多聚赖氨酸的配置、保存、使用

聚赖氨酸的配置、保存、使用
一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水,或者PBS,浓度一般为用
0.1 mg/ml进行包被。
二、其他常用包被方法比较(以各种免疫分析为例):
.snap
三、我配成1mg/ml的储存液,用Mini-Q(超纯水)配制,放在-20℃储存,使用时稀释10倍(也用超纯水),即终浓度100ug/ml,过滤后使用。工作液过滤使用,如一次用不完,放在4℃储存。
多聚赖氨酸在水溶液中易分解,所以一次不要配太多工作液。
四、我现在要配多聚赖氨酸,书上写的用PBS配,但没写PH,浓度,向各位请教。
答:
PH应该在
电动刻字笔7.0~
7.4,PBS:
取氯化钠
7.650 g,无水磷酸氢二钠
0.724 g,磷酸二氢钾
0.210g溶于蒸馏水1000 mL中,以1N氢氧化钠溶液调pH值为
7.0~
7.4,经121℃灭菌15分钟
五、我准备用多聚赖氨酸涂片培养细胞,不知道多聚赖氨酸涂过的玻片如何灭菌?能否干烤灭菌?
答:
Sigma的产品说明书上写的很xx的。
另外,有本书上是这么写的,供参考:
Poly-lysine-coated tissue culture surfaces
To coat coverslips:
纸张阻燃剂
Prepare a stock solution by dissolving 25 mg/ml polysine in g蛋
4.73 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a
0.22-μmfilter. Store in 100-μlaliquots at?20°
C. When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13μg/mlworking solution.Sterilize coverslips by autoclaving prior to coating. Dip coverslips in the working s
olution, then incubate 15 min to several hours in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator. Allow surface to dry.To coat culture dishes or 8-well chamber slides:
Prepare a stock solution by dissolving 100 mg poly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culturesurfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a
0.22-μmfilter.Store in 5-ml aliquots at ?20°
C. When ready to use, dilute 1 part stock solution with 9 parts waterto prepare 100μg/mlworking solution. Fill tissue culture dishes or slide wells with the working solution and incubate 1 hr in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator, then remove solution by vacuum aspiration and allow surface to dry.
Store coated tissue culture ware up to 3 months at 4°
C. Use diluted solutions only once, but unused diluted aliquots can be stored up to 3 months at 4°
C.
你可以配置好PLL后单独将其过滤除菌,分装,待用。玻片也是事先泡洗洁精,泡酸,双蒸水洗,烘干后高压灭菌,待用。培养的前一天包被培养板时先把玻片放入培养孔然后把PLL加到玻片上,静置15分钟,洗出多余的PLL,然后用高压过的双蒸水洗板,培养板放入37度烘箱里过夜就可以用了。
六、多聚赖氨酸消毒该怎么办??
答:
紫外照射消毒我没试过,但用
0.22um的滤器消毒是没问题的(小的一次性滤器可以过滤200ml)。在液体消毒时,如果所含成份经过高温,钴60照射发生变性者,建议用滤器(
0.22),多聚赖氨酸为氨基酸类,建议用滤器,如果要求程度高,可以两个滤器过滤两次。
七、资料:
多聚赖氨酸溶液(Poly-L-Lysine Solution)Conc.:
0.1% w/v, in water Storage:
18-26℃Thimerosal,
0.01%, added as preservative多聚赖氨酸溶液是广泛应用的组织切片与玻片黏合剂,该多聚阳离子分子与组织切片上的阴离子相互作用会产生较强的黏合力。
适用组织学,免疫组织化学,冰冻切片,细胞涂片,原位杂交等使用的玻片的防脱片处理,以防实验操作过程中组织掉片。也可用于细胞培养,增加细胞贴壁能力。
u形管
八、使用说明
操作步骤(可直接在玻片上涂布)
1.灭菌的ddH2O 1:10稀释该多聚赖氨酸溶液。
2.用之前将稀释的多聚赖氨酸溶液放在室内,使其温度到室温18-26℃
混凝土模板3.将玻片浸在稀释的多聚赖氨酸溶液5分钟。注意增加时间不会提高包被效果。
多媒体互动系统4.在60℃烘箱1小时干燥,或室温18-26℃过夜干燥待用。
九、注意事项
1.每100mL已稀释的多聚赖氨酸溶液要包被的玻片40-90张,超过90张片子将影响其黏合力。
2.用之前的玻片必须保持清洁。必要时用含1% HCl的70%乙醇溶液来清洗。
3.不要在用过的稀释液xx新的溶液。
4.释过的多聚赖氨酸溶液要放在2-8℃,至少在3个月内是稳定的。
5.用过的稀释液要过滤,若出现浑浊或长菌要丢弃。
十、将
0.5%多聚赖氨酸溶液加入细胞培养皿中,浸泡5-10分钟并自然晾干待用即可。
十一、多聚赖氨酸(poly-l-lysine):
常用包被培养皿的基质之一.。
1.配制硼酸缓冲液(PH
8.4)
A液:
硼砂溶液--

本文发布于:2024-09-21 15:40:06,感谢您对本站的认可!

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