《医学微生物学》动物接种实验与病毒培养技术实验

《医学微生物学》动物接种实验与病毒培养技术实验
    实验动物在病原微生物中的研究上占有重要地位。利用实验动物可以进行病原菌的分离鉴定、毒力的检测、制备免疫血清等生物制品;进行各种皮肤试验;建立人工感染的动物模型;进行发病机制、疾病防治以及免疫机制的研究等。
一、实验动物的管理
    1.实验室常用的动物:家兔、豚鼠、小白鼠、大白鼠、地鼠、绵羊、鸡等,根据实验的目的选择最适宜的动物。
    2.实验动物必须与正常动物分开饲养,动物室内要经常保持清洁和空气畅通,并应有防蚊、防蝇、防逃跑及保暖设备。
    3.实验动物要精心饲养,喂以适当的饲料并给以充足的水,任何动物也不要断水。
    4.实验动物要有详细的记录,包括性别、体重、体表特征(如毛等)、接种材料、接种日期、接种途径、剂量、次数以及接种变化等。
    5.实验动物应做好标记,对较大动物如家兔、豚鼠等可用金属号码牌固定于耳朵上,对较小动物如大白鼠、小白鼠等可用复红(或等染料)涂于身体的不同部位,以资识别。盛装动物的笼具等,也应付以标签。
    6.接种后的动物应每天观察1~2次,注意动物的精神状态,活动能力、饮食和大小便情况,体温、注射部位的反应以及全身反应,如不安、耸毛、震颤、弓背、麻痹及死亡等,并应详细记录之。
7.感染动物死亡后,应立即剖检或暂时冻存。动物的排泄物及使用的笼具等必须严格消毒。任何用过的动物,不宜再做其他试验。
二、实验动物的选择
pvc面膜    选择实验动物应注意以下几点:
1.易感性:是选择实验动物的首要条件。
2.动物健康:体质健康、发育正常、体重适宜;最好使用自己繁殖的动物,由市场购买的
动物至少经过一周的隔离观察,证明无隐性感染方可使用;某些特殊实验应需选用专门喂养繁殖的无菌动物;实验动物应容易获得,便于喂养和管理。
    3.动物大小:同一实验应选用大小一致的动物,通常以年龄或体重为标准。
    4.性别:某些实验最好选用同一性别,特别是免疫的动物和需要观察较长时间的实验动物。
    5.动物品系:某些实验要求使用纯系动物,纯系小鼠用于免疫学、杂交瘤及病毒感染等研究。
三、小白鼠腹腔接种
[目的要求]
l.掌握小白鼠腹腔接种的实验方法。
2.了解动物接种在微生物分离和鉴定中的作用。
3.了解其他的动物接种方法,如动物皮下、皮内、肌肉、家兔耳静脉注射等接种方法。
4.了解实验动物的处死和尸检的方法。
[原理]
在临床微生物实验室中,动物接种主要用于分离和鉴定病原微生物。通过在易感和不易感动物体内传代,微生物的各种性质都可能发生变化。常用的实验动物包括大鼠、小鼠、豚鼠、家兔及绵羊等。常见的接种部位包括皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔及脑内等部位。本实验主要进行小鼠的腹腔内接种。   
[器材和动物]
1.菌液肺炎链球菌培养液。
2.器具鼠笼、无菌注射器、棉球煮针锅、剪刀、解剖台、大头针、纸张。
3.试剂碘酒、酒精、3%来苏儿、凡士林。
4.动物小白鼠。   
[步骤和方法] 
1.接种方法:
  (1)用无菌注射器以无菌操作方式吸取肺炎链球菌培养液,吸取量稍多于使用量,排除气泡(将注射器针头朝上,使气泡上升,在针头上裹以消毒棉球,然后轻轻推出,须避免菌液四溅,特别注意防止眼结膜感染)。
(2)用右手轻拖小白鼠尾,使其爬行于粗糙物面上,再用左手拇指和示指抓紧小白鼠两耳及颈项皮肤,鼠体被固定在左手手指与掌间,用左手无名指和小指夹住鼠尾,用碘酒消毒腹壁皮肤。
(3)左手倾斜,使小鼠头部稍向下,将预先准备好的菌液注入腹腔内,注射时右手持已吸有菌液的注射器,针尖自小白鼠左侧腹股沟处刺穿皮肤,使针尖(针头宜小,常用5号针头)在皮下组织内向前移动1cm左右,然后再轻轻向下刺进腹腔。抽吸注射器,如无回血或尿液,表示针头未刺人肝、膀胱等脏器,即可进行注射,注入菌液0.2ml后将针头退出,用酒精棉球轻擦针刺处消毒。
(4)将接种小鼠用的肺炎链球菌菌液作一张细菌涂片,以备与以后的实验结果比较。
(5)将注射后的小白鼠做好标记(以染液涂于鼠的头部或背部),置于鼠笼中,填写实验动物记录卡或标签,包括实验动物的名称、编号、注射材料及部位、剂量和注射日期等,然后将卡片挂在动物容器上。
2.结果观察方法:
(1)感染动物须隔离喂养,并逐日观察,注意有无发病症状,如食欲不振、竖毛、不活泼等现象,加以记录,必要时定期测量体重及体温。若有致死可能,务必在动物濒死前及时杀死并作解剖,进行病原学和病理学检查。
远程教学系统>草莓托(2)小白鼠在濒死前或死亡后立即进行解剖,若尚未死亡可用人工处死,如拉其头及尾部,使其颈椎脱臼,即刻死亡。二氧化碳减压器
  (3)将小白鼠胸腹部朝上,四肢用大头针固定于铺有纸张的解剖板上,用碘酒消毒整个胸腹部及四肢,左手用镊子提起耻骨部皮肤,右手持剪刀在其上剪开,然后由小口中将剪刀头部伸入,将皮肤分离,并沿正中线自耻骨到下腭处将皮肤剪开,四肢处皮肤亦用剪刀分离后剪开(注意不能将肌肉层剪破),将皮肤向两侧剥离,露出整个胸腹部,观察皮下组织及淋巴结有无水肿、出血和肿大等病变。
(4)另换无菌镊剪,左手持镊子先将腹壁提起,依照剪开皮肤的方法,右手持剪将腹壁自耻骨到横膈,横膈向两侧,耻骨至两腿处剪开(注意勿剪破肠)。然后将腹壁翻向两侧观察腹腔。如有渗出液则用接种环取渗出液接种于适当的培养基,并作涂片和染镜检。同时亦可剪取脾或肝脏,取切面作压迹涂片,如欲做组织切片检查时,可将脏器剪下浸入10%甲醛液内固定。
(5)再换一套无菌镊剪,将两侧肋骨沿锁骨中线切开,用镊子夹住胸骨下缘,将横膈肋骨缘剪断,将剪断的胸骨向上翻起暴露出胸腔,观察心肺有无病变及胸腔有无渗出液。用无菌镊子将心脏固定,剪开心包膜,烧灼心室表面,以无菌注射器插入心脏内取心血数滴,置血平板上进行划线分离培养(或把心脏剪成两半,将切面在平板面压印后,再行划线分离)。将血平板放入37 ℃培养箱培养24h,亦可将心脏剪开做压迹涂片。
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(6)将腹腔渗出液或脏器压迹涂片用革兰染和荚膜染法染镜检。女性站立式小便器
(7)7)动物尸体解剖完毕后,用垫在尸体下面的纸张将尸体包裹,集中后放焚烧炉中焚化。所用的剪刀、镊子、注射器等均应煮沸消毒,实验台用3%来苏儿消毒擦洗干净。

本文发布于:2024-09-24 21:21:10,感谢您对本站的认可!

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