1 范围
本标准规定了一种含脂类辐照食品的鉴定方法。通过气质联用仪分离和鉴定辐照食品中的2-十二烷基环丁酮能有效判定食品是否接受过辐照。
本标准适用于脂肪含量大于1%的食品。
2 术语和定义
2.1 2-十二烷基环丁酮[2-dodecylcyclobutanone (DCB)]
2-烷基环丁酮的一种，由食品中的棕榈酸和棕榈酸甘油酯辐解生成。其烃基链较短且是饱和的，相对于其他2-烷基环丁酮更为稳定，更适合作为含脂辐照食品检测的标志性化合物。2-烷基环丁酮是含脂食品辐照后所产生的特有的化合物。
2.2 气质联用仪[gas chromatograph – mass spectrometer (GC-MS)]
通过中间连接装置将气相谱仪和质谱仪连接起来，充分发挥谱法的分离能力和质谱法的鉴别能力，适用于对多组分混合物进行定性和定量分析。
3 原理
辐照能使食品中的甘油三酯的酰-氧键断裂，形成特异的辐解产物2-烷基环丁酮。2-烷基环丁酮不存在于天然食品中，只有辐照加工过程能特异性产生，所以可以被用来指示食品是否经过辐照。
2-烷基环丁酮的碳原子数与其母体脂肪酸相同，因此如果脂肪酸的构成明确，可以预测环丁酮的构成。2-十二烷基环丁酮是2-烷基环丁酮的一种，来源于棕榈酸的辐解。由于DCB更为稳定，且棕榈酸在食品中的含量丰富，所以通过气质联用分析检测食品中是否含有DCB，能有效判定食品是否经过辐照处理。
4试剂和材料
注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 试剂
4.1.1 正己烷（C6H14）温度自动控制系统
4.1.2 无水硫酸钠（Na2SO4）：650 ℃灼烧4 h，干燥器中放置保存。
4.1.3 乙醚（C4H10O）
4.1.4 氮气（N2）：纯度99.999%。
4.1.5 氦气（He）：纯度99.999%。
4.2 材料
硅胶层析柱：使用前，硅胶置于100 ℃烘箱活化12 h。在干燥器中冷却后，硅胶中加入4％（w/w）超纯水以去活化，转入三角瓶并封口。振摇此混合物至少15min，直至不结块并能自由流动。去活化硅胶置于干燥器中平衡12h，一周内备用。
4.3 标准品
4.4 标准溶液配制
2-十二烷基环丁酮标准溶液：准确称取适量2-十二烷基环丁酮标准样品（精确至0.1 mg），用正丁烷
配制100μg/mL标准储备溶液（储存条件：-20 ℃）。实验时，用正己烷稀释成适当浓度的标准工作溶液。
5仪器和设备
5.1 气质联用仪：适当规格的毛细管柱（12 m ×0.22 mm，0.33 μm）。
5.2 索氏提取器
5.3 氮吹仪
5.4 磁力搅拌器HDPE多孔加筋缠绕波纹管
5.5 恒温干燥箱
5.6 恒温水浴锅
5.7 旋转蒸发仪
5.8 分析天平：感量0.1 mg。
5.9 玻璃层析柱：长度200 mm~300 mm，内径20 mm。
6 分析步骤
6.1 试样制备
选取样品中脂肪含量比较多的部位，将样品置于密闭玻璃管中或不含脂肪的金属箔内。在磁力搅拌器中均质。
6.2 脂肪提取
称取20 g无水硫酸钠和20 g样品（液体样品应干燥至半固体状）放入纤维材质抽提套管中，混合后用棉絮塞住管口。向索氏提取器中加入100 mL正己烷，将抽提套管放入提取器中，再加入40 mL正己烷，加热回流萃取6 h。
将脂肪提取液转移到100 mL具塞量筒，定容，加入5 g ~10 g无水硫酸钠，混合后静置12 h。将脂肪提取液旋转蒸发浓缩至2 mL ~3 mL(45 ℃水浴，约25 kPa)。将浓缩后的脂肪转移至恒重的具塞玻璃管中，氮吹浓缩至恒重。
6.3 硅胶柱层析
在玻璃层析柱中充填30 g去活化的二氧化硅，2倍柱床体积的正己烷预淋洗。
称取3.5.2中制备的（200±1）mg脂肪，溶于5 mL正己烷试剂，上柱。用150 mL正己烷淋洗，流速控制在2 mL/min，淋洗液弃之。再用250 mL含有1%乙醚的正己烷溶液洗脱，收集洗脱液。将洗脱液转入鸡心瓶中，在40 ℃旋转蒸发浓缩至5 mL ~10 mL，转移到试管中，40 ℃氮吹浓缩至2 mL，分装小瓶待测。
6.4 仪器参考条件
6.4.1 谱柱升温程序：55 ℃保持1 min，然后以15 ℃/min升温至300 ℃，保持5 min。
6.4.2 进样口温度：250 ℃。
6.4.3 接口温度：280 ℃。
6.4.4 离子源：EI源，70 eV。
6.4.5 测定方式：选择检测离子（m/z）：98、112，定量离子（m/z）：98。
6.4.6 载气：流速1.0 mL/min。
6.4.7 进样方式：恒流，无分流进样。
6.5 试样溶液的测定
6.5.1 定性分析盈成双低菜籽油
2-十二烷基环丁酮质谱图的m/z 98和m/z 112的比率约为4.0 ~ 4.5:1。待测样品的m/z 98和m/z 112都出现并且存在上述的比率，而且每一个离子的信噪比都大于3：1时，表明样品接受过辐照。
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2-十二烷基环丁酮的质谱图参见附录A。
6.5.2 定量分析
配制浓度分别为0.01μg/ml，0.02μg/ml，0.05μg/ml，0.1μg/ml，0.2μg/ml，0.5 μg/ml的2-十二烷基环丁酮标准工作溶液，测定其峰面积，根据浓度与峰面积绘制标准曲线。同时测定3.6试样溶液，依据标准曲线进行定量分析。
7 分析结果的表述
1）相对校正因子F按照公式（1）计算：
(1)
式中：
——相对校正因子；
——标准样品中2-十二烷基环丁酮m/z 98的峰面积；
——内标样品中m/z 98的峰面积；
——标准样品中2-十二烷基环丁酮的含量，μg/mL。
2）测定液中2-十二烷基环丁酮的质量浓度按照公式（2）计算：
(2)
式中：
——测定液中2-十二烷基环丁酮的质量浓度，μg/mL；
——测定液相对于2-十二烷基环丁酮标样的m/z 98峰面积；
——测定液相对于内标溶液的m/z 98峰面积。
—
—按（1）式得到的校正因子；
3）脂肪中2-十二烷基环丁酮的含量按照公式（3）计算：
(3)
式中：
台风实时监控系统——脂肪中2-十二烷基环丁酮的质量分数，μg/g；
——样品溶液中2-十二烷基环丁酮的质量浓度，μg/mL，由公式（2）得出；
——用于过柱子的脂肪质量，mg。
8 限制性玻璃干燥器
2-烷基环丁酮的产量与食品中的前体脂肪酸有着直接的联系，但是环丁酮的产量并不总是反映出前体脂肪酸的含量。而且随着辐照剂量的不同和辐照样品储存时间的不同，2-烷基环丁酮的含量均会发生变化，且这种变化是无规律的，所以不能用2-十二烷基环丁酮测定法精确计算出样品所受的辐照剂量。
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