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一、目的
〔三〕病毒分型和溯源。
〔四〕为登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据。
二、检测对象
〔一〕疑似和临床诊断病例〔按照登革热诊断标准WS216-2021〕。
〔二〕伊蚊成蚊和幼虫。
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用无菌真空枯燥管，采集患者非抗凝血，及时别离血清，分装2份，保存于带螺旋盖、内有垫圈的冻存管内，标记清楚后低温保存，其中1份用于现场实验室检测，1份用于上级预防控制机构复核〔附件1，附表1〕。
1.登革热临床诊断病例及疑似病例，每次采集血液标本5mL。
2.登革热临床诊断和疑似的住院病例〔包括初筛阴性〕，应采集双份血液标本，入院当天和出院前1天各一份。
3.疫点首发病例，必要时应采集第二份血标本，距第一份血样采集日期间隔在7天以上。
夜尿停〔二〕蚊媒标本采集
疫点内采集的伊蚊成蚊及幼虫，分类鉴定后，填写媒介标本采集信息表，按照采集地点分装，每管10-20只。
〔三〕标本保存、运送
标本应-70℃以下保存，血液标本可-20℃以下保存，但不超过1周。
标本运送时采用低温冷藏运输，防止冻融，样本运输应遵守国家相关生物平安规定。
四、检测内容
〔一〕实验室检测
登革热疑似病例发生所在地医院和/或县〔市〕疾控机构采集病例血清，检测登革病毒抗原、核酸或抗体，检测流程参见图1。
〔二〕复核检测
1.送市或省级疾病预防控制机构的临床标本，抽样30%进行复核检测，疫点首发病例需采用病原学和/或双份标本血清学方法复核检测，爆发疫情复核检测不少于5例，疫情少于5例者应全部检测，病毒核酸阳性标本应分型检测。
2.疫点首发病例，重症病例、输入病例急性期标本应采用PCR方法进行分型检测，阳性者别离病毒，从临床标本或所别离病毒中扩增E蛋白编码基因，完成序列分析。
3.每次爆发疫情应开展病毒全基因组序列分析。
4.实验室检测阴性临床病例以及重症病例，应对恢复期血清进行IgM、IgG抗体和/或中和抗体检测。
〔三〕媒介标本检测电子蚊香
捕获的伊蚊成蚊或幼虫，进行核酸分型检测，并扩增病毒E蛋白编码基因，完成序列分析。
病毒核酸阳性的标本由国家、省或有条件的市级疾病预防控制机构进行病毒别离、基因组序列分析。
图1登革热疑似病例实验室检测流程
五、实验室检测方法
〔一〕临床标本检测
1、病原学检测
病原学检测主要适用于急性期血液标本。
〔1〕抗原检测：一般发病后6天内血液标本NS1抗原检出率高。标本中检出NS1抗原可以确诊病毒感染，适用于现场快速检测，可用于早期诊断〔附件2，3〕。
〔2〕核酸检测：一般发病后6天内血液标本病毒核酸检出率高。在病人血清中检出病毒核酸，可确诊而且能够分型，可用于早期诊断，但核酸检测容易因污染而产生假阳性，因此要求严格分区操作〔附件4〕。
〔3〕病毒别离：一般发病后5天内血液标本病毒别离率较高。将标本接种于蚊源细胞〔C6/36〕或哺乳动物细胞〔BHK21、Vero〕进行别离培养〔附件5〕，出现病变以后，用
检测抗原或核酸的方法鉴定病毒。别离到登革病毒可以确诊，但其耗时长，不适于快速诊断。
血清学特异性抗体检测主要适用于发病5天以后血液样本，但需注意可能与其他黄病毒感染发生交叉反响。
〔1〕血清特异性IgM抗体：采用ELISA、免疫层析等方法检测。IgM抗体阳性，提示患者可能新近感染登革病毒，适用于登革热早期诊断，但单份标本不能确诊〔附件6〕。
〔2〕血清特异性IgG抗体：采用ELISA、免疫荧光〔IFA〕、免疫层析等方法检测。患者恢复期血清 IgG 抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高可以确诊〔附件7，8〕。
〔3〕中和抗体：采用空斑减少中和实验、微量中和实验等方法检测，可用于分型。患者恢复期血清中和抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高可以确诊。
〔二〕媒介标本检测
电石发气量将分类后的伊蚊成蚊或幼虫，按照采集地点，每10～20只为一份进行研磨处理〔附件9〕。
用RT-PCR的方法进行登革病毒核酸检测〔见附件4〕。
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