一、实验目的
1、了解植物组织中淀粉的提取步骤。
2、掌握植物组织中淀粉含量测定的原理和酸水解法测定淀粉的方法。
3、熟悉722分光光度计的主要用途、工作原理及使用流程。
4、巩固容量瓶、移液管等仪器的使用。
二、实验原理
1、淀粉提取，也称为浆渣分离或分离，是淀粉加工中的关键环节，直接影响到淀粉提取率和淀粉质量。粉碎后的物料是细小的纤维，体积大于淀粉颗粒，膨胀系数也大于淀粉颗粒，比重又轻于淀粉颗粒, 将粉碎后的物料，以水为介质，使淀粉和纤维分离开来。
2、淀粉是食品中主要的组成部分，也是植物种子中重要的贮藏性多糖。它广泛存在于植物
的根、茎、叶、种子等组织中，是人类食物的重要组成部分，也是供给人体热能的主要来源。淀粉跟稀硫酸在加热的条件下能够完全水解成葡萄糖、麦芽糖等还原糖。还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖在NaOH和丙三醇存在条件下会被氧化成糖酸及其他产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原成桔红的3-氨基-5-硝基水杨酸。
该物质在540 nm波长处有最大吸收，在一定范围内，还原糖的量与桔红物质的吸收值成正比关系，利用比法可测定样品中的含糖量。由于淀粉完全水解成还原糖的量是成正比的，所以，也与桔红物质的深浅成正比关系。 三、实验仪器与材料、试剂
1、仪器
名称 | 数量 | 名称 | 数量 | 名称 | 数量 | 名称 | 数量 |
电子天平 | 1台 | 台秤 | 1台 | 100 mL量筒 | 1个 | 50 mL容量瓶 | 5个 |
80 mm研钵 | 1套 | 水果刀 | 1把 | 30 mm表面皿 | 1个 | 100 mL容量瓶 | aa1832个 |
称量纸 | 1包 | 洗瓶 | 1个 | 250 mL锥形瓶 | 4个 | 50 mL棕容量瓶 | 1个 |
抽滤瓶 | 1个 | 药匙 | 1把 | 50 mL烧杯 | 6个 | 100 mL棕容量瓶 | 1个 |
布氏漏斗 | 1个 | 洗耳球 | 1个 | 100 mL烧杯 | 3个 | 50 mL带胶头滴瓶 | 1个 |
移液管架 | 1个 | 纱布 | 1块 | 一次性薄膜手套 | 1包 | 50 mL带胶头棕滴瓶 | 1个 |
定性滤纸 | 1包 | 水浴锅 | 1个 | 石英比皿 | 1副 | 2 mL移液管 | 2根 |
胶头滴管 | 2支 | 滴定台 | 1个 | 恒温干燥箱 | 1个 | 5 mL移液管 高沸点溶剂 | 3根 |
玻璃棒 | 1根 | 白瓷板 | 1块 | 分光光度计722 | 1台 | 10 mL移液管 | 1根 | 尾气吸收塔
标签纸 | 1包 | | | 10 mL具塞比管 | 10根 | 25 mL移液管 | 1根 |
| | | | | | | |
3、试剂
名称 | 规格 | 数量 | 名称 | 规格 | 数量 | 名称 | 规格 | 数量 |
马铃薯 | | 250 g | 葡萄糖 | A. R. | 1瓶 | 硫酸钠 | A. R. | 1瓶 |
NaOH固体 | A. R. | 1瓶 | 浓HCl | A. R. | 1瓶 | 醋酸铅 | A. R. | 1瓶 |
酒石酸钾钠 | A. R. | 1瓶 | 碘单质 | A. R. | 1瓶 | 乙醚 | A. R. | 1瓶 |
偏重亚硫酸钠 | A. R. | 1瓶 | 碘化钾 | A. R. | 1瓶 | 苯酚 | A. R. | 通用机关零件1瓶 |
3,5-二硝基水杨酸 | A. R. | 1瓶 | 无水乙醇 | A. R. | 1瓶 | | | |
| | | | | | | | |
四、实验内容
（1）、6 mol/L NaOH 溶液：准确称取12 g NaOH固体，溶于15 mL蒸馏水中，并倒入50 mL容量瓶中，用蒸馏水分几次清洗烧杯并将清洗的溶液倒入容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
（2）、3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：准确称取0.63 g DNS，2.1 gNaOH固体充分溶解于50 mL蒸馏水，再加入18.2 g酒石酸钾钠，0.5 g苯酚，0.5 g偏重亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至100 mL，贮于棕瓶中备用。（注意：DNS一定要在配制结束后立即转移到小棕瓶中，同时，使用过程中尽量减少与空气接触。）
（3）、1 mg/mL葡萄糖标准溶液：准确称取在105 ℃的温度下烘干至恒重的葡萄糖0.1 g，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100 mL。
（4）、6 mol/L HCl溶液：移取25.00 mL浓HCl至50 mL容量瓶中，并用蒸馏水定容至刻度线。
（5）、I2-KI溶液：称取2.5 g碘单质，5 g碘化钾溶于50 mL蒸馏水中。
（6）、10%硫酸钠：称取5 g硫酸钠溶于50 mL蒸馏水中。
（7）、20%醋酸铅：称取10 g醋酸铅溶于50 mL蒸馏水中。
（8）、80%乙醇：量取40 mL无水乙醇，再放入蒸馏水直到50 mL。
2、样品处理
取200 g马铃薯洗涤，晾干，去皮，切细，按20 mL加水用研钵研成匀浆，用纱布过滤，收集滤液，滤渣继续粉碎，再加水混匀，用纱布过滤，合并两次的滤液，静置至明显分层，倒掉上清液，再加入50 mL蒸馏水搅拌混匀后，用布氏漏斗抽滤。去除滤液不要，滤渣在80 ℃烘干。
3、脱脂
取一只250 mL锥形瓶，称取20 g样品，加入20 mL蒸馏水溶解后，加30 mL乙醚洗涤振荡5 min，用滤纸过滤，除去带有脂肪的乙醚，重复3次，直至滤液澄清为止。
4、脱糖
将已脱脂的样品置于250 mL锥形瓶中加入50 mL80%乙醇，充分振荡5 min后，过滤除去可溶性糖类，用50 mL蒸馏水将残渣转移到250 mL锥形瓶中。
5、水解
吸取20 mL 6 mol/L盐酸溶液于上述250 mL锥形瓶中，在瓶口盖上表面皿，置于沸水浴中水解2 h，期间要摇晃几次。然后取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I2-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝。水解完毕，取出烧瓶用冷水冷却至室温。然后用6 mol/L NaOH溶液中和至液呈微红，使样品液达pH值7左右。再加入5 mL 20%醋酸铅，充分摇匀后静置10 min，使蛋白质、果胶等杂质沉淀。再加入5 mL 10%硫酸钠溶液，去除残余的铅。摇匀后，静置15 min后，过滤，收集滤液至容量瓶中，并定容至100 mL，备用。
6、葡萄糖标准曲线制作
取6支25 mL比管并编号，按表1中的顺序加入各种试剂。
表1葡萄糖标准曲线的制作
项目 | 试 管 号 |
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
葡萄糖标准液/mL | 0.00 | 0.50 | 1.00 | 1.50 | 2.00 | 2.50 |
DNS试剂/mL | 1.50 |
定容至10 mL，混匀，置沸水浴煮沸5 min进行显，取出，冷至室温后，再稀释至25 mL。以1号为参比溶液，分别读取各管在540 nm波长处的吸光度值A540 |
葡萄糖含量/mg/mL | 0.00 | 0.020 | 0.040 | 0.060 | 0.080 | 0.10 |
A540 | | | | | | |
蜂房哈夫尼菌 | | | | | | |
以葡萄糖含量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
7、样品中含糖量的测定
取1 mL马铃薯样品原液稀释至10 mL。之后取3支25 mL比管，分别按表2中的顺序加入试剂。（注：1号管同表1中1号管；7-9号为马铃薯淀粉水解液平行实验。）
表2 马铃薯样品中含糖量的测定
项 目 | 空白 | 马铃薯样品水解液 |
1 | 7 | 8 | 9 |
样品溶液/mL | 0.00 | 1.50 | 1.50 | 1.50 |
DNS试剂/mL | 1.50 |
定容至10 mL，混匀，置沸水浴煮沸5 min进行显，取出，冷至室温后，再稀释至25 mL。以1号为参比溶液，分别读取各管在540 nm波长处的吸光度值A540 |
A540 | | 尺码圈 | | |
葡萄糖含量C葡萄糖/ mg/mL | 0.00 | | | |
平均葡萄糖的含量C葡萄糖/ mg/mL | |
| | | | |
测定后，取样品的光吸收平均值在标准曲线上查出相应的糖量。
五、实验结果处理及分析
称量干燥获得的淀粉重量，按照以下公式计算得率。
按下式计算出样品中淀粉的含量：
式中:
X——试样中淀粉的含量，g/100 g；
0.9——以葡萄糖计换算成淀粉的换算系数；
C葡萄糖——试样溶液中葡萄糖的含量，mg/mL；
V——试样液总体积，mL；
m——称取试样的质量，g。
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