转录组测序中抽提RNA的小技巧

高铬铸铁转录组测序中抽提RNA的小技巧
RNA是以DNA的一条链为模板,以碱基互补配对原则,转录形成的一条单链,主要功能是使遗传信息能够翻译成蛋白行使生物学功能,是遗传信息向表型转化过程中的桥梁。当我们研究DNA的表达和调控,即我们常说的转录组测序时,首先需要做的就是从组织或细胞中分离和纯化RNA。
抽提RNA时,我们通常遵从3点原则:1.保证RNA的完整性;2.获得比较纯的RNA;3.操作简便,稳定性强。
RNA用于不同的后续实验,其质量要求不尽相同。cDNA文库构建要求RNA完整而无酶反应抑制物残留;Northern对RNA完整性要求较高,对酶反应抑制物残留要求较低;RT-PCR对RNA完整性要求不太高,但对酶反应抑制物残留要求严格。因此,做转录组测序抽提RNA之前,明确实验目的是进行后续实验的首要条件。
RNA抽提的方法有很多,其中常用的方法为Trizol抽提法和RNA抽提试剂盒。Trizol抽提方法为传统的抽提方法,RNA试剂盒抽提则比较方便,市面上也有很多该类试剂盒。这两种方法
数字仪表在操作过种种各有利弊。在做转录组测序时,我们可以根据自己的目的选择合适的方法,下面列举出了2种方法的优缺点对比,供参考。
做转录组测序时,我们为了保证抽提出的RNA的质量,每一个细节都需要谨慎操作,下面几点则是我们常常会忽视但是又很重要的小细节。
1.使用正确的细胞或组织储存条件,在样品用液氮速冻后,应该储存在-80℃,做转录组测序的样品在RNA提取之前应避免反复冻融。
加雷沙星2.研磨过程要迅速,彻底匀浆样品。
3.尽量使用无RNase的头、试管和溶液,手套也应经常更换;实验前移液器、工作台、玻璃器皿,尽量用RNaseZap擦拭。背缚
道口报警器4.建议分装RNA溶液进行保存,避免反复冻融,导致RNA降解。
5.使用Rnase-free的双蒸去离子水或其它缓冲液溶解RNA,否则容易导致RNA降解。
6.转录组测序时,我们一定要结合组织样本本身的特点,选择合适的抽提方案。
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