复合盐溶液浓度为10~40mg/L 时,接触时间为5min即对细菌繁殖体,如大肠杆菌、金黄葡萄球菌具有较强的杀灭作用,杀灭率达100%;对真菌也有一定的杀灭作用,杀灭率>99.50%;但对细菌芽孢及乙肝病毒表面抗原未观察到其灭活作用。
有机物的存在对过硫酸氢钾复合盐的杀菌效果影响明显。在使用过程中可根据实际情况如消毒目标物的污染程度、有机物含量等因素相应调整使用浓度。
[参考文献]
[1]张文福 过氧化氢消毒研究进展[J],中国消毒学杂志,1992,(9) 3:179.
[2]俞晓峰,梁增辉.  过氧化氢对白念珠菌的超微结构及酸性磷酸酶的影响[J]. 消毒与灭菌,1987.(4) 4:183.
[3]Sharma,Virender K,Potassiumferrate(VI):an wnvironmentally frienly oxidant[J],Advances in Environmental Research,2002,2:143-156.
[4]中国微生物菌种保藏管理委员会. 中国菌种目录[M]. 北京:机械工业出版社,1992,249-260.
[5]王翠文,郑文娟,张福强. 过氧化氢溶液消毒效果的评价[J]. 中华流行病学杂志,1993,,(10)4:205.
[6]www.chinashunyi/
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