实验室操作手册
（性病分册）
1.男性标本: (1)如疑为急性淋病奈瑟菌或其他化脓性细菌感染应在清洗龟头部后,以碘伏或其它非粘膜刺激性消毒后,挤出分泌物立即以无菌棉拭子采取,立即送检,或以专用的细拭子插入尿道口1—2cm,旋转采取.(2)如疑为前列腺炎、精囊炎慢性淋病奈瑟菌感染应由医师按摩前列腺,以无菌手续自尿道口采取前列腺液送检.
2.女性标本:(1)成年妇女自宫颈采取标本,应在扩阴器的支下,选取有炎症或分泌物部位,先以无菌棉拭子拭去表浅层分泌物,再用另一拭子取分泌物送检.如做厌氧或真菌培养应另外采取标本.如未成年幼女疑患性传播疾病时,不应使用扩阴器,应以无菌拭子在阴道口处采取分泌物送检.
对不合格标本的处理
1.申请单项目与标本不符.opnet
2.申请单姓名、科别、床号和标本的档签不符.
3.标本已有明显的污染迹象(如开塞).
4.送检标本不符合上述取材要求..
5.标本过少或已明显干燥.
6.申请单项目的项目填写不符合要求或无医师签字.
7.送检标本的时间已明显拖延.
当标本符合以上任何一条都作为不合格样本,必须重新采取样品且核对标本无误后才可以进行下一步实验.
淋病的涂片检查
〖原理〗
急性淋菌性尿道炎病人常有大量黄分泌物,在有些脓细胞内可有许多淋球菌,淋球菌革兰染 革兰阴性双球茵.检查分泌物涂片中有无典型细胞内革兰阴性双球茵,可作初步诊断淋病的依据.
采用自配革兰氏染液,试剂见试剂配制附录.
〖方法〗
1.取材:男性:拭子蘸取无菌生理盐水,插入尿道2-3肠镜裤cm,轻轻转动, 停留数 .
女性:宫颈拭子蘸取无菌生理盐水先将宫颈口的分泌物擦去,拭子插入宫颈内政-1.5cm,转动并停留驾齐驱20-30秒,取出涂片.
2.涂片后,待自然干燥后火焰固定,革兰染,油镜镜检.
〖结果〗
部分白细胞的胞浆中有圆形或卵圆形、成双排列的革兰阴性双球茵,两茵接触面扁平或稍凹,茵体大小可有差异.菌体长约0.7um,宽约0.5um
〖注意事项〗
1.涂片时不要太用力,轻轻滚动,以免炎症细胞浆内淋球菌因细胞破坏而溢出细胞.
2.涂片厚薄适宜.脱时间应以涂片的厚薄而定,过厚而脱清足时,革兰氏阴性误染成阳性.
3.固定涂片时,只要将涂片迅速通过火焰二三次,避免加热过度使细胞变形.
4.报告结果时应注明细胞或细胞外发现革兰氏阴性双球菌.
〖临床意义〗
细胞内革兰氏阴性双球菌为淋病患者的诊断标准.男性淋菌性尿道炎检出敏感性和特异性在95%以上,具有初步诊断的价值,但女性患者由于其它杂菌的影响,检出敏感性仅50%,且特异性较差,故世界卫生组织不推荐将涂片法用于女性淋病患者的诊断.同时也不推荐用于诊断淋菌性直肠和咽部感染.
〖原理〗
本试验是将衣原体单克隆抗体的带乳胶复合物吸附于滤纸上,将滤纸夹在二块塑料板中间.若加入的标本为阳性,则标本中的抗原与结合有乳胶的单抗结合,复合物因毛细作用向前扩散移动至结果窗,可被该处含有的未标记的鼠抗衣原体单抗所捕捉,在结果窗中出现一条黑线,标本即为阳性,过剩的未结合的带乳胶标记的鼠抗衣原体单抗可移到质控窗,与该处的兔抗鼠抗体结合,显现一条黑线.
〖试剂〗
本试验采用立明试剂盒.试剂名称为:快速沙眼衣原体胶体金测定
〖方法〗
1.将试剂﹑反应板和塑料管自冰箱取出置室温度30分钟.
2.加试剂1至塑料管刻度(0.6ml)直柄立铣刀,将取材拭子放入管内,搅混80+2℃水浴10分钟—12分钟,使细胞中衣原体的脂多糖释放出来.取出后,沿管壁转动挤压拭子并丢之,加盖后放室温中5分钟冷却.
3.将测拭板平放,加5滴提取液于检测窗,静置15分钟—30分钟后观察结果.
4.阳性对照试验:取试剂2加5滴于塑料管,再加试剂1至刻度,以下操作按3﹑4进行,结果应出现阳性反应.
〖结果〗
应另取测试板进标本为阳性时,结果窗中显示一条黑线.强阳性者黑线深,出现时间快,出现隐约可见的黑线也判为阳性.
热压设备 8520/质控窗显示一条黑线,表示标本试剂质量可靠,试验正确.如30分钟内,未见黑线出现,应另取测试板进行试验.
〖临床意义〗
作衣原体诊断的参考.结果阳性表示病人可能有衣原体感染,但需要结合临床症状全面考虑.
《注意事项》
1.标本中需要一定量抗原,提取的抗原低于试验敏感性时可出现假阴性,因此,每批试验应同
时用阳性对照标本测试,并在质控窗和结果窗均出现一条黑线.
2.如本试验阴性而病人持续有症状则应作衣原体培养.
3.本试验检测的是衣原体抗原,因而不能区别是衣原体的感染还是携带者 ,也不能区别衣原体的死活,不能作判愈试验.
4.不要混合不同的试剂和用具,不要盖错瓶盖.
5.试剂中含有叠氮化钠,它与铝﹑铜等金属可起反应引起爆炸,应避免接触此类金属器具,处理时可用大量水冲洗,
6.衣原体可多途径感染, 处理标本时要戴手套,不要在实验室吃东西,喝水和抽烟.
支原体液体分离培养和鉴定法
〖原理〗
解脲支原体(Uu)具有尿素酶,能分解尿素产氨,使含酚红指示剂Uu液体培养基 pH值升高变碱性,液体颜由黄变红,
人型支原体( Mh)具有精氨酸酶,能分解精氨酸产氨,使分解精氨酸产氨,使含酚红指示剂的Mh液体培养基pH值升高变,液体颜由黄变红.
〖试剂〗
本实验采用中山市天洋电子生物传感器有限公司生产的试剂盒. 名称为:Uu 和碰撞检测Mh的分离和鉴定液体培养基.
〖方法〗
1.标本采集: 男性:用棉拭子取尿道内口2—2.5cm处分泌物、前列腺或中段 尿沉渣(中段尿10ml 2000T/min离心10分钟).
女性:取宫颈管内口1—2cm处单层柱状上皮细胞,取样拭子不可 碰阴道壁,尿液不推荐.
2.接种:将标本洗入单一Uu或 Mh液体培养基,或用滤菌器过滤接种.
3.掊养:置37℃恒温箱孵育1-3天,每日观察培养基颜变化.
〖结果〗
液体培养基变红,并清流澈可初步判断为Uu或 Mh阳性.
〖注意事项〗
1.取材要准确,尤其女性宫颈拭子,要尽量多取标本.
2.截瘫行走器采样时旋转拭子30秒以上,取含柱状上皮细胞的样品.
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