石蜡切片与HE染

复方氯化钠滴眼液(5ml,8ml)兔眼刺激试验
12.2-12.15 给药:左眼滴药,右眼滴生理盐水,1-3号滴小瓶(卡头5ml,4-6号滴大瓶(8ml),每日4次,每次间隔2小时
12.18 给药完后72小时,第一次取材
    13:00-17:00 处死:耳缘静脉打空气
                6只兔子左右眼球和上下眼睑投入10%福尔马林中浸泡,4℃,并标号:1左,1右,2左,2右,……
    18:00-12.25  10%福尔马林固定5天(长期固定的标本最好用水冲洗24-48h
12.25,11:30-12:30  第二次取材
用长镊子将眼球取出,放在培养皿上,用刀片将眼球从正中沿矢状面切成两半,去除晶状体(透明坚硬小球)后,将其中一半的月牙形弯曲部分剪掉一段,使断层平直。将眼球靠最里面一层环状部分沿冠状方向切掉,沿矢状方向切取一定厚度的组织两块,放入塑料包埋rgd-208内,
标号,盖上盖子,用线将12个盒穿起来。
脱水:依次浸入70%酒精(4h),80%4h),90%4h),95%(过夜)100%Ⅰ(1h),100%Ⅱ(1h
    标本与乙醇体积比301
透明:二甲苯Ⅰ(10min)  二甲苯Ⅱ(10min)
    常规标本透明时间为23h,边浸泡边观察
浸蜡:蜡Ⅰ,蜡Ⅱ(共2h
将透明过的标本夹到滤纸上吸掉透明剂,放入蜡液中(若为新蜡块,在酒精灯上熔化成液体状,室温下凝固,再熔化成液体状才可用,去除气泡)将熔化为液体状的石蜡烧杯放入烘箱(69℃)
包埋:(烘箱中进行,70℃)将液体石蜡倒入金属包埋盒内,倒满,用镊子将一串塑料包埋盒从液体石蜡中取出,放在表面皿上,打开每个包埋盒,将盖子去掉,用镊子夹取组织
在液体石蜡中放一段时间,紧挨着放入金属包埋盒的石蜡中,尽可能放在中央,将塑料包埋盒底座浸入液体石蜡中一段时间后盖在组织上,此时停止在塑料包埋盖上倒石蜡,防止组织被冲走,将盖好的整个包埋盒放在烘箱外室温下凝固,放入冰箱下层,待冰冻后拿出,抠出石蜡块。
切片:将石蜡块两侧多余部分修掉,使平齐,夹在切片机上,调节厚度5μm,左手摇动手轮调节石蜡块与刀片之间的距离,右手摇动手轮切去多余部分。待切到组织时,右手摇动手轮切出连续切片,用镊子和毛笔将切片展开在37℃-38℃水浴锅中,用镊子展平,待切片维持一定温度后,用涂有蛋白甘油(多聚赖氨酸原液:娃哈哈水=钟罩阀1刚构5~7)载玻片倾斜入水,从切片一端靠近,逐渐使整个切片贴在载玻片上,然后插在玻片架上。
烤片:将玻片架放入烘箱,设为70℃,2h
脱蜡:二甲苯Ⅰ(10min),二甲苯Ⅱ(10min)
水化:样本玻片依次浸入100%95%70%30%门铃电路乙醇,温水(水浴锅3738℃)各2min,若脱蜡不掉,再次温水2min
:将玻片用蒸馏水润湿1min,用滤纸吸干水分
试剂一核染液染3min,自来水冲洗3~5s冷轧辊(背面冲洗)
试剂二浆染液染1030s,用试剂三增液冲洗12次(或用烧杯盛自来水,手拿玻片涮几次),用滤纸吸干液体。
脱水70%100%2min或用增液洗
封片:吸取中性树胶液滴在组织上,用盖玻片(事先经乙醇浸泡,充分干燥)垂直盖在树胶滴上,使之充分扩散至整个组织。
照相:在显微镜下观察角膜、结膜、虹膜、视网膜是否有病理变化
    角膜:前上皮(多层),后上皮(单层)
    虹膜:上皮细胞(蓝紫),血管(红)
    球结膜:上皮(单层),结缔组织(疏松)

本文发布于:2024-09-22 17:15:31,感谢您对本站的认可!

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