饥饿和饱食对小鼠肝糖原的影响的实验
报告
实验三 饱食和饥饿大白鼠肝糖原含量的比较
实验三饱食和饥饿大白鼠肝糖原含量的比较
银钟花
人参切片机实验人:刘彦汶学号:20100331024 班级:针外2010七 同组人:郑婉碧、伍晓慧、刘恩茂、董摩扬、曲畅、付建平、石嘉恒 实验日期:2012年3月29日 指导老师:路雪雅
一、 实验目的
1(学习肝糖原的测定方法。
2(比较饱食和饥饿大白鼠肝糖原的含量
二、 实验原理
许多因素可以影响肝糖原的含量。如饱食后肝糖原含量增加，饥饿时肝糖原逐渐降低。糖原不溶于乙醇但可溶于热水，先用三氯醋酸破坏肝组织的酶和蛋白质，使其沉淀而保留糖原，再用乙醇溶液将糖原从滤液或上清液中沉淀出来，溶于热水中，即为糖原溶液。 糖原溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕，经酸水解可生成还原性的葡萄糖，后者可将碱性铜溶液(班氏试剂)中二价铜还原为氧化亚铜。利用上述性质可以进行饱食与饥饿肝糖原含量的比较。
1. 糖原+碘---棕红物质
2. 糖原+Hcl(水解)---葡萄糖+班氏试剂(Cu2+)+(OH-)--- Cu2O
三、 实验器材
水浴锅(100 oC)、研钵、白磁盘、旋涡混合器、离心机、手术机械、滤纸
变压器油泵四、 实验试剂
1、5,三2、0.3,碘液3、95,乙醇4、20,氢氧化钠5、浓盐酸6、班氏试剂
五、 操作步骤及实验结果
1、 糖原溶液的制备
将大白鼠(饥饿)采用拉断脊柱使其窒息死亡的方法将大白鼠杀死，然后剖腹取出肝脏，迅速用滤纸吸去附着的血液，将整块肝脏放入研钵内剪碎、研磨。再加5,三氯醋酸溶液20ml，再研磨到肝组织充分磨碎为止(饱食大白鼠，重复上述操作)。
栅栏门
过滤，每组取饱食和饥饿滤液各2ml于离心管(小试管)中，观察两种滤液并比较(解饿组滤液为淡黄，饱食组滤液为乳白)。
分别于滤液中加入等体积95,乙醇，混匀后离心5分钟(3000转/分钟)，比较两管糖原沉淀量(饥饿组无沉淀，饱食组有白沉淀)。
小心倾去上清液，于每管各加入蒸馏水1ml，玻璃棒搅起，水浴加热2分钟，即为糖原溶液
网络安全控制技术2、 糖原溶液的鉴定
3、 糖原水解液的比较
取试管两支，各加入饥饿鼠或饱食鼠干糖原溶液2ml，每管各加入浓盐酸10滴，置沸水浴中加热10分钟，取出冷却，然后用20,氢氧化钠中和(约20滴)，此即为肝糖原水解液。
解饿组滤液为淡黄，饱食组滤液为乳白，说明糖原溶液呈乳样光泽
在两种滤液中加入等体积95,乙醇，离心后发现饥饿组无沉淀，饱食组有白沉淀，而且沉淀加水水浴后溶解，说明糖原不溶于乙醇但可溶于热水。
在糖原溶液的鉴定的试验中，试管1中产生棕红物质，其他两个试管中均无变化，糖原溶液遇碘产生红棕物质。
在糖原水解液的比较的实验中，试管1溶液变砖红，其他两试管无明显变化，说明糖原经酸水解可生成还原性的葡萄糖，还原性的葡萄糖可将碱性铜溶液(班氏试剂)中二价铜还原为氧化亚铜。
上述现象都说明，饥饿大白鼠肝糖原含量明显比饱食大白鼠肝糖原含量少，甚至饥饿大白鼠肝脏中没有肝糖原。
问题分析
1、 研磨要充分，否则溶液中糖原可能不足而使实验现象不够明显。
2、 在溶液离心前须将对应位置上的溶液平衡，否则可能使离心不完全。
3、在糖原水解液的比较实验中，需加入过量的氢氧化钠溶液再
水浴加热，否则可能使实验现象不够明显。
篇二:饥饿对小鼠肝糖原影响的显微观察设计
饥饿对小鼠肝糖原影响的显微观察
僧侣鞋
一(实验用品
饲养笼，解剖盘，大头针，棉花，剪刀，镊子，解剖刀，溶蜡箱，切片机，载玻片，盖玻片，恒温箱，染缸，光学显微镜，各种浓度乙醇，二甲苯，石蜡，苏木精染液，盐酸-乙醇，氨水，伊红液，石炭酸-二甲苯混合液，1%过碘酸，Schiff 试剂，0.5%偏重亚硫酸钠(Na2S2O5)溶液，-吡啶混合液，0.5%~1%淀粉糖化酶溶液，加拿大树胶，蒸馏水(无菌水)，相同生理状态的健康小白鼠10只雄性小白鼠 二(试剂配制
1(Carnoy固定液:(甲醇?冰乙酸=3?1)，每次使用前需临时配制。 2(Schiff试剂:称取0.5g碱性品红加入到100ml煮沸的蒸馏水中(用三角瓶)，时时振荡，继续煮5min(勿使之沸腾)，充分溶解。然后冷却致50?时用滤纸过滤，滤液中加入10ml1mol/LHCl，冷却致25?时，加入0.5g偏重硫酸钠，充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24h(有时需要2至3天)，使其颜退至淡黄，然后加入0.5g活性碳，用力振荡一分钟，最后用粗滤纸过滤于棕瓶中，封瓶塞，外包黑纸。 3(苏木精染液
苏木素1g，无水乙醇10ml，硫酸铝钾20g，蒸馏水200ml，0.5g，冰醋酸，8ml，先用无水乙醇溶解苏木素，用蒸馏水加
热溶解硫酸铝钾;然后将该两液合并煮沸，加入，继续加热和搅拌溶
液至深紫，随即用冰水冷却，恢复至室温后过滤备用。使用前加入冰醋酸并混匀、过滤。 4( 盐酸,乙醇分化液 浓盐酸1 ml，70%乙醇99 ml 5(伊红液
伊红0.5 g，蒸馏水100 ml，无水氯化钙0.5 g 6(石炭酸-二甲苯混合液 石炭酸:二甲苯=1:3
7(吡啶混合液:醋酸16ml，无水吡啶24ml 三(实验程序
(一)实验材料饥饿处理
取8只健康雄性小白鼠, 体重25g，动物领回后, 正常喂养一天, 室温21?, 普通饲料, 自由进食及饮自来水。然后随机分成两组: 正常组4只, 普通饲料喂养，自由饮自来水; 饥饿组4只, 禁食仅供自来水。一天后，从两组中各随机取出2只小白鼠，进行肝组织切片观察。两天后，将剩下的小白鼠分别进行肝组织切片观察。 (二)肝组织石蜡切片制作与染 1(实验片处理 (1)固定
取1~2mm 厚的肝组织，用Carnoy 固定液固定，放冰箱2~4 h 。 (2)酒精脱水
依次经过95%酒精两次，每次20-30min，100%酒精两
次，分别为30、40min。 (3)二甲苯透明
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