实验目的:凝血酶滴定法测定水蛭素活性含量
实验仪器和试剂:电子天平 酸度计 离心机 移液器 45度试管架 三羟甲基氨基甲烷(Tris) 盐酸(Hcl) 生理盐水 蒸馏水 凝血酶 纤维蛋白原及常用玻璃仪器
实验步骤:
1、称取1.21g三羟甲基氨基甲烷加蒸馏水充分溶解,定溶到50ml,浓度为0.2mol/L。 2、用移液器取429ul盐酸加蒸馏水充分溶解,定溶到50ml,浓度为0.1ml/L。夹筋铝箔
3、从1去25ml,从2取40ml混合调PH到7.4(用1或2调),加蒸馏水定溶到100ml。
4、称取样品1g放入试管加生理盐水5ml充分溶解30分钟。 医用呼叫器
5、把4放入离心机离心10分钟,4000转/分。
6、取3(Tris缓冲液)1.6ml,稀释纤维蛋白原0.008g,浓度0.5%。
8、从5取上清液100ul。
9、从6取200ul加入8充分摇匀后,吹一小气泡。
10、从7每分钟取5ul加入9迅速摇匀后,匀速转动试管,观察反应,溶液上的小气泡随液面转动时视为反应的终点(记录好滴加凝血酶的次数)。
11、计算公式为:
其中
C=凝血酶的浓度
C步进梁式加热炉2=样品的浓度
V1=滴加凝血酶的体积
V2=取样的体积
注:
1、滴加次数超过5次还不凝固的,应按一定倍数稀释样品。氢氧化锰
智慧珠拼盘2、为了提高滴定的准确度可梯度配用不同浓度的凝血酶溶液。
光纤收发器机架3、为了提高滴定的准确度同时也可在临近凝固的下一次滴加凝血酶5u/次,改为4u/次,3u/次,2u/次,1u/次。
4、如果样品是溶液,直接取样100ul检测,检测步骤和计算方法不变。
5、如果样品是可溶性粉状物,加溶液溶解后,取溶液100ul检测,检测步骤和计算方法不变。